Гамма интерфероновый тест на туберкулез где сделать

Квантифероновый тест – современный лабораторный метод диагностики туберкулеза. Методика рекомендована национальными ведомствами здравоохранения в качестве альтернативы кожным пробам в странах с низкой заболеваемостью туберкулезом (европейские страны, США, Австралия).

В России тест начали использовать несколько лет назад. Однако у нас он мало востребован. Квантифероновый тест — что это такое, и почему он не популярен в России — мы расскажем в этой статье.

Квантифероновый тест на туберкулез выявляет ту же реакцию иммунных клеток, что и Диаскинтест . Но с двумя отличиями:

Эти белки-антигены отсутствуют в вакцине БЦЖ . По этой причине анализ не дает положительной реакции у привитых детей, чем он и отличается в лучшую сторону от Манту .

О чем же говорит положительный квантифероновый тест:

• На наличие в организме туберкулезной палочки при так называемой латентной стадии, когда болезнь не проявляет себя никакими симптомами ;
• на присутствие туберкулезного возбудителя в стадии активного туберкулезного процесса.

Таким образом, квантифероновый тест назначается для выяснения: инфицирован человек туберкулезом или нет.

При этом тест не отвечает на вопрос является ли инфицирование первичным, латентной стадией заболевания, активным процессом или уже пролеченной формой.

Любой диагностический метод имеет два основных критерия:

Чувствительность показывает, может ли тестовая методика дать отрицательный результат при наличии заболевания. Этот показатель измеряется в процентах для каждой категории больных (первично инфицированные, с латентной формой и др.) отдельно. Затем его усредняют и считают, что чем выше процент, тем более чувствителен метод.

То есть 100% чувствительность говорит о том, что методика никогда не показывает ошибочный отрицательный результат.

Специфичность, наоборот, ограничивает параметр чувствительности, который при значениях, приближенных к 100%, может давать ошибочную положительную реакцию. Например, Манту, помимо туберкулезной палочки, дает положительный ответ у вакцинированных лиц.

То есть высокая специфичность метода свидетельствует о том, что он никогда не показывает ошибочный положительный результат.

Таблица. Чувствительность и специфичность различных тестов на туберкулез.

Проблема в том, что в России практически 100% взрослого населения является инфицированным туберкулезной палочной. При таком положении вещей делать квантифероновый тест взрослым не имеет смысла, т.к. в соответствии с усредненной чувствительностью метода он покажет наличие туберкулеза в той или иной его фазе у 84% людей. При этом примерно у 98% из этих людей заболевание никогда не перейдет в активную форму.

У детей этот тест за счет своей высокой специфичности достаточно эффективен. В то же время чувствительность метода не высока. То есть, используя только его, можно «пропустить» туберкулез примерно в 16% случаев. По этой причине российским детям сначала ставят высокочувствительную пробу Манту и далее при необходимости уточнения диагноза проводят квантифероновый тест.

Тест показан детям с сильной реакцией на Манту или с виражом Манту.

Для анализа берется кровь из вены.

Квантифероновый тест на туберкулез обладает рядом преимуществ:

• Высокая специфичность, т.е. метод никогда не показывает ошибочный положительный результат;
• лабораторный характер исследования, т.е. результаты более объективны, чем визуальная оценка кожных проб;
• может быть проведен любому человеку, в т. ч. людям с противопоказаниями к кожным пробам, с гиперчувствительностью к туберкулину;
• отсутствие побочных реакций;
• нет ограничений по применению – возможно в период острых вирусных инфекций , сразу после вакцинации.

У квантиферонового теста на туберкулез есть и недостатки:

• Может показывать ложноотрицательный результат из-за средней чувствительности метода;
• тест делается не в каждом городе;
• это достаточно дорогой анализ – в различных регионах он стоит от 1500 до 10000 руб.

Квантифероновый тест на туберкулез – это иммуноферментный анализ. В его основе лежит оценка количества высвобождаемого гамма-интерферона после стимуляции антигенами туберкулезной палочки.

Кровь для анализа собирается в три пробирки:

Пробирка Nil является отрицательно-контрольной. В нее добавляют гепарин. В норме гамма-интерферон выделяться не должен. Пробирка Mitogen положительно-контрольная. В нее добавляют фитогемагглютинин. В ответ выделяется гамма-интерферон. В этих двух пробирках проверяют нормальную реакцию иммунных клеток крови по выработке интерферона.

В пробирку Antigen вводятся антигены микобактерий, на которые иммунные клетки (в случае инфицирования) должны ответить выработкой интерферона. Реакция оценивается во взаимосвязи с результатом в контрольных пробирках.

В общем, это – сложная аналитическая методика, которая требует специальной подготовки биологического материала для исследования, определенного оборудования, компьютерную обработку полученной информации. Высокие требования предъявляются и к квалификации лаборанта.

Сдача крови на анализ проводится с утра натощак.

Метод не имеет противопоказаний.

Тест можно проводить во время респираторных заболеваний, сразу после проведения вакцинации.

Сделать квантифероновый тест на туберкулез в Москве сегодня не проблема. Существуют лаборатории в двух солидных институтах, которые проводят соответствующий анализ:

В обоих учреждениях услуга платная. Указанные НИИ не осуществляют забор крови. К ним в лабораторию нужно приносить уже забранную кровь в пробирке с гепарином. Время от забора до сдачи в лабораторию – не более 2 ч. Требуется соблюдение температурного режима при транспортировке крови до лаборатории (не охлаждать до отрицательных температур).

В противотуберкулезных диспансерах квантифероновый тест не делают.

ООО «Иммунотест» в Москве (ул. Советской армии, 3) производит забор крови на квантифероновый тест по будним дням, кроме пятницы, с 9.00 до 11.00. Для проведения анализа используется лабораторную базу НИИ Фтизиопульмонологии.

ООО «Инвитро» имеет офисы в каждом областном центре. Квантифероновый текст в Инвитро не проводится. В их арсенале есть другая известная методика – полимеразная цепная реакция на микобактерию туберкулеза. Однако считается, что в отношении туберкулеза этот анализ не информативен.

ООО «Лаборатория Гемотест» не проводит квантифероновый тест на туберкулез. Но так как один из их филиалов находится близко к НИИ Фтизиопульмонологии (ул. Новослободская, 36/1), то многие москвичи пользуются его услугами для забора крови. Пациенты самостоятельно относят пробирку с кровью в лабораторию НИИ.

Лабораторная служба «Хеликс», имеющая свои филиалы в различных российских городах, оказывает услуги по забору крови и проведению квантиферонового теста, по крайней мере, в некоторых санкт-петербургских отделениях. География анализа расширяется: для получения более точной информации по Хеликс в вашем регионе обращайтесь непосредственно в лабораторную службу.

Квантифероновый тест является лабораторным аналогом Диаскинтеста.

Он обладает примерно той же достоверностью, но не требует внутрикожного введения препарата.

Этот анализ ориентирован на лиц с подозрением на туберкулез, которым по каким-то причинам не могут быть проведены стандартные методы — аллергенные внутрикожные пробы Манту и Диаскинтест.

источник

Квантифероновый тест (QuantiFERON®-ТВ Gold) — это современный лабораторный тест, который позволяет выявить туберкулез в латентной (скрытой) и активной стадии.

Туберкулез – опасное инфекционное заболевание, вызванное микобактериями туберкулеза. Микобактерии туберкулеза могут поражать все органы и системы организма, чаще страдают органы дыхания, поэтому выделяют две формы туберкулеза: лёгочная и внелёгочная. При лёгочной форме поражаются лёгкие и бронхи, при внелёгочной форме: пищеварительная система (чаще дистальный отдел тонкого кишечника и слепая кишка); мочеполовая система (почки, мочевыводящие пути, половые органы у женщин: матка, трубы, придатки, у мужчин: простата, яички); нервная система (головной, спинной мозг); опорно-двигательная система (кости, чаще поражается позвоночник, суставы); кожа, глаза и др.

Основной путь передачи бактерии туберкулеза, является воздушно-капельный, который осуществляется при разговоре, кашле или чихании больного человека, именно этот путь заражения приводит к лёгочной форме туберкулеза. Чаще всего после инфицирования заболевание протекает латентно (скрыто), и лишь у некоторых, при определенных изменениях в организме переходит в активную стадию. Своевременная диагностика туберкулеза — это единственная возможность не допустить перехода латентной стадии заболевания в активную у инфицированных людей, и защитить здоровых людей от инфицирования, путем выявления зараженных.

Разберем по полочкам скрининговые специфические методы диагностики туберкулеза: на сегодняшний день существует 2 группы.

• 1 группа — это кожные тесты, сюда относится проба Манту и Диаскин тест.
• 2 группа — это IGRA-тесты, лабораторные исследования туберкулеза по крови человека, к ним относятся ТОЛЬКО: Квантифероновый тест и T-SPOT.TB (т-спот).

ОБРАТИТЕ ВНИМАНИЕ! ПЦР диагностика туберкулеза не подходит для скрининга выявления туберкулеза, т.к. для этого метода необходим материал из ОЧАГА предполагаемого туберкулеза.

ПЦР крови на микобактерию туберкулеза, будет положительна при туберкулезном сепсисе (заражение крови) и диссеминированном туберкулезе (самые тяжелые формы туберкулеза). В остальных случаях результат будет отрицательный, но это не означает, что человек не инфицирован туберкулезом.

ПЦР диагностика используется для быстрой диагностики открытых и закрытых форм туберкулеза, например у человека выставлен диагноз туберкулез легких, необходимо понять, опасен он для окружающих или нет, берется мокрота и определяется возбудитель в мокроте.

ПЦР положительная (рис.2) — туберкулезная палочка выделяется при чихании, кашле, разговоре, зараженный человек представляет опасность для окружающих. ПЦР отрицательная (рис.1) — туберкулезный очаг не сообщается с бронхом, человек не выделяет туберкулезную палочку в окружающую среду, но при этом он заражен туберкулезом и нуждается в лечении!

Поэтому данный метод не используется для скрининговой диагностики туберкулеза, т.к. он не может исключить или подтвердить факт инфицирования туберкулезом.

источник

В последние годы, наряду с пробой Манту, ВОЗ рекомендует использование Квантиферонового теста (QuantiFERON-TB Gold IT) для выявления больных туберкулезом. Квантифероновый тест – это современная альтернатива кожным тестам (манту, Диаскинтест), не имеющая противопоказаний и негативного влияния на организм, так как сам тест проводится вне организма: в пробирке с венозной кровью.

Квантифероновый тест для диагностики туберкулеза – это анализ крови на определение специфического гамма-интерферона, который выявляется только у инфицированных микобактерией туберкулеза. Для исследования берется венозная кровь утром строго натощак (или не менее чем через 8 часов после последнего приема пищи). Кровь исследуется в трёх специальных пробирках для исключения ложноотрицательного или ложноположительного результатов.

Тест превосходит по чувствительности кожные пробы, дает точный ответ только у инфицированных бактериями туберкулеза (M.tuberculosis). У неинфицированных или прошедших БЦЖ-вакцинацию ответ будет отрицательным (т.е. не реагирует на БЦЖ).

Плюсы (преимущества) квантиферонового теста:

• высокая специфичность (99%) и высокая чувствительность (89%);
• отсутствие противопоказаний для исследования;
• безопасность и отсутствие побочных реакций;
• отсутствие ложноположительных результатов в случае вакцинации БЦЖ;
• интерпретация результатов теста менее субъективна, чем интерпретация результатов кожных туберкулиновых тестов.

Минусы (недостатки) квантиферонового теста:

• не является законодательно закреплённым методом выявления туберкулеза, поэтому делается не бесплатно, а за «свой счёт»;
• высокая стоимость квантиферонового теста (минимум в Москве – 1900 рублей, в среднем 3500 рублей);
• тест возможно сделать пока только в крупных городах: Москве, Санкт-Петербурге, Новосибирске;
• в 11% случаев тест дает ложноотрицательную реакцию (100% диагностики туберкулеза не существует);
• тест не позволяет различить ЛТБИ (латентную туберкулёзную инфекцию) и активный туберкулёз.

Квантифероновый тест может быть использован вместо пробы Манту или Диаскинтеста во всех случаях, когда показано проведение кожных проб в качестве теста для диагностики туберкулеза. В качестве дополнительного метода исследования для подтверждения или опровержения сомнительных результатов кожных тестов. И особенно тест показан тем лицам, у которых имеются противопоказания к проведению пробы Манту и Диаскинтеста:

• индивидуальная непереносимость туберкулина;
• кожные заболевания и аллергические состояния в период обострения;
• дети, подростки и взрослые с высоким риском развития аллергической реакции;
• инфекционные заболевания в период обострения;
• васкулиты;
• эпилепсия.

Положительный результат квантиферонового теста свидетельствует в пользу диагноза туберкулеза; однако, инфекции другими микобактериями (например, M. kansasii) могут быть причиной положительных результатов.

* Стоимость актуальна на дату опубликования статьи.

источник

Квантифероновый тест – что это такое? Плюсы и минусы. Может ли квантифероновый тест заменить пробу Манту и диаскинтест в диагностике туберкулеза? Показания, подготовка и правила сдачи, где сделать, цена

Сайт предоставляет справочную информацию исключительно для ознакомления. Диагностику и лечение заболеваний нужно проходить под наблюдением специалиста. У всех препаратов имеются противопоказания. Консультация специалиста обязательна!

Квантифероновый (квантефероновый) тест представляет собой метод лабораторной диагностики на инфекцию M. tuberculosis, который позволяет выявлять как скрытые формы бессимптомного бактерионосительства, так и собственно развившийся туберкулез различных органов (легких, почек и др.).

Квантифероновый тест – это лабораторный непрямой метод выявления микобактерий туберкулеза в крови человека. Непрямым метод является потому, что основан на выявлении не самих микобактерий, а продуктов, которые вырабатываются иммунными клетками в ответ на наличие в организме микробов. То есть о наличии микобактерий результаты теста позволяют судить косвенно – если в крови определяются вещества, вырабатываемые иммунными клетками в ответ на наличие микробов, то это считается подтверждением инфицирования микобактериями.

Принцип и суть квантиферонового теста довольно непросты, так как его производство включает в себя два этапа – культуральный и последующий иммуноферментный. Рассмотрим это подробнее. Во-первых, в пробирке, в которой выполняется тест, находятся три антигена микобактерий туберкулеза: ESAT-6, CFP-10, TB7.7(p4). В норме эти антигены имеются на поверхности микобактерий, и их распознает иммунная система человека, как чужеродные, запуская соответствующий ответ с выработкой антител для уничтожения «чужих», попавших в организм.

Для производства первого культурального этапа теста кровь обследуемого человека вносится в пробирку с находящимися в ней антигенами микобактерий туберкулеза. Далее кровь инкубируется при температуре 37 o С в течение нескольких часов в этой пробирке, что имитирует попадание микобактерий туберкулеза в организм (только в качестве организма выступает набранная проба крови). И если в крови человека имеются микобактерии туберкулеза, то есть он был инфицирован в прошлом ими, то в процессе инкубации лимфоциты крови вырабатывают вещество, называемое гамма-интерфероном.

После завершения инкубации пробирки, содержащей смесь исследуемой крови и антигены микобактерий, начинается второй этап квантиферонового теста, который заключается в определении концентрации гамма-интерферона. Концентрация интерферона определяется методом иммуноферментного анализа (ИФА). То есть из пробирки отбирается проба плазмы и проводится ИФА на определение концентрации интерферона. Если концентрация интерферона оказывается низкой (ниже нормы), то результат анализа – отрицательный, то есть микобактерии туберкулеза в организме отсутствуют. Когда концентрация интерферона находится в пограничной области, результат считается сомнительным, то есть невозможно однозначно сказать, имеются микобактерии в организме или нет. В таких случаях рекомендуется провести другие методы диагностики или повторить тест через некоторое время. Если же концентрация интерферона оказывается высокой (выше нормы), то это свидетельствует о том, что в организме человека присутствуют микобактерии.

Однако положительный результат квантиферонового теста не означает, что человек обязательно болен туберкулезом, и в этом существенный минус анализа. Дело в том, что положительный результат свидетельствует только о том, что организм человека «знаком» с микобактериями туберкулеза, а это может означать либо наличие заболевания (то есть человек болен туберкулезом), либо перенесенный в прошлом туберкулез, либо простое инфицирование микобактериями. На практике положительный квантифероновый тест означает только инфицирование микобактериями, которое наблюдается у 90 % взрослого населения России и других стран европейской части бывшего СССР. Причем 98 % инфицированных микобактериями туберкулеза никогда в жизни не заболевают самим туберкулезом, а бактерия просто живет в организме, подобно вирусу герпеса, который, однажды попав в ткани, остается в них пожизненно. И так же, как и герпес, микобактерия в подавляющем большинстве случаев не вызывает самого заболевания, просто существуя в организме, как условно-патогенный микроб.

А квантифероновый тест не позволяет различить обычного носительства микобактерий туберкулеза (имеющегося у 90 % взрослого населения бывшего СССР) и собственно заболевания туберкулезом. Тест дает заключение только о наличии или отсутствии микобактерий туберкулеза в организме. Поэтому, если результат теста положительный, то придется пройти дополнительные обследования, чтобы врач смог выяснить, какой же процесс имеет место в конкретном случае – простое инфицирование и носительство микобактерий или же туберкулез. В качестве дополнительных к квантифероновому тесту для отличения носительства микобактерий и туберкулеза назначаются проба Манту, диаскинтест, рентген/флюорография, УЗИ, анализ мочи на микобактерии.

Таким образом, очевидно, что квантифероновый тест является малополезным для диагностики туберкулеза в большинстве случаев, так как он будет давать положительный результат у 98 % инфицированных микобактериями, но не болеющих туберкулезом. Именно поэтому по-прежнему основным методом раннего выявления туберкулеза у взрослых людей в России является ежегодная флюорография, а у детей – проба Манту и/или диаскин тест. Конечно, проба Манту и диаскин тест тоже имеют свои минусы, но они, во-первых, не так дорогостоящи, а во-вторых, не делают здоровых людей больными.

Под специфичностью теста понимают процент случаев, когда он дает положительный результат при отсутствии заболевания. То есть специфичность теста отражает ложноположительные результаты, когда заболевание выявляется там, где его нет. Специфичность квантиферонового теста высока – 99 %, что означает, что он выявляет инфицирование микобактериями там, где его нет, только в 1 % случаев. Как правило, подобные ложноположительные результаты обусловлены инфицированием человека видами микобактерий (M. kansasii, M. szulagai, M. marinum), которые не вызывают туберкулез никогда. Ложноположительные результаты квантиферонового теста при инфицировании нетуберкулезными микобактериями обусловлены тем, что эти виды микробов так же, как и туберкулезные микобактерии, на своей поверхности несут антигены ESAT-6, CFP-10, TB7.7(p4).

Таким образом, очевидно, что и положительный результат квантиферонового теста не является 100 % подтверждением того, что человек инфицирован микобактериями туберкулеза.

Совершенно однозначным плюсом квантиферонового теста является его высокая специфичность, благодаря которой он не дает ложноположительных результатов у людей, которые ранее были привиты вакциной Кальметта-Герена (БЦЖ) и у которых имеется аллергическая реакция на туберкулин (компонент пробы Манту). То есть если имеется ложноположительная реакция на пробу Манту вследствие сделанной в прошлом прививки БЦЖ или аллергии на туберкулин, то квантифероновый тест является методом выбора диагностики туберкулеза.

Кроме того, квантифероновый тест может проводиться у взрослых и детей, которым по каким-либо причинам (например, наличие кожных заболеваний и др.) противопоказаны кожные пробы (Манту, диаскинтест) на туберкулез.

В отличие от пробы Манту и диаскинтеста, квантифероновый тест не дает никаких побочных реакций, так как проводится в пробирке и для него только забирается проба крови из вены. К сожалению, проба Манту и диаскинтест могут вызывать побочные реакции, в том числе аллергические, так как их проведение связано с введением препарата под кожу (то есть в организм).

Также к плюсам квантиферонового теста можно отнести то, что его результаты более объективны по сравнению с пробами Манту и диаскинтестом. Ведь результат квантиферонового теста представляет собой измеренную концентрацию гамма-интерферона в сыворотке крови человека, а для оценки пробы Манту и диаскинтеста проводится измерение образовавшейся в месте введения препарата папулы. Соответственно, оценка размеров и состояния папулы целиком зависит от медицинского работника, который ее производит, а потому в такой ситуации довольно велик риск субъективности и связанной с этим некачественной оценки реакции.

Квантифероновый тест, в отличие от пробы Манту и диаскинтеста, можно пройти в любое время, так как для него нет противопоказаний, таких, как, например, острый период инфекций, обострение любых имеющихся хронических заболеваний (в том числе аллергии), период после вакцинации (прививки), карантин в учреждениях и т.д.

Отдельно следует отметить, что квантифероновый тест чувствителен и позволяет выявлять инфицирование микобактериями у людей со сниженным иммунитетом, например, у ВИЧ-инфицированных, онкобольных, страдающих аутоиммунными заболеваниями, алкоголизмом, сахарным диабетом, эпилепсией, почечной недостаточностью, принимающих препараты-иммуносупрессоры, наркотики и т.д. У данной группы людей (со сниженным иммунитетом) проба Манту, как правило, неинформативна, и дает отрицательный результат даже на фоне имеющегося активного туберкулеза.

Таким образом, резюмируя, можно коротко перечислить плюсы квантиферонового теста следующим образом:

• Отсутствие ложноположительных результатов у ранее привитых БЦЖ или у имеющих индивидуальную повышенную чувствительность к туберкулину;
• Возможность производить исследование на раннее выявление инфицированности микобактериями у людей, которым противопоказано проведение кожный проб Манту и диаскинтеста;
• Отсутствие побочных эффектов, так как для исследования забирается кровь, а не в организм вводится препарат;
• В организм не вводится никаких лекарственных препаратов, поэтому квантифероновый тест не отражается на общем самочувствии и состоянии человека;
• Объективная (а значит более точная по сравнению с субъективной) оценка результатов;
• Тест можно пройти в любое время и его результат не зависит от имеющихся у человека тяжелых хронических заболеваний, простуды или недавней вакцинации;
• Исследование дает положительный результат в случае инфицированности микобактериями людей со сниженным иммунитетом, у которых кожные пробы (Манту или диаскинтест), как правило, отрицательные.

Однако, помимо перечисленных плюсов, у квантиферонового теста имеется и ряд довольно существенных минусов.

Во-первых, несомненным минусом исследования является его относительно низкая чувствительность, вследствие чего в среднем в 16 % случаев туберкулез не выявляется. А в некоторых исследованиях указывается и еще больший процент ложноотрицательных результатов (до 25 %) квантиферонового теста у людей, которые точно больны туберкулезом. К тому же, ложноотрицательный результат может быть обусловлен имеющимися у человека нарушением функции иммунной системы, ненадлежащим обращением с пробирками после забора в них крови, ошибками при проведении самого анализа или вовсе недавним заражением микобактериями, когда иммунные клетки еще не успели среагировать на микробы. Это означает, что при отрицательном результате исследования нельзя быть полностью уверенным в том, что туберкулез у человека отсутствует, что, в конечном, итоге, влечет за собой необходимость проведения и других дополнительных тестов.

Во-вторых, положительный результат квантиферонового теста не свидетельствует о заболевании человека туберкулезом. И потому после получения положительного результата исследования для отличения носительства микобактерий от заболевания туберкулезом нужно проводить в обязательном порядке дополнительные обследования (такие, как бактериологическое и микроскопическое исследование мокроты и мочи, рентген грудной клетки и т.д.). Кроме того, ложноположительный результат квантиферонового теста может быть обусловлен неправильным проведением исследования или инфицированием человека микобактериями, которые не вызывают развития туберкулеза (M. kansasii, M. Szulagai, M. marinum).

А учитывая тот факт, что микобактериями инфицированы 90 % населения России, то практически у всех взрослых квантифероновый тест будет положительным, но реально туберкулез будет только примерно у 2 % из этих людей. А, значит, при использовании этого исследования для массовой диагностики придется дополнительно обследовать большое число людей, у которых туберкулеза нет, что связано с высокими затратами и повышением риска заболевания этих людей на фоне испытываемого ими стресса и лишнего посещения медицинских учреждений.

В-третьих, квантифероновый тест не позволяет отличить носительство микобактерий от реального заболевания туберкулезом или вылеченного в прошлом заболевания. И более того, наличие микобактерий туберкулеза в организме называется латентной туберкулезной инфекцией, а не носительством, то есть вполне здоровый человек, не имеющий развивающегося в организме заболевания, считается потенциально больным. И таким потенциально больным приходится назначать профилактическое лечение противотуберкулезными антибиотиками, что, естественно, дорого, неудобно и чревато большим количеством побочных эффектов. Кроме того, такое профилактическое применение противотуберкулезных антибиотиков может привести к перерождению микобактерий в такие формы, которые будут устойчивы к действию имеющихся лекарств. И в таком случае, если носитель микобактерий реально заболеет туберкулезом, риск того, что инфекция окажется антибиотикоустойчивой, очень высок. А тогда придется применять дорогие антибиотики или комбинации нескольких антибиотиков, что приведет к увеличению количества или усилению выраженности побочных эффектов этих препаратов.

В-четвертых, несмотря на то, что производитель набора для проведения квантиферонового теста рекомендует его как хороший метод выявления туберкулеза и инфицирования микобактериями у людей, страдающих иммунодефицитом (ВИЧ-инфицированные, онкобольные, страдающие сахарным диабетом, силикозом, почечной недостаточностью, принимающие препараты-иммуносупрессоры и т.д.), имеются данные о том, что у данных категорий людей исследование может давать некорректные, сомнительные или вовсе неверные результаты.

В-пятых, кровь для проведения квантиферонового теста должна быть запущена в работу в течение 12 часов, а любые ошибки в заборе или хранении проб могут приводить к неверным результатам.

Таким образом, коротко резюмируя, минусы квантиферонового теста можно описать следующим образом:

• Относительно высокий риск ложноотрицательных результатов у людей, реально болеющих туберкулезом;
• Отрицательный результат при недавнем заражении микобактериями;
• Необходимость проведения во многих случаях дополнительных диагностических обследований для выявления возможного туберкулеза, как при отрицательном, так и при положительном результате анализа;
• Невозможность отличения простого инфицирования микобактериями от активного туберкулезного процесса и в прошлом пролеченного туберкулеза;
• Теоретическая возможность некорректных и трудных в истолковании результатов теста у людей, страдающих иммунодефицитом (ВИЧ-инфицированные, онкобольные, страдающие сахарным диабетом, силикозом, почечной недостаточностью, принимающие препараты-иммуносупрессоры и т.д.);
• Необходимость точного исполнения инструкций по обработке проб крови.

Хотя многие частные и государственные медицинские учреждения, проводящие квантифероновый тест на коммерческой основе, заявляют, что он заменяет пробу Манту и диаскинтест, с точки зрения многих опытных врачей-фтизиатров это утверждение не совсем верно.

К сожалению, диагностика туберкулеза сложна, и ни один из существующих в настоящий момент времени методов не позволяет со 100 % точностью во всех случаях выявлять это инфекционное заболевание. А потому различные методы диагностики туберкулеза не заменяют и не исключают друг друга, а являются дополняющими. Соответственно, и квантифероновый тест не должен рассматриваться в качестве замены пробы Манту или диаскинтеста, его нужно полагать дополняющим исследованием, так как он имеет и преимущества, и минусы перед другими методиками.

Например, проба Манту обладает практически 100 % чувствительностью, то есть она позволяет выявлять туберкулез почти во всех случаях. Более того, проба Манту – это единственный тест, дающий положительный результат при раннем развитии инфекции, когда еще нет клинических признаков, и диаскинтест и квантифероновый тест – отрицательны.

Но, к сожалению, проба Манту часто дает ложноположительные результаты (в 30 – 50 % случаев), а потому при получении положительного результата пробы приходится также проводить дополнительные исследования. Например, проба Манту может быть положительной у людей, в прошлом привитых вакциной БЦЖ или у имеющих индивидуальную повышенную чувствительность к туберкулину (компоненту пробы Манту).

Зато диаскинтест не дает ложноположительной реакции у привитых вакциной БЦЖ, но дает ложноотрицательный результат на ранних стадиях развития инфекции.

Поэтому при вираже пробы Манту (когда после уменьшения вдруг появляется большой прирост размера папулы в месте введения препарата) рекомендуется выполнить еще и диаскинтест, и квантифероновый тест (или только диаскинтест). В такой ситуации, если и диаскинтест, и квантифероновый тест отрицательны, то вираж пробы Манту считается спровоцированным индивидуальной чувствительностью организма к туберкулину, аллергией или некими имеющимися у человека особенностями.

Если же диаскинтест отрицателен, а квантифероновый тест положителен, то, скорее всего, человек инфицирован и в его организме в скрытой форме протекает инфекционный процесс. В подобной ситуации врач может предложить профилактическое лечение или через два месяца повторную сдачу диаскинтеста. Ведь если через два месяца диаскинтест будет отрицательным, то это означает, что когда-то произошло инфицирование микобактериями, но они находятся в организме в неактивном состоянии, туберкулез отсутствует и профилактическое лечение не нужно.

Таким образом, квантифероновый тест является не заменой пробы Манту и диаскинтеста, а их дополнением. Ведь квантифероновый тест позволяет только выявить наличие микобактерий туберкулеза в организме, но вот отличить инфицирование от реального туберкулезного процесса – нет. Проба Манту же дает возможность отследить ответ на прививку вакциной БЦЖ и состояние эффективности иммунитета при контакте с микобактериями. А диаскинтест позволяет оценить активность микобактерий туберкулеза в организме в текущий момент времени и, соответственно, решить вопрос о назначении профилактического лечения. Таким образом, очевидно, что все три анализа являются взаимодополняющими, и если результат одного заставляет сомневаться в том, необходимо ли человеку лечение туберкулеза, то следует провести или оба других анализа, или один из них.

Несмотря на то, что производитель тест-системы указывает, что результат не зависит от имеющихся у человека в текущий момент времени инфекционных заболеваний (ОРВИ, грипп и др.) или обострения патологий внутренних органов, все же сотрудники лабораторий рекомендуют дождаться выздоровления от инфекции, и только после этого сдавать анализ. Как показала практика, острый инфекционный процесс в организме может стать источником ложноположительного результата квантиферонового теста, и в таком случае придется пересдавать кровь через 4 – 5 недель для получения точного результата.

Какой-либо подготовки перед сдачей крови на квантифероновый тест не требуется, поэтому накануне можно вести обычный образ жизни.

Однако кровь следует сдавать утром, строго натощак, минимум после 8-часового голодания. То есть сдать кровь на квантифероновый тест можно только по прошествии 8 часов после последнего приема пищи. Для исследования берется кровь из вены.

Для правильного проведения и корректной оценки результатов кровь для квантиферонового теста забирается в три специальные пробирки, одна из которых является отрицательным контролем, вторая – положительным контролем, и третья – собственно испытуемой. Правильная и точная оценка результатов анализа возможна только при постановке реакции во всех трех пробирках и учете ответа в положительном и отрицательном контролях.

В каждую пробирку набирается 1 мл крови из вены, после чего они плотно закрываются прилагающимися крышками и легко встряхиваются примерно 10 раз, чтобы кровь полностью покрыла стенки пробирок. Нельзя энергично и слишком усердно встряхивать пробирки, так как это может привести к отслоению геля, и в таком случае забор придется производить в новые пробирки.

После заполнения кровью перед началом производства квантиферонового теста пробирки с кровью можно хранить не более 12 – 16 часов и только при комнатной температуре (17 – 25 o C). Недопустимо хранение пробирок с пробами крови в холодильнике или морозильнике.

Если по каким-либо причинам невозможно набрать по 1 мл крови сразу в пробирки для квантиферонового теста, то можно набрать 5 мл венозной крови в обычную пробирку, предварительно налив в нее антикоагулянт гепаринат лития. Другие антикоагулянты (цитрат натрия, ЭДТА) использовать нельзя, так как они могут влиять на результаты теста. Кровь в пробирке с гепаринатом натрия может храниться до начала инкубации в специальных пробирках также 12 – 16 часов при комнатной температуре. То есть при необходимости в пробирку с гепаринатом натрия набирается 5 мл венозной крови, которую в течение 12 – 16 часов можно доставить в лабораторию и перелить в специальные пробирки для проведения квантиферонового теста.

Результат квантиферонового теста содержит три обязательных параметра, а именно, концентрация гамма-интерферона в положительном контроле, отрицательном контроле и испытуемой пробе. И для прочтения результата нужно учитывать показатели гамма-интерферона во всех трех пробирках (два контроля и проба).

Пробирка с отрицательным контролем называется NIL, с положительным контролем – Mitogen, а с пробой – TB-антиген. Прочтение результатов квантиферонового теста представлено в таблице ниже.

* В данном параметре должна указываться концентрация гамма-интерферона в пробирке с пробой за вычетом концентрации гамма-интерферона в отрицательном контроле.
** В данном параметре должна указываться концентрация гамма-интерферона в пробирке с положительным контролем за вычетом концентрации гамма-интерферона в отрицательном контроле.

Соответственно, после получения результатов теста, в котором указаны концентрации гамма-интерферона в трех пробирках (положительной контрольной, отрицательной контрольной и испытуемой), можно по приведенной выше таблице посмотреть самостоятельно, как интерпретировать эти цифры (положительный, отрицательный или сомнительный результаты).

Например, концентрация гамма-интерферона в пробирке с отрицательным контролем равна 4 МЕ/мл, в пробе – 0,75 МЕ/мл, а в положительном контроле – 2 МЕ/мл. Так как в пробе концентрация больше – 0,35 МЕ/мл, то нужно понять, эта цифра больше или меньше 25 % от значения отрицательного контроля. Отрицательный контроль равен 4 МЕ/мл, значит 25 % от этой цифры составляет 1 МЕ/мл. В нашем примере в пробе концентрация гамма-интерферона равна 0,75 МЕ/мл, что меньше 1 МЕ/мл, а значит меньше 25 % от значения отрицательного контроля. Таким образом, итоговый результат квантиферонового теста – отрицательный.

Т спот тест правильно пишется и называется T-SPOT.TB. По своей сути T-SPOT.TB – это практически такое же исследование, как и квантифероновый тест, поскольку у пациента проводится забор крови, и она инкубируется в пробирках с антигенами микобактерий туберкулеза. Только при производстве квантиферонового теста после инкубации крови производится измерение в ней количества гамма-интерферона, а при выполнении T-SPOT.TB измеряется количество самих иммунных клеток (лимфоцитов), вырабатывающих гамма-интерферон. Поэтому, в принципе, и квантифероновый тест, и T-SPOT.TB являются способами непрямой диагностики инфицирования микобактериями туберкулеза, основанными на одном и том же методе. Просто в одном методе проводится измерение одного продукта, а в другом – другого, получаемого в результате одной и той же реакции в одинаковых пробирках.

С 2016 по 2018 годы в России квантифероновый тест не выполнялся. Причины прекращения применения исследования не были оглашены публично, но можно предположить, что такое волевое решение органов здравоохранения стало ответом на то, что родители детей, у которых оказался положительным результат квантиферонового теста, сталкивались с серьезными трудностями, доказывая, что ребенок здоров, не болен туберкулезом, а просто инфицирован микобактериями, как и 90 % взрослого населения страны.

В настоящий момент (с июня 2018 года) квантифероновый тест разрешен к выполнению в России. Квантифероновый тест и его аналог – T-SPOT.TB (Т спот тест) производят многие частные лаборатории в крупных городах и лаборатории при НИИ туберкулеза.

С июня 2018 года квантифероновый тест в России разрешен.

Автор: Наседкина А.К. Специалист по проведению исследований медико-биологических проблем.

источник

T-SPOT.TB – иммунодиагностика туберкулезной инфекции, тест высвобождения гамма-интерферона (T-SPOT.TB – Interferon-Gamma Release Assays, IGRA)

Исследование крови, допустимое в качестве альтернативы кожному тесту (проба Манту) для выявления туберкулезной инфекции.

Туберкулез – инфекционное хроническое заболевание, вызываемое микобактериями туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis complex). Варианты развития ситуации после проникновения возбудителя туберкулеза в организм человека следующие:

• полная элиминация (удаление) микобактерий туберкулеза из организма;
• развитие первичного туберкулеза (при быстром росте и размножении бактерий);
• «латентная инфекция» (микобактерии персистируют в организме в неактивном состоянии, обуславливая стойкий иммунный ответ на антигены возбудителя при отсутствии клинических проявлений активной формы заболевания). Это состояние у многих инфицированных может сохраняться на протяжении всей жизни. Такие лица не распространяют инфекцию, но у части пациентов латентная инфекция в течение жизни может перейти в клинически манифестированное заболевание. Риск прогрессии латентной инфекции в активное заболевание увеличивается при ослаблении иммунной системы.

Активная туберкулезная инфекция диагностируется по комплексу клинических симптомов, медицинской истории пациента, данным рентгенологических исследований и результатам прямых методов лабораторного выявления Mycobacterium tuberculosis в мокроте или мазках (микробиологические культуральные методы, выявление ДНК возбудителя с применением ПЦР).

Диагностика латентной инфекции затруднена отсутствием клинических и рентгенологических признаков заболевания, а также отсутствием возбудителя в пробах доступного биоматериала. Однако ее выявление важно для определения лиц, нуждающихся в контроле и превентивной терапии.

В настоящее время существуют два подхода к выявлению вероятной латентной инфекции:

1. in vivo: внутрикожные тесты с очищенным или рекомбинантным туберкулезным аллергеном (проба Манту, Диаскинтест);
2. in vitro: оценка ответа иммунных клеток обследуемого на антигены микобактерий туберкулеза по высвобождению гамма-интерферона (IGRA-тесты).

Оба подхода основаны на оценке характера иммунной реакции человека на антигены возбудителя, т. е. не являются методами прямого выявления инфекционного агента.

В связи с достаточно высокой распространенностью туберкулеза в нашей стране, Министерство здравоохранения РФ рекомендует ежегодно проводить скрининговое обследование детей в возрасте от 1-го года до 17-ти лет на наличие туберкулезной инфекции (в том числе при поступлении в детские сады и школы). Профилактическое скрининговое обследование обычно проводят с использованием внутрикожных проб. При наличии определенных противопоказаний или информированном отказе родителей от применения внутрикожных проб ребенку допускается назначение альтернативных методов обследования. Они включают исследование крови, основанное на выявлении высвобождения гамма-интерферона специфически сенсибилизированными лимфоцитами. На данный момент имеются два коммерческих диагностических теста этого направления: 1) QuantiFERON®-TB Gold; и 2) T-SPOT.TB (зарегистрирован в России).

Тест T-SPOT.TB допускается к использованию клиническими рекомендациями МЗ РФ и Российского общества фтизиатров по выявлению и диагностике туберкулеза у детей (2017). В соответствии с рекомендациями, при проведении скринингового обследования детей отрицательный результат T-SPOT.TB при отсутствии клинических симптомов заболевания (респираторного и интоксикационного характера, других локальных патологических проявлений) позволяет врачу-фтизиатру выдать справку об отсутствии у ребенка в настоящий момент активного туберкулеза.

К достоинствам этого метода можно отнести то, что подбор специфических антигенов исключает ложноположительные реакции, связанные с предшествующей вакцинацией БЦЖ (такие антигены отсутствуют на линиях Bacillus Calmette-Guerin, BCG) и перекрестными реакциями с большинством нетуберкулезных микобактерий окружающей среды (за исключением M. kansasii, M. szulgai и M. marinum). Напротив, лица, инфицированные микобактериями туберкулезного комплекса (M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum, M. microti, M. canetti) обычно имеют в крови Т-клетки, распознающие эти и другие антигены таких бактерий.

T-SPOT.TB тест не позволяет различать латентную инфекцию и активное заболевание.

Следует учитывать, что чувствительность и специфичность подобных методов в целях скрининга туберкулезной инфекции не достигают 100%. Поэтому такие тесты следует применять с учетом общей оценки индивидуального риска в комплексе со стандартными методами диагностики.

Материал для исследования: цельная кровь (с литий гепарином) – 2 пробирки, 4 мл.

источник

Сегодня существует альтернатива традиционным Манту и Диаскинтест (дст) – это квантифероновый (он же интерфероновый) тест в инвитро. Все три способа помогают обнаружить туберкулез на ранних его стадиях.

Метод квантифиронового теста перекочевал из стран, где заболеваемость туберкулезом на порядок ниже (Европа, США, Австралия). Ученые прорабатывают вариант замены традиционной диагностики на данный тест.

Вокруг этого ведутся споры, поскольку некоторые считают, что нельзя отменять систему исследований, которая на протяжении долгого времени давала позитивные результаты.

Их оппоненты доказывают крайнюю объективность такого теста и возможность его применения даже людям с аллергическими реакциями на туберкулин.

Сейчас метод нельзя назвать превалирующим, но он существует как альтернативное решение.

Особенно полезным это новшество оказалось для людей, которым противопоказано делать манту или дст, а также для детей в период карантина.

Чем отличается квантифероновый тест на туберкулез в инвитро от двух остальных способов диагностики?

Можно выделить такие отличия теста от манту и дст: при квантифироновом тесте не вводят подкожных инъекций, а используют взятую венозную кровь (для дальнейшей проверки на количество гамма-интерферона), тогда как при других способах используются подкожные инъекции, что исключает их применение при заболеваниях или ослабленном иммунитете.

Поскольку в первом случае нет контакта с организмом, то нет и побочных эффектов, во втором – могут быть побочные реакции, если человек не переносит вводимое вещество.

Не может быть запрета на квантифероновый тест, потому что он проводится не в организме непосредственно, манту и дст могут быть запрещены, при хронических заболеваниях или обострениях.

При проведении дст и теста в инвитро не бывает реакции на БЦЖ, а при манту бывает реакция на антитела после БЦЖ.

Схема проведения квантиферонового теста в инвитро следующая: пациент сдает необходимое количество венозной крови в специально организованных пунктах. При этом кровь можно брать только при условии, что человек не ел на протяжении восьми часов.

Дальше кровь размещают в три пробирки и анализ нацелен на сканирование наличия в крови гамма-интерферона, который вырабатывается только у людей, заболевших туберкулезом.

Гамма-интерферон выделяется Т-лимфоцитами при нахождении микробактерий туберкулеза.

Инвитро способен определить белки, что имеются в составе микробактерии туберкулеза двух типов: человеческого и бычьего, поскольку на них вырабатываются антитела.

Так происходит объективное исследование наличия возбудителя туберкулеза в организме через сканирование гамма-интерферона в крови.

Также в случае положительного результата при прохождении теста необходимо провести работу по дифференциации найденного.

Она направлена на разграничение возбудителей туберкулеза и других микобактериоз, которые могут быть выявлены в процессе анализа.

Во время неоднократного проведения теста в инвитро было обнаружено, что третья часть пациентов имеет в крови микобактерии. Несмотря на это, туберкулез может развиться лишь у 5-9 % людей.

Умножают риск развития заболевания такие неблагоприятные факторы:

1. Контакт с людьми, владеющими открытой формой туберкулеза (чаще всего это медики или родственники).
2. Слабый иммунитет (сюда относят людей ВИЧ-инфицированных, диабетиков или вышедших из заключения).

Квантиференовой тест может быть назначен в случаях:

1. Если манту дал положительный результат.
2. Если у пациента были контакты с больным туберкулезом.
3. Если наблюдается высокий риск контактирования с возбудителем.
4. Если у пациента есть противопоказания к традиционной туберкулинодиагностике или дст.
5. В случае обследовании мигрантов.

Преимущества квантиферонового теста сравнительно с дст и манту:

• Нет побочных эффектов. Это обусловлено тем, что непосредственно анализ проводиться после изъятия пробы;
• Высокая специфичность. Результаты теста не могут быть ложноположительными.
• Отсутствие ограничений в проведении. Квантифероновый тест можно проводить даже при протекании острых вирусных заболеваний или сразу после вакцинации;
• Объективность результатов. При таком методе исследования результаты добываются лабораторным путем, что на порядок объективнее, чем при визуальном анализе кожных проб;
• Возможность применять людям, которые имеют аллергические реакции на туберкулин или противопоказания к кожным пробам;

Как и в каждом методе анализа, в квантифироновом тесте в инвитро есть свои недостатки.

Среди них: исследование (сравнительно с манту и дст) дорогостоящее; может показывать ложноотрицательный результат, поскольку владеет средней чувствительностью; невозможность определить латентная форма туберкулеза в организме или непосредственно воспаление.

Отдельной проблемой является пока нераспространенность пунктов, где сделать такой тест возможно.

Так, в России центры расположены только в крупнейших городах (Москва, Санкт-Петербург, Новосибирск), что однозначно усложняет доступ к такого рода исследованию.

источник