Сегодня существует альтернатива традиционным Манту и Диаскинтест (дст) – это квантифероновый (он же интерфероновый) тест в инвитро. Все три способа помогают обнаружить туберкулез на ранних его стадиях.
Метод квантифиронового теста перекочевал из стран, где заболеваемость туберкулезом на порядок ниже (Европа, США, Австралия). Ученые прорабатывают вариант замены традиционной диагностики на данный тест.
Вокруг этого ведутся споры, поскольку некоторые считают, что нельзя отменять систему исследований, которая на протяжении долгого времени давала позитивные результаты.
Их оппоненты доказывают крайнюю объективность такого теста и возможность его применения даже людям с аллергическими реакциями на туберкулин.
Сейчас метод нельзя назвать превалирующим, но он существует как альтернативное решение.
Особенно полезным это новшество оказалось для людей, которым противопоказано делать манту или дст, а также для детей в период карантина.
Чем отличается квантифероновый тест на туберкулез в инвитро от двух остальных способов диагностики?
Можно выделить такие отличия теста от манту и дст: при квантифироновом тесте не вводят подкожных инъекций, а используют взятую венозную кровь (для дальнейшей проверки на количество гамма-интерферона), тогда как при других способах используются подкожные инъекции, что исключает их применение при заболеваниях или ослабленном иммунитете.
Поскольку в первом случае нет контакта с организмом, то нет и побочных эффектов, во втором – могут быть побочные реакции, если человек не переносит вводимое вещество.
Не может быть запрета на квантифероновый тест, потому что он проводится не в организме непосредственно, манту и дст могут быть запрещены, при хронических заболеваниях или обострениях.
При проведении дст и теста в инвитро не бывает реакции на БЦЖ, а при манту бывает реакция на антитела после БЦЖ.
Схема проведения квантиферонового теста в инвитро следующая: пациент сдает необходимое количество венозной крови в специально организованных пунктах. При этом кровь можно брать только при условии, что человек не ел на протяжении восьми часов.
Дальше кровь размещают в три пробирки и анализ нацелен на сканирование наличия в крови гамма-интерферона, который вырабатывается только у людей, заболевших туберкулезом.
Гамма-интерферон выделяется Т-лимфоцитами при нахождении микробактерий туберкулеза.
Инвитро способен определить белки, что имеются в составе микробактерии туберкулеза двух типов: человеческого и бычьего, поскольку на них вырабатываются антитела.
Так происходит объективное исследование наличия возбудителя туберкулеза в организме через сканирование гамма-интерферона в крови.
Также в случае положительного результата при прохождении теста необходимо провести работу по дифференциации найденного.
Она направлена на разграничение возбудителей туберкулеза и других микобактериоз, которые могут быть выявлены в процессе анализа.
Во время неоднократного проведения теста в инвитро было обнаружено, что третья часть пациентов имеет в крови микобактерии. Несмотря на это, туберкулез может развиться лишь у 5-9 % людей.
Умножают риск развития заболевания такие неблагоприятные факторы:
- Контакт с людьми, владеющими открытой формой туберкулеза (чаще всего это медики или родственники).
- Слабый иммунитет (сюда относят людей ВИЧ-инфицированных, диабетиков или вышедших из заключения).
Квантиференовой тест может быть назначен в случаях:
- Если манту дал положительный результат.
- Если у пациента были контакты с больным туберкулезом.
- Если наблюдается высокий риск контактирования с возбудителем.
- Если у пациента есть противопоказания к традиционной туберкулинодиагностике или дст.
- В случае обследовании мигрантов.
Преимущества квантиферонового теста сравнительно с дст и манту:
- Нет побочных эффектов. Это обусловлено тем, что непосредственно анализ проводиться после изъятия пробы;
- Высокая специфичность. Результаты теста не могут быть ложноположительными.
- Отсутствие ограничений в проведении. Квантифероновый тест можно проводить даже при протекании острых вирусных заболеваний или сразу после вакцинации;
- Объективность результатов. При таком методе исследования результаты добываются лабораторным путем, что на порядок объективнее, чем при визуальном анализе кожных проб;
- Возможность применять людям, которые имеют аллергические реакции на туберкулин или противопоказания к кожным пробам;
Как и в каждом методе анализа, в квантифироновом тесте в инвитро есть свои недостатки.
Среди них: исследование (сравнительно с манту и дст) дорогостоящее; может показывать ложноотрицательный результат, поскольку владеет средней чувствительностью; невозможность определить латентная форма туберкулеза в организме или непосредственно воспаление.
Отдельной проблемой является пока нераспространенность пунктов, где сделать такой тест возможно.
Так, в России центры расположены только в крупнейших городах (Москва, Санкт-Петербург, Новосибирск), что однозначно усложняет доступ к такого рода исследованию.
источник
Квантифероновый тест – современный лабораторный метод диагностики туберкулеза. Методика рекомендована национальными ведомствами здравоохранения в качестве альтернативы кожным пробам в странах с низкой заболеваемостью туберкулезом (европейские страны, США, Австралия).
В России тест начали использовать несколько лет назад. Однако у нас он мало востребован. Квантифероновый тест — что это такое, и почему он не популярен в России — мы расскажем в этой статье.
Квантифероновый тест на туберкулез выявляет ту же реакцию иммунных клеток, что и Диаскинтест . Но с двумя отличиями:
Эти белки-антигены отсутствуют в вакцине БЦЖ . По этой причине анализ не дает положительной реакции у привитых детей, чем он и отличается в лучшую сторону от Манту .
О чем же говорит положительный квантифероновый тест:
- На наличие в организме туберкулезной палочки при так называемой латентной стадии, когда болезнь не проявляет себя никакими симптомами ;
- на присутствие туберкулезного возбудителя в стадии активного туберкулезного процесса.
Таким образом, квантифероновый тест назначается для выяснения: инфицирован человек туберкулезом или нет.
При этом тест не отвечает на вопрос является ли инфицирование первичным, латентной стадией заболевания, активным процессом или уже пролеченной формой.
Любой диагностический метод имеет два основных критерия:
Чувствительность показывает, может ли тестовая методика дать отрицательный результат при наличии заболевания. Этот показатель измеряется в процентах для каждой категории больных (первично инфицированные, с латентной формой и др.) отдельно. Затем его усредняют и считают, что чем выше процент, тем более чувствителен метод.
То есть 100% чувствительность говорит о том, что методика никогда не показывает ошибочный отрицательный результат.
Специфичность, наоборот, ограничивает параметр чувствительности, который при значениях, приближенных к 100%, может давать ошибочную положительную реакцию. Например, Манту, помимо туберкулезной палочки, дает положительный ответ у вакцинированных лиц.
То есть высокая специфичность метода свидетельствует о том, что он никогда не показывает ошибочный положительный результат.
Таблица. Чувствительность и специфичность различных тестов на туберкулез.
| Наименование методики | Чувствительность, в среднем по всем категориям инфицированных, % | Специфичность, в среднем, % |
|---|---|---|
| Квантифероновый тест QFT-GIT | 84 | 99 |
| Диаскинтест | 85 | 99 |
| Проба Манту | 100 | 75 |
Проблема в том, что в России практически 100% взрослого населения является инфицированным туберкулезной палочной. При таком положении вещей делать квантифероновый тест взрослым не имеет смысла, т.к. в соответствии с усредненной чувствительностью метода он покажет наличие туберкулеза в той или иной его фазе у 84% людей. При этом примерно у 98% из этих людей заболевание никогда не перейдет в активную форму.
У детей этот тест за счет своей высокой специфичности достаточно эффективен. В то же время чувствительность метода не высока. То есть, используя только его, можно «пропустить» туберкулез примерно в 16% случаев. По этой причине российским детям сначала ставят высокочувствительную пробу Манту и далее при необходимости уточнения диагноза проводят квантифероновый тест.
Тест показан детям с сильной реакцией на Манту или с виражом Манту.
Для анализа берется кровь из вены.
Квантифероновый тест на туберкулез обладает рядом преимуществ:
- Высокая специфичность, т.е. метод никогда не показывает ошибочный положительный результат;
- лабораторный характер исследования, т.е. результаты более объективны, чем визуальная оценка кожных проб;
- может быть проведен любому человеку, в т. ч. людям с противопоказаниями к кожным пробам, с гиперчувствительностью к туберкулину;
- отсутствие побочных реакций;
- нет ограничений по применению – возможно в период острых вирусных инфекций , сразу после вакцинации.
У квантиферонового теста на туберкулез есть и недостатки:
- Может показывать ложноотрицательный результат из-за средней чувствительности метода;
- тест делается не в каждом городе;
- это достаточно дорогой анализ – в различных регионах он стоит от 1500 до 10000 руб.
Квантифероновый тест на туберкулез – это иммуноферментный анализ. В его основе лежит оценка количества высвобождаемого гамма-интерферона после стимуляции антигенами туберкулезной палочки.
Кровь для анализа собирается в три пробирки:
Пробирка Nil является отрицательно-контрольной. В нее добавляют гепарин. В норме гамма-интерферон выделяться не должен. Пробирка Mitogen положительно-контрольная. В нее добавляют фитогемагглютинин. В ответ выделяется гамма-интерферон. В этих двух пробирках проверяют нормальную реакцию иммунных клеток крови по выработке интерферона.
В пробирку Antigen вводятся антигены микобактерий, на которые иммунные клетки (в случае инфицирования) должны ответить выработкой интерферона. Реакция оценивается во взаимосвязи с результатом в контрольных пробирках.
В общем, это – сложная аналитическая методика, которая требует специальной подготовки биологического материала для исследования, определенного оборудования, компьютерную обработку полученной информации. Высокие требования предъявляются и к квалификации лаборанта.
Сдача крови на анализ проводится с утра натощак.
Метод не имеет противопоказаний.
Тест можно проводить во время респираторных заболеваний, сразу после проведения вакцинации.
Сделать квантифероновый тест на туберкулез в Москве сегодня не проблема. Существуют лаборатории в двух солидных институтах, которые проводят соответствующий анализ:
В обоих учреждениях услуга платная. Указанные НИИ не осуществляют забор крови. К ним в лабораторию нужно приносить уже забранную кровь в пробирке с гепарином. Время от забора до сдачи в лабораторию – не более 2 ч. Требуется соблюдение температурного режима при транспортировке крови до лаборатории (не охлаждать до отрицательных температур).
В противотуберкулезных диспансерах квантифероновый тест не делают.
ООО «Иммунотест» в Москве (ул. Советской армии, 3) производит забор крови на квантифероновый тест по будним дням, кроме пятницы, с 9.00 до 11.00. Для проведения анализа используется лабораторную базу НИИ Фтизиопульмонологии.
ООО «Инвитро» имеет офисы в каждом областном центре. Квантифероновый текст в Инвитро не проводится. В их арсенале есть другая известная методика – полимеразная цепная реакция на микобактерию туберкулеза. Однако считается, что в отношении туберкулеза этот анализ не информативен.
ООО «Лаборатория Гемотест» не проводит квантифероновый тест на туберкулез. Но так как один из их филиалов находится близко к НИИ Фтизиопульмонологии (ул. Новослободская, 36/1), то многие москвичи пользуются его услугами для забора крови. Пациенты самостоятельно относят пробирку с кровью в лабораторию НИИ.
Лабораторная служба «Хеликс», имеющая свои филиалы в различных российских городах, оказывает услуги по забору крови и проведению квантиферонового теста, по крайней мере, в некоторых санкт-петербургских отделениях. География анализа расширяется: для получения более точной информации по Хеликс в вашем регионе обращайтесь непосредственно в лабораторную службу.
Квантифероновый тест является лабораторным аналогом Диаскинтеста.
Он обладает примерно той же достоверностью, но не требует внутрикожного введения препарата.
Этот анализ ориентирован на лиц с подозрением на туберкулез, которым по каким-то причинам не могут быть проведены стандартные методы — аллергенные внутрикожные пробы Манту и Диаскинтест.
источник
T-SPOT.TB – иммунодиагностика туберкулезной инфекции, тест высвобождения гамма-интерферона (T-SPOT.TB – Interferon-Gamma Release Assays, IGRA)
Исследование крови, допустимое в качестве альтернативы кожному тесту (проба Манту) для выявления туберкулезной инфекции.
Туберкулез – инфекционное хроническое заболевание, вызываемое микобактериями туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis complex). Варианты развития ситуации после проникновения возбудителя туберкулеза в организм человека следующие:
- полная элиминация (удаление) микобактерий туберкулеза из организма;
- развитие первичного туберкулеза (при быстром росте и размножении бактерий);
- «латентная инфекция» (микобактерии персистируют в организме в неактивном состоянии, обуславливая стойкий иммунный ответ на антигены возбудителя при отсутствии клинических проявлений активной формы заболевания). Это состояние у многих инфицированных может сохраняться на протяжении всей жизни. Такие лица не распространяют инфекцию, но у части пациентов латентная инфекция в течение жизни может перейти в клинически манифестированное заболевание. Риск прогрессии латентной инфекции в активное заболевание увеличивается при ослаблении иммунной системы.
Активная туберкулезная инфекция диагностируется по комплексу клинических симптомов, медицинской истории пациента, данным рентгенологических исследований и результатам прямых методов лабораторного выявления Mycobacterium tuberculosis в мокроте или мазках (микробиологические культуральные методы, выявление ДНК возбудителя с применением ПЦР).
Диагностика латентной инфекции затруднена отсутствием клинических и рентгенологических признаков заболевания, а также отсутствием возбудителя в пробах доступного биоматериала. Однако ее выявление важно для определения лиц, нуждающихся в контроле и превентивной терапии.
В настоящее время существуют два подхода к выявлению вероятной латентной инфекции:
- in vivo: внутрикожные тесты с очищенным или рекомбинантным туберкулезным аллергеном (проба Манту, Диаскинтест);
- in vitro: оценка ответа иммунных клеток обследуемого на антигены микобактерий туберкулеза по высвобождению гамма-интерферона (IGRA-тесты).
Оба подхода основаны на оценке характера иммунной реакции человека на антигены возбудителя, т. е. не являются методами прямого выявления инфекционного агента.
В связи с достаточно высокой распространенностью туберкулеза в нашей стране, Министерство здравоохранения РФ рекомендует ежегодно проводить скрининговое обследование детей в возрасте от 1-го года до 17-ти лет на наличие туберкулезной инфекции (в том числе при поступлении в детские сады и школы). Профилактическое скрининговое обследование обычно проводят с использованием внутрикожных проб. При наличии определенных противопоказаний или информированном отказе родителей от применения внутрикожных проб ребенку допускается назначение альтернативных методов обследования. Они включают исследование крови, основанное на выявлении высвобождения гамма-интерферона специфически сенсибилизированными лимфоцитами. На данный момент имеются два коммерческих диагностических теста этого направления: 1) QuantiFERON®-TB Gold; и 2) T-SPOT.TB (зарегистрирован в России).
Тест T-SPOT.TB допускается к использованию клиническими рекомендациями МЗ РФ и Российского общества фтизиатров по выявлению и диагностике туберкулеза у детей (2017). В соответствии с рекомендациями, при проведении скринингового обследования детей отрицательный результат T-SPOT.TB при отсутствии клинических симптомов заболевания (респираторного и интоксикационного характера, других локальных патологических проявлений) позволяет врачу-фтизиатру выдать справку об отсутствии у ребенка в настоящий момент активного туберкулеза.
К достоинствам этого метода можно отнести то, что подбор специфических антигенов исключает ложноположительные реакции, связанные с предшествующей вакцинацией БЦЖ (такие антигены отсутствуют на линиях Bacillus Calmette-Guerin, BCG) и перекрестными реакциями с большинством нетуберкулезных микобактерий окружающей среды (за исключением M. kansasii, M. szulgai и M. marinum). Напротив, лица, инфицированные микобактериями туберкулезного комплекса (M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum, M. microti, M. canetti) обычно имеют в крови Т-клетки, распознающие эти и другие антигены таких бактерий.
T-SPOT.TB тест не позволяет различать латентную инфекцию и активное заболевание.
Следует учитывать, что чувствительность и специфичность подобных методов в целях скрининга туберкулезной инфекции не достигают 100%. Поэтому такие тесты следует применять с учетом общей оценки индивидуального риска в комплексе со стандартными методами диагностики.
Материал для исследования: цельная кровь (с литий гепарином) – 2 пробирки, 4 мл.
источник
КВАНТИФЕРОНОВЫЙ ТЕСТ (QuantiFERON®-ТВ Gold) – современный лабораторный тест для выявления туберкулезной инфекции, альтернатива классическому кожному тесту с туберкулином. В настоящий момент в различных странах разработано и выпущено большое число национальных рекомендаций по применению данного теста.
Квантифероновый тест основан на определении INF-γ (гамма-интерферона), высвобождаемого сенсибилизированными Т-клетками, стимулированными in vitro специфическими протеинами (ESAT-6, CFP-10, TB7.7 (p4)) микобактерий туберкулеза, входящих в комплекс Mycobacterium tuberculosis complex (M. tuberculosis, M. bovis, M. canettii, M. caprae, M. pinnipedii, M. mungi, M. microti, M. africanum и др.). Эти протеины отсутствуют в вакцинных штаммах M. bovis BCG и в большинстве нетуберкулезных микобактерий, за исключением M. kansasii, M. szulagai, M. marinum.
В исследуемой крови пациента (из пробирки с ТВ-антигеном) определяется содержание INFγ, результат анализируется в совокупности с данными, полученными из 2-х других пробирок (выполняющих роль контрольных).
Примерно 1/3 часть населения мира инфицирована МБТ, и только у 5-10% инфицированных лиц развивается заболевание. При наличии неблагоприятных факторов латентная туберкулезаня инфекция (ЛТИ – состояние, когда микобактерии туберкулеза (МБТ) присутствуют в организме человека, но при этом отсутствуют клинические и рентгенологические признаки туберкулеза) может перейти в активную форму с развитием внелегочного туберкулеза (например, туберкулез почек).
К группе высокого риска инфицирования МБТ относятся лица, имевшие контакт с больным туберкулезом, или имеющие высокую вероятность контакта (работники противотуберкулезных диспансеров, приютов, исправительных учреждений и др.), а также лица с сопутствующими заболеваниями (ВИЧ-инфекцией, сахарным диабетом и др.).
Используемые для диагностики ЛТИ кожные тесты – проба Манту и Диаскинтест®, имеют ряд противопоказаний и ограничений к применению.
Противопоказания к проведению пробы Манту и Диаскинтеста:
- Индивидуальная непереносимость туберкулина;
- Острые и хронические инфекционные заболевания и соматические заболевания в период обострения;
- Кожные заболевания и аллергические состояния в период обострения;
- Период карантина в детских коллективах.
У пациентов с индивидуальной гиперчувствительностью к туберкулину может наблюдаться ложноположительная реакция.
Сравнение тестов для диагностики туберкулезной инфекции
| Параметр | Проба Манту | Диаскинтест® | Квантифероновый тест |
|---|---|---|---|
| Метод исследования | Кожный тест | Кожный тест | Исследование крови |
| Побочные реакции | Возможны | Возможны | Нет |
| Противопоказания | Есть | Есть | Нет |
| Специфичность | Низкая | Высокая | Высокая |
| Ложноположительные результаты после вакцинации БЦЖ | Да | Нет | Нет |
| Зависимость от сроков проведения профилактических прививок | Да (не ранее чем через месяц) | Да (не ранее чем через месяц) | Нет |
| Интерпретация результатов | Субъективна | Субъективна | Объективна |
Преимущества КВАНТИФЕРОНОВОГО ТЕСТА:
- отсутствие противопоказаний и ограничений по времени проведения;
- отсутствие ложноположительных результатов в случае вакцинации БЦЖ;
- безопасность процедуры и отсутствие побочных реакций;
- интерпретация результатов этого теста менее субъективна, чем интерпретация результатов кожных туберкулиновых тестов;
- высокая специфичность (99,1%) и высокая чувствительность (89,0%).
Показания к назначению КВАНТИФЕРОНОВОГО ТЕСТА:
- Выявление ЛТИ в группах высокого риска: работники специализированных противотуберкулезных и других учреждений, где есть высокий риск контакта с возбудителем или больным туберкулезом, пациенты с сопутствующими заболеваниями и др.;
- Наличие известных контактов с больным туберкулезом (бактериовыделителем);
- Наличие положительной реакции пробы Манту для исключения поствакцинальной реакции;
- Наличие противопоказаний к проведению кожных туберкулиновых проб (пробы Манту и Диаскинтеста®);
- Дифференциальная диагностика инфекций, вызванных МБТ;
- Обследование иммигрантов.
Пример результата исследования и интерпретация:
| Параметр | Результат | Критерии оценки результатов |
|---|---|---|
| Содержание гамма-интерферона в контрольной пробирке (NIL) | 0,05 | До 8,00 |
| Содержание гамма-интерферона в пробирке с ТВ-антигеном (ТВ Ag) | 0,09 | Менее 0,35 (или свыше 0,35, но до 25% контрольного значения NIL) |
| Содержание гамма-интерферона в пробирке с митогеном (Mitogen) | 9,56 | От 0,50 |
| Квантифероновый тест (диагностика туберкулеза) | Отрицательный | Отрицательный |
Интерпретация результата исследования
Квантифероновый тест, это такая процедура, которая дает возможность с высокой степенью точности обнаружить туберкулез даже на первоначальной стадии. Способ внедрен не так давно, в связи с чем его испытание в клинических условиях продолжается.
Основа квантиферонового теста состоит в установлении гамма-интерферона, высвобождаемого Т-лимфоцитами во время встречи с микобактерией туберкулеза. Инвитро устанавливают специфичные белки, имеющиеся в составе микобактерии человеческого туберкулеза и бычьего. С их поддержкой создаются специальные антитела. Обнаружение протеинов при содействии квантиферонового теста считается качественным показателем присутствия палочки Коха в теле человека.
При квантифероновом тестировании не проводится разделения между активным и скрытым туберкулезом. При положительном результате необходим прием у фтизиатра, который установит последующий план лечения больного. Если установленный уровень гамма интерферона не говорит о наличии инфицирования, возможен риск скрытой фазы болезни, в этом случае необходимо вести динамическое наблюдение за пациентом.
Новый тест на туберкулез, названный диаскинтестом пришел на смену стандартной туберкулинодиагностике. Основой методики стало подкожное введение определенного количества белка, являющегося специфичным для туберкулезных микобактерий. Положительные значения говорят о том, что пациент имеет инфекцию в активной или скрытой стадии. Отрицательный показатель не гарантирует отсутствие инфекции. При выраженном иммунитете против туберкулезной микобактерии характерна негативная проба.
Различие в составе препаратов теста Манту и диаскинтеста предполагает разные клинические показатели обоих тестов. Во время введения туберкулина возникают ложноположительные реакции, вызванные введением немалого числа чужеродного антигена. Диаскинтест дает положительный результат, если тело человека ранее имело дело с туберкулезными антигенами. Если проба Манту дала положительный эффект, то требуется профилактическая терапия, а это не всегда является разумным решением.
Квантифероновый тест – это метод диагностики туберкулеза высокой точности. Чувствительность его такова, что определяет начальные стадии и латентную (скрытую форму) недуга легких. Он безопасен, не оказывает негативного воздействия. На западе используется несколько десятилетий, а в России о нем только начинают узнавать люди. Поэтому квантифероновый тест во многих городах пока недоступен. Поэтому используется малоэффективная альтернатива – кожные пробы или флюорография.