Инвитро тест слюны на туберкулез

Микобактерии туберкулеза, определение ДНК (Mycobacterium tuberculosis, DNA) в мокроте, смывах, лаважной жидкости

Определение ДНК возбудителей туберкулеза: комплекса микобактерий: M. tuberculosis, M. bovis, M. bovis BCG, M. microti, M. africanum в мокроте, смывах с бронхов, лаважной жидкости методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме «реального времени.

Туберкулёз (от лат. tuberculum — бугорок) – распространённое, социально зависимое заболевание человека. Болеют им и животные. Возбудитель туберкулёза открыт Р. Кохом в 1882 г. Это кислотоустойчивые аэробные бактерии (74 вида) рода mycobacterium, широко распространённые в почве, воде и у животных. У человека чаще всего возбудителем является Mycobacterium tuberculosis. Второй по частоте является Mycobacterium bovis. Оба вида очень очень устойчивы ко многим факторам внешней среды, а в организме очень долго остаются жизнеспособными и могут вызвать заболевание через многие годы после заражения. Очень важно, что микобактерии туберкулёза могут образовывать так называемые L-формы. Сохраняясь в организме, они создают противотуберкулёзный иммунитет. Длительное время туберкулёз может протекать скрыто и обнаруживаться случайно, хотя нередко уже проявляются такие симптомы, как слабость, быстрая утомляемость, субфебрильная температура, ночная потливость, а в крови – анемия и лейкопения.

В настоящее время, несмотря на все достижения антимикробной терапии, туберкулёз угрожает будущему нации. Поэтому все методы диагностики, особенно его латентных форм являются крайне важными.

Существует много методов лабораторной диагностики туберкулёза: микроскопия мазка (чаще всего для этого используют мокроту), классический культуральный метод, ИФА. Всем им присущи достоинства, но и определённые недостатки, в частности, обнаружение микобактерий только в случае их достаточного количества.

В последние годы для диагностики используют полимеразную цепную реакцию (ПЦР). Её высокая чувствительность позволяет обнаружить в исследуемом материале единичные клетки и даже их фрагменты ДНК. Метод исключает перекрёстные реакции и специфичность достигает 100%. ПЦР позволяет дифференцировать ограниченные и диссеминированные формы туберкулёза, особенно у детей даже при отрицательных результатах микробиологических исследований.

• определяемый фрагмент — специфические участки ДНК микобактерий;
• специфичность определения — 100%;
• чувствительность определения — 100 копий ДНК микобактерий в образце.

источник

Если у человека появляются симптомы такого опасного и трудноизлечимого заболевания, как туберкулез, необходимо срочно обратиться в диспансер для проведения диагностических исследований организма. Не менее важно регулярно обследоваться в тубдиспансере тем людям, которые контактировали или постоянно ухаживают за больным с открытой формой туберкулеза. Кроме того, после посещения страны, где уровень заболеваемости и заражением микобактериями очень высок, следует сразу же сдать соответствующие анализы на выявление возбудителя в организме.

В настоящее время диагностировать туберкулез легких или других органов можно различными способами. Но самый первый тест – это туберкулиновая проба Манту, которая за пару дней позволяет определить, инфицирован ли человек микобактериями или нет. Также с недавних пор начали использовать другие виды тестирования: Диаскинтест и Квантифероновое исследование в Инвитро. Рассмотрим, как они проводятся и в чем их преимущества перед пробой Манту.

В отличие от туберкулиновой пробы, которая реагирует на прививку БЦЖ и живую инфекцию микобактерий, вещество Диаскин показывает исключительное заражение, а не аллергическую реакцию на проведенную вакцинацию. Поэтому Диаскинтест необходимо проводить в тех случаях, когда после Манту нужно отделить поствакцинальную аллергию от наличия истинного возбудителя туберкулеза.

Диаскин является новым аллергендиагностическим препаратом, который улучшает качество исследования организма туберкулезной инфекции. В средстве содержатся антитела, которые присутствуют в болезнетворных штаммах микобактерий, но отсутствуют в вакцине БЦЖ. Благодаря этому аллергическая реакция Диаскинтеста возникает только при наличии истинной инфекции. Но в препарате не содержится возбудителей туберкулеза, поэтому заразится заболеванием после аллергопробы невозможно.

Если сравнивать пробу Манту и Диаскинтест, то в первом случае выявить микобактерии получается лишь в 50-70% случаев. А вторая аллергопроба более точная, так как находит возбудителя туберкулеза в 90%. Нельзя сказать, что препарат Диаскин заменит туберкулиновую пробу, поскольку с его помощью невозможно определить, необходима ли пациенту ревакцинация БЦЖ или нет.

Диаскинтест назначают в следующих ситуациях:

• Когда нужно диагностировать туберкулез и выявить уровень активности воспалительного процесса;
• Отличить заражение микобактериями от симптомов других заболеваний, с похожими проявлениями;
• Дифференцировать аллергическую реакцию на БЦЖ от воспаления на истинного возбудителя;
• Наблюдать за процессом лечения и его эффективностью.

Диаскинтест на туберкулез обязательно проводится в тех случаях, когда у детей или взрослых пациентов присутствует вираж пробы Манту. Но он противопоказан пациентам с такими заболеваниями:

• Острые воспаления или обострения хронических болезней (исключением являются симптомы, которые похожи на развитие туберкулеза);
• Соматические расстройства;
• Кожные заболевания;
• Аллергия;
• Эпилептические припадки.

После того как острые воспалительные процессы проходят, тогда Диаскинтест проводить не противопоказано.

Вводят Диаскин таким же образом, как и пробу Манту. Но оба теста не совмещают в один период. То есть, если туберкулиновую реакцию проводят по календарю, то Диаскинтест переносят на следующий месяц после прививки. Когда Манту вводят в одно предплечье, для инъекции Диаскина обязательно используют другое.

Результат Диаскинтеста оценивают через три сутки. Если на месте введения препарата отсутствует покраснение и инфильтрат, то тест отрицательный. Как только на коже образуется папула любого размера и присутствует гиперемия, проба положительная. Реакция на Диаскинтест будет отсутствовать у здоровых пациентов, вылечившихся от туберкулеза и инфицированных неактивной микобактерией.

Диаскинтест является хорошей туберкулезной пробой, но один он не может быть полностью информативным. С его помощью удается выделить большую часть больных с легочной формой заболевания человечьей палочкой Коха. Но при других видах микобактерий проба не сможет выявить возбудителя туберкулеза.

Важно отметить, что сила реакции организма на Диаскин не может говорить о выраженности или уровне активности палочки, поскольку кожная аллергия больше отмечает ответ иммунной системы на введенные антитела.

Кроме того, Диаскинтест обычно не диагностирует вторичное инфицирование туберкулеза, которое, как правило, вызвано бычьим штаммом микобактерий. Поэтому даже при резкой реакции пробы Манту ребенка или взрослого человека уже направляют на лечение от туберкулеза, даже если у него отсутствует кашель. Хоть в этом случае Диаскинтест может быть отрицательным, первая туберкулиновая реакция требует особого внимания.

В настоящее время выделяют три клинических формы туберкулеза:

В зависимости от вида поражения каждый тест будет реагировать по-своему.

При введении инъекции Манту все три формы туберкулеза вызовут положительную реакцию организма пациента. Если проводить Диаскинтест, то при легочном заболевании он обычно положительный, а при двух других формах – отрицателен. Из этого можно сделать вывод, что Манту укажет на микобактерии, поражающие любые органы человека, даже если они находятся в неактивном состоянии. А Диаскин выявит истинную человеческую палочку туберкулеза среди больных легочными формами. Диаскинтест не заменяет пробу Манту, он может стать лишь ее дополнением.

За последние годы очень часто вместе с пробой Манту рекомендовано использовать тест для выявления больных, зараженных туберкулезной инфекцией разных видов. Квантифероновый тест проводится вне организма, поэтому является полностью безопасным для людей с ослабленным иммунитетом.

Анализ крови определяет наличие гамма-интерферона, который продуцируется только у заболевших туберкулезом. Чтобы провести исследование, у пациента берут венозную кровь. Перед сдачей анализов человек не должен принимать пищу в течение восьми часов. Забранный образец помещают в три пробирки, чтобы исключить ложные результаты исследования.

Если сравнивать Квантифероновый тест с Манту или Диаскинтестом, то он более чувствителен и помогает точно выявить наличие туберкулезной инфекции. Но при этом, он также не реагирует на вакцину БЦЖ и дает отрицательный результат.

К преимуществам определения гамма-интерферонов относят:

• Высокую чувствительность теста;
• Безопасность, отсутствие побочных действий;
• Не реагирование на БЦЖ;
• Нет противопоказаний;
• Объективность оценки результатов теста.

К недостаткам Квантиферонового исследования можно отнести то, что оно не позволяет определить, есть ли в организме человека латентная форма туберкулеза или активное воспаление.

Важно отметить, что тест в Инвитро дает возможность заменить туберкулинодиагностику. Но в настоящее время точность Квантиферонового результата доказана лишь в лабораторных исследованиях, но не проверена на практике.

Инвитро определяются гамма-интерфероны, которые вырабатываются в организме Т-лимфоцитами лишь после встречи с туберкулезным возбудителем. Специфические белки выделяются при контакте, как с человеческим видом микобактерий, так и с бычьим. После того как иммунные клетки распознают туберкулезную палочку, они вырабатывают антитела, определяющиеся при исследовании венозной крови. Таким образом, Квантифероновый тест выявляет даже микобактериозы. Поэтому при положительном результате диагностики следует отличить наличие возбудителя туберкулеза от микобактериозов.

Проведенные обследования разных пациентов дали понять, что третья часть всего населения инфицирована микобактериями. Но только у 6% людей может развиться туберкулез. Чаще всего его провоцируют внешние неблагоприятные факторы или ослабленный иммунитет.

В группу риска входят люди:

• Контактирующие с пациентами с открытой формой туберкулеза (родственники, медработники);
• ВИЧ-инфицированные;
• Болеющие диабетом;
• Освобожденные из исправительных колоний.

Квантифероновый тест в Инвитро рекомендован тем лицам, которым противопоказано делать Манту или Диаскинтест. Например, если у человека отмечаются острые или рецидивирующие заболевания, то вводить туберкулиновое вещество категорически запрещено. Также в период карантина детям не делают кожные пробы. У некоторых людей есть аллергия на туберкулин, поэтому им не подходит данный вид исследования на инфицирование туберкулезом.

Чтобы сравнить преимущества Квантиферонового теста с пробой Манту или Диаскинтестом, необходимо ознакомиться с некоторыми особенностями диагностики.

источник

Своевременная диагностика туберкулеза – одна из основ предупреждения его эпидемии, так как зараженный человек остается очень заразен даже в том случае, если заболевание у него протекает в скрытой форме. Используются разнообразные методы диагностики – пробы, тесты, рентгенография и анализы различного типа, в том числе и ПЦР. Наибольшую эффективность и популярность приобрел анализ слюны этим методом. Он имеет высокую информативность и точность и достаточно прост в проведении. О том, что такое анализ слюны на туберкулез, и как он проводится рассказано в данном материале.

Как же проводится ПЦР-исследование и в чем его основной смысл? В образце ткани или жидкости, который забрали у человека, в лабораторных условиях воссоздается естественный рост цепочек ДНК. Через несколько часов образец исследуют и в таких условиях легко заметно присутствие чужеродной бактерии в образце. Затем эту бактерию изучают для определения ее вида и на основе этого делают заключении о наличии либо отсутствии у пациента какого-либо заболевания.

Исследование длится всего около 2 дней и спустя этот период результат уже готов. При культуральном методе, когда бактерию пытаются вырастить на среде требуется не менее 6 недель, кроме того, такой метод не отличает вакцинальную бактерию от патологической.

Исследование по методу ПЦР может проводиться не только по слюне, но и по крови, стулу, моче, вагинальным выделениям и любым другим органическим жидкостям. Но при подозрении на заболевания легких, к которым и относится туберкулез, обычно, назначается именно исследование по слюне.

Иногда для большей информативности дополнительно к этому исследованию назначается также исследование крови ИФА, иные виды ПЦР и т. д.

В последнее время все больше врачей и исследователей приходят к выводу, что выделение ДНК вируса, то есть ПЦР-исследование слюны, более эффективно, чем проведение традиционной пробы Манту. Связано это с тем, что пробы утратили свою точность в связи с тем, что у многих пациентов стала развиваться на них аллергия, что увеличивает сформировавшуюся папулу, а значит, не позволяет поставить точный и объективный диагноз (часто он бывает ложноположительным). Кроме того, при таком исследовании всегда остается вероятность осложнений, место укола зудит и доставляет исследуемому значительный дискомфорт.

По этой причине, хотя Манту все еще очень распространена, так как это простой и дешевый способ, который проводят в школах, все больше врачей в качестве альтернативы ей назначают ПЦР-исследование. Больной туберкулезом, даже если заболевание протекает в скрытой форме, все равно является бактериовыделителем, т. е. в его слюне, мокроте, моче и стуле присутствует возбудитель заболевания. В слюне его больше всего. Потому, при наличии болезни, выделить ДНК-вируса из нее очень просто. Результат такого исследования точен, потому что не может быть ложноположительным – если бактерия определена в пробе, значит, она имеется в организме. Хотя ложноотрицательный результат, хотя и крайне маловероятен, но теоретически возможен.

Противопоказаний для проведения такого вмешательства почти нет. Однако наличие инфекционного или воспалительного процесса в полости рта может осложнить данный процесс или исказить результат, потому в этом случае вопрос нужно решать с врачом индивидуально. Кроме того, при поражениях полости рта и травмах слизистой иногда пробу забрать также невозможно, но чаще всего в этом случае удается забрать пробу слюны с другого участка.

Какие же преимущества имеет данный метод? Их достаточно много. Основные таковы:

1. Высокая скорость получения результатов исследования, что особенно важно при туберкулезе;
2. Очень высокая скорость получения отрицательного результата (когда пациент здоров);
3. Большая точность и эффективность данного метода по сравнению с другими;
4. Способ совершенно безболезненный;
5. Имеется минимум противопоказаний даже при условии недавнего перенесения инфекционного или воспалительного заболевания, вакцинации, операции;
6. Не зафиксировано ни одного случая развития даже самых легких осложнений или последствий;
7. Возможность отличить бактерию из вакцины от патологической;
8. Возможность точно определить тип возбудителя, что помогает подобрать оптимальное и наиболее эффективное лечение;
9. Не доставляет таких неудобств как проба Манту, которую нельзя чесать, мочить и т. д.

Метод имеет и другие положительные стороны. С медицинской точки зрения в настоящий момент именно он является оптимальным по соотношению сложности и точности. Именно данный метод стоит на первом месте в перечне наиболее эффективных и точных методов диагностики туберкулеза.

Достаточно сложно найти недостатки у данного метода, так как по сравнению с другими методами диагностики он является наиболее целесообразным. Однако в списке ниже все же представлены несколько потенциальных проблем, которые могут возникнуть при назначении такого исследования:

1. Вероятность ложноотрицательного результата хотя и крайне низка, но все же присутствует;
2. Подготовка к вмешательству, которая будет описана ниже, может доставить некоторые неудобства и повлиять на качество жизни пациента;
3. Диагностика может быть затруднена при наличии некоторых заболеваний полости рта;
4. Некоторые противопоказания все же имеются, хотя по сравнению с другими методами их очень мало.

Других серьезных недостатков и ограничений у данной процедуры нет. При условии, что она будет проведена с соблюдением всех правил и учетом всех противопоказаний, этот метод работает почти идеально, не доставляя дискомфорта и позволяя быстро получить точный результат.

Анализ слюны на туберкулез методом ПЦР проводится достаточно быстро и не представляет сложностей ни с технической точки зрения, ни с точки зрения подготовки к нему. Для того чтобы результат был максимально точным и информативным, соблюдайте несколько простых правил накануне проведения вмешательства:

1. В течение 12 часов до его проведения нельзя принимать пищу;
2. На максимально длительное время, но не менее чем на 12 часов, перед вмешательством нужно отказаться от курения;
3. Как минимум сутки перед вмешательством нельзя употреблять алкоголь;
4. Иногда в день вмешательства или за 5-7 дней до него необходимо прекратить прием некоторых лекарственных препаратов – этот вопрос нужно решать с врачом в индивидуальном порядке, так как достаточно малое количество лекарственных средств требует отмены, и отменять их можно только в случае, если они принимаются не по жизненным показаниям;
5. В день забора пробы, до ее сдачи, нельзя употреблять жевательную резинку, чистить зубы, использовать спреи для освежения дыхания и даже зубную нить, так как она тоже бывает пропитана различными растворами;
6. Слишком много пить также не нужно, но прямо перед процедурой необходимо прополоскать рот простой водой.

Все эти меры необходимы для того, чтобы избежать изменения химического состава и концентрации слюны, попадания в нее неестественных примесей и т. д. С большой долей вероятности результат может быть верным и без применения этих мер, однако соблюдать их необходимо для абсолютной точности.

Пациент посещает медицинский кабинет в первой половине дня. Никаких существенных особенностей или ограничений кроме тех, что описаны в разделе «Подготовка к анализу» нет. Забор пробы происходит совершенно безболезненно. Лаборант, с помощью специального шпателя, берет мазок с внутренней стороны щек или корня языка пациента. Может забираться как один мазок, так и несколько в зависимости от особенностей работы конкретной лаборатории.

Забранный материал помещается в специальную пробирку, в которую уже внесен особый фермент, сохраняющий жизнеспособность материала. В пробирку добавляется основной реагент, и именно он и запускает реакцию воспроизведения цепочек ДНК, в котором заключается суть метода.

Если цвет пробы мазка не изменился, то человек здоров. Если же цвет пробы изменился, то у пациента имеется туберкулез в той или иной стадии. Также он может быть носителем, то есть являться инфицированным бактерией, но не болеть. Если реакция была положительной (цвет изменился), то проба помещается на специальную среду, на которой можно вырастить полноценную патологическую бактерию и изучить ее для установления вида возбудителя.

Расшифровка результатов предельно проста. Их может быть только два – положительный или отрицательный. Отрицательный свидетельствует о том, что возбудителей туберкулеза в слюне не обнаружено и с большой долей вероятности пациент здоров. Положительный говорит о наличии в слюне возбудителя, то есть наличии туберкулеза.

Цена на исследование может отличаться в зависимости от медцентра.

Вопрос о целесообразности назначения такого метода диагностики должен решаться совместно с врачом.

Это информативное и не травматичное исследование с минимумом побочных эффектов и противопоказаний. Его проводят по назначению врача, как детям, так и взрослым. Оно информативнее пробы Манту, потому, если есть такая возможность, то лучше проходить его.

источник

T-SPOT.TB – иммунодиагностика туберкулезной инфекции, тест высвобождения гамма-интерферона (T-SPOT.TB – Interferon-Gamma Release Assays, IGRA)

Исследование крови, допустимое в качестве альтернативы кожному тесту (проба Манту) для выявления туберкулезной инфекции.

Туберкулез – инфекционное хроническое заболевание, вызываемое микобактериями туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis complex). Варианты развития ситуации после проникновения возбудителя туберкулеза в организм человека следующие:

• полная элиминация (удаление) микобактерий туберкулеза из организма;
• развитие первичного туберкулеза (при быстром росте и размножении бактерий);
• «латентная инфекция» (микобактерии персистируют в организме в неактивном состоянии, обуславливая стойкий иммунный ответ на антигены возбудителя при отсутствии клинических проявлений активной формы заболевания). Это состояние у многих инфицированных может сохраняться на протяжении всей жизни. Такие лица не распространяют инфекцию, но у части пациентов латентная инфекция в течение жизни может перейти в клинически манифестированное заболевание. Риск прогрессии латентной инфекции в активное заболевание увеличивается при ослаблении иммунной системы.

Активная туберкулезная инфекция диагностируется по комплексу клинических симптомов, медицинской истории пациента, данным рентгенологических исследований и результатам прямых методов лабораторного выявления Mycobacterium tuberculosis в мокроте или мазках (микробиологические культуральные методы, выявление ДНК возбудителя с применением ПЦР).

Диагностика латентной инфекции затруднена отсутствием клинических и рентгенологических признаков заболевания, а также отсутствием возбудителя в пробах доступного биоматериала. Однако ее выявление важно для определения лиц, нуждающихся в контроле и превентивной терапии.

В настоящее время существуют два подхода к выявлению вероятной латентной инфекции:

1. in vivo: внутрикожные тесты с очищенным или рекомбинантным туберкулезным аллергеном (проба Манту, Диаскинтест);
2. in vitro: оценка ответа иммунных клеток обследуемого на антигены микобактерий туберкулеза по высвобождению гамма-интерферона (IGRA-тесты).

Оба подхода основаны на оценке характера иммунной реакции человека на антигены возбудителя, т. е. не являются методами прямого выявления инфекционного агента.

В связи с достаточно высокой распространенностью туберкулеза в нашей стране, Министерство здравоохранения РФ рекомендует ежегодно проводить скрининговое обследование детей в возрасте от 1-го года до 17-ти лет на наличие туберкулезной инфекции (в том числе при поступлении в детские сады и школы). Профилактическое скрининговое обследование обычно проводят с использованием внутрикожных проб. При наличии определенных противопоказаний или информированном отказе родителей от применения внутрикожных проб ребенку допускается назначение альтернативных методов обследования. Они включают исследование крови, основанное на выявлении высвобождения гамма-интерферона специфически сенсибилизированными лимфоцитами. На данный момент имеются два коммерческих диагностических теста этого направления: 1) QuantiFERON®-TB Gold; и 2) T-SPOT.TB (зарегистрирован в России).

Тест T-SPOT.TB допускается к использованию клиническими рекомендациями МЗ РФ и Российского общества фтизиатров по выявлению и диагностике туберкулеза у детей (2017). В соответствии с рекомендациями, при проведении скринингового обследования детей отрицательный результат T-SPOT.TB при отсутствии клинических симптомов заболевания (респираторного и интоксикационного характера, других локальных патологических проявлений) позволяет врачу-фтизиатру выдать справку об отсутствии у ребенка в настоящий момент активного туберкулеза.

К достоинствам этого метода можно отнести то, что подбор специфических антигенов исключает ложноположительные реакции, связанные с предшествующей вакцинацией БЦЖ (такие антигены отсутствуют на линиях Bacillus Calmette-Guerin, BCG) и перекрестными реакциями с большинством нетуберкулезных микобактерий окружающей среды (за исключением M. kansasii, M. szulgai и M. marinum). Напротив, лица, инфицированные микобактериями туберкулезного комплекса (M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum, M. microti, M. canetti) обычно имеют в крови Т-клетки, распознающие эти и другие антигены таких бактерий.

T-SPOT.TB тест не позволяет различать латентную инфекцию и активное заболевание.

Следует учитывать, что чувствительность и специфичность подобных методов в целях скрининга туберкулезной инфекции не достигают 100%. Поэтому такие тесты следует применять с учетом общей оценки индивидуального риска в комплексе со стандартными методами диагностики.

Материал для исследования: цельная кровь (с литий гепарином) – 2 пробирки, 4 мл.

источник

Сегодня существует альтернатива традиционным Манту и Диаскинтест (дст) – это квантифероновый (он же интерфероновый) тест в инвитро. Все три способа помогают обнаружить туберкулез на ранних его стадиях.

Метод квантифиронового теста перекочевал из стран, где заболеваемость туберкулезом на порядок ниже (Европа, США, Австралия). Ученые прорабатывают вариант замены традиционной диагностики на данный тест.

Вокруг этого ведутся споры, поскольку некоторые считают, что нельзя отменять систему исследований, которая на протяжении долгого времени давала позитивные результаты.

Их оппоненты доказывают крайнюю объективность такого теста и возможность его применения даже людям с аллергическими реакциями на туберкулин.

Сейчас метод нельзя назвать превалирующим, но он существует как альтернативное решение.

Особенно полезным это новшество оказалось для людей, которым противопоказано делать манту или дст, а также для детей в период карантина.

Чем отличается квантифероновый тест на туберкулез в инвитро от двух остальных способов диагностики?

Можно выделить такие отличия теста от манту и дст: при квантифироновом тесте не вводят подкожных инъекций, а используют взятую венозную кровь (для дальнейшей проверки на количество гамма-интерферона), тогда как при других способах используются подкожные инъекции, что исключает их применение при заболеваниях или ослабленном иммунитете.

Поскольку в первом случае нет контакта с организмом, то нет и побочных эффектов, во втором – могут быть побочные реакции, если человек не переносит вводимое вещество.

Не может быть запрета на квантифероновый тест, потому что он проводится не в организме непосредственно, манту и дст могут быть запрещены, при хронических заболеваниях или обострениях.

При проведении дст и теста в инвитро не бывает реакции на БЦЖ, а при манту бывает реакция на антитела после БЦЖ.

Схема проведения квантиферонового теста в инвитро следующая: пациент сдает необходимое количество венозной крови в специально организованных пунктах. При этом кровь можно брать только при условии, что человек не ел на протяжении восьми часов.

Дальше кровь размещают в три пробирки и анализ нацелен на сканирование наличия в крови гамма-интерферона, который вырабатывается только у людей, заболевших туберкулезом.

Гамма-интерферон выделяется Т-лимфоцитами при нахождении микробактерий туберкулеза.

Инвитро способен определить белки, что имеются в составе микробактерии туберкулеза двух типов: человеческого и бычьего, поскольку на них вырабатываются антитела.

Так происходит объективное исследование наличия возбудителя туберкулеза в организме через сканирование гамма-интерферона в крови.

Также в случае положительного результата при прохождении теста необходимо провести работу по дифференциации найденного.

Она направлена на разграничение возбудителей туберкулеза и других микобактериоз, которые могут быть выявлены в процессе анализа.

Во время неоднократного проведения теста в инвитро было обнаружено, что третья часть пациентов имеет в крови микобактерии. Несмотря на это, туберкулез может развиться лишь у 5-9 % людей.

Умножают риск развития заболевания такие неблагоприятные факторы:

1. Контакт с людьми, владеющими открытой формой туберкулеза (чаще всего это медики или родственники).
2. Слабый иммунитет (сюда относят людей ВИЧ-инфицированных, диабетиков или вышедших из заключения).

Квантиференовой тест может быть назначен в случаях:

1. Если манту дал положительный результат.
2. Если у пациента были контакты с больным туберкулезом.
3. Если наблюдается высокий риск контактирования с возбудителем.
4. Если у пациента есть противопоказания к традиционной туберкулинодиагностике или дст.
5. В случае обследовании мигрантов.

Преимущества квантиферонового теста сравнительно с дст и манту:

• Нет побочных эффектов. Это обусловлено тем, что непосредственно анализ проводиться после изъятия пробы;
• Высокая специфичность. Результаты теста не могут быть ложноположительными.
• Отсутствие ограничений в проведении. Квантифероновый тест можно проводить даже при протекании острых вирусных заболеваний или сразу после вакцинации;
• Объективность результатов. При таком методе исследования результаты добываются лабораторным путем, что на порядок объективнее, чем при визуальном анализе кожных проб;
• Возможность применять людям, которые имеют аллергические реакции на туберкулин или противопоказания к кожным пробам;

Как и в каждом методе анализа, в квантифироновом тесте в инвитро есть свои недостатки.

Среди них: исследование (сравнительно с манту и дст) дорогостоящее; может показывать ложноотрицательный результат, поскольку владеет средней чувствительностью; невозможность определить латентная форма туберкулеза в организме или непосредственно воспаление.

Отдельной проблемой является пока нераспространенность пунктов, где сделать такой тест возможно.

Так, в России центры расположены только в крупнейших городах (Москва, Санкт-Петербург, Новосибирск), что однозначно усложняет доступ к такого рода исследованию.

источник

Определение ДНК возбудителей туберкулеза, комплекса микобактерий: M. tuberculosis, M. bovis, M. bovis BCG, M. microti, M. africanum в сыворотке крови методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме «реального времени».

Туберкулёз (от лат. tuberculum — бугорок) – распространённое, социально зависимое заболевание человека. Болеют им и животные. Возбудитель туберкулёза открыт Р. Кохом в 1882 г. Это кислотоустойчивые аэробные бактерии (74 вида) рода Мycobacterium, широко распространённые в почве, воде и у животных. У человека чаще всего возбудителем является Mycobacterium tuberculosis. Второй по частоте является Mycobacterium bovis. Оба вида очень устойчивы ко многим факторам внешней среды, а в организме очень долго остаются жизнеспособными и могут вызвать заболевание через многие годы после заражения. Очень важно, что микобактерии туберкулёза могут образовывать так называемые L-формы. Сохраняясь в организме, они создают противотуберкулёзный иммунитет.

Длительное время туберкулёз может протекать скрыто и обнаруживаться случайно, хотя нередко уже проявляются такие симптомы, как слабость, быстрая утомляемость, субфебрильная температура, ночная потливость, а в крови – анемия и лейкопения. В настоящее время, несмотря на все достижения антимикробной терапии, туберкулёз угрожает будущему нации. Поэтому все методы диагностики, особенно его латентных форм являются крайне важными.

Существует много методов лабораторной диагностики туберкулёза: микроскопия мазка (чаще всего для этого используют мокроту), классический культуральный метод, ИФА. Всем им присущи достоинства, но и определённые недостатки, в частности, обнаружение микобактерий только в случае их достаточного количества.

В последние годы для диагностики используют полимеразную цепную реакцию (ПЦР). Её высокая чувствительность позволяет обнаружить в исследуемом материале единичные клетки и даже их фрагменты ДНК. Метод исключает перекрёстные реакции и специфичность достигает 100%. ПЦР позволяет дифференцировать ограниченные и диссеминированные формы туберкулёза, особенно у детей даже при отрицательных результатах микробиологических исследований.

• определяемый фрагмент — специфичные участки ДНК микобактерий;
• специфичность определения — 100%;
• чувствительность определения- 100 копий ДНК микобактерий в образце.

1. Макаревич А.Э. Заболевания органов дыхания – М. Высшая школа, 2000. – 368 с.
2. Jacobs D. et al. Laboratory test handbook/ Lexi-Comp./2002 — pр. 828 — 829.

• Лихорадка, характеризующаяся ежедневным двойным повышением и понижением температуры тела. На фоне туберкулиновой гиперчувствительности или туберкулиновой анергии.
• Острые воспалительные заболевания верхних и нижних дыхательных путей с длительным контактом с туберкулёзным больным в анамнезе.
• Ненормальная реакция на туберкулиновую пробу (гиперчувствительность или анергия) на фоне обострения какого-либо системного заболевания.
• Подозрение на системную волчанку.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Тест качественный. Результат выдаётся в терминах «обнаружено» или «не обнаружено».

• «обнаружено»: в анализируемом образце обнаружены специфичные для микобактерий фрагменты ДНК, инфицирование микобактериями;
• «не обнаружено»: в анализируемом образце не обнаружены специфичные для микобактерий фрагменты ДНК или концентрация возбудителя в образце ниже границы чувствительности теста.

Обращаем внимание, что сроки выполнения ПЦР-исследований могут быть увеличены при проведении подтверждающих тестов.

источник

добрый день. У меня огромная проблема. Отекает лицо от пищи,также бледнеет,станлвиться убитым.
Хотя я не курью и не пью.,веду сдоровый образ жизни.
Пробиотики любые,разные помогают первые 2- 5 дней помогают,
Кал всегда несформировываный,каша..
после нифуроксазида калл полностью сформировавшийся,как только отменяю сразу может быть диарея.
При приеме нифуроксозида пропадает давление слева чуть ниже пупка и пропадают отеки ,но не более 4 дней,потом снова начинаются,
. Но если переодически Принимать ,то уже не будет помогать.
При отеках восполяются прыщи,и много слюны во рту даже после еды. сало как только кладу в рот,я уже чуствую жение губ,отеки..
От фестала,препаратов содержащих лактобактерии,печеночных препаратов хожу по 10 раз за ночь в туалет..
Когда заболеваешь простудными заболеваниями начинаешь повышать иммунитет ,отеки проходят.
Голос постоянно севший,нифкроксазид и бифиформ децкий помогает(как уже говрил не более 2-4 дней)
Живот постоянно напряжен,непроизвольно..
Основные боли слева давление,иногда справа рядом с пупком и сверху над пупком (5см примерно).
Признак отеков это интенсивное выделение слюней после еды..
жар и колышки по лицу после сока томатного или кислого .
жидковатый стул может быть сразу после приема пищи,но чаще после этого отеки могут пройти.
Отекает от кислого и быстроусвояемого(мед,сгущенка,повидло,консервации,компоты,жирное..)
в диете при гастродуоден сказано что нельзя зеленые овощи,помидоры со шкуркой,мясо жилистое и твердое,это очень тонко и точно замечено,в соем случае тоже самое..
воможно еще и качание вызывает отеки..при качании голос садится,уши залаживает,может это и отеки вызывает.

,слюни на подушке во время сна
Руки дерматозит( красно-синие потресканые) , когда нету отеков,то белые какбудто увлажн кремом намазаны.
Цвет лица меняется при отеках,оно становится убитое,красное..
У гомеопата более 4 мес лечусь,непомогает не капли.
Был у гастроэнтеролога,единственное что помогало,это нифуроксазид.

анализы
бифидумбактерии Агабабов Эрнест Даниелович :

В связи с расширением Европейского Союза на повестке дня возникли не только новые политические и экономические вопросы, но и одна медицинская проблема, а именно: эпидемия туберкулеза.

Случайный контакт носителем туберкулезной палочки безопасен: он не является источником инфекции. А вот при длительном и регулярном общении с обладателем открытой формы туберкулеза заразиться можно наверняка. Избежать болезни поможет профилактика.

Микозы – заболевания, причиной которых являются эукариотные микроорганизмы, относящиеся к царству грибов.

Впервые принципы антиретровирусной терапии (АРТ) при ВИЧ-инфекции были сформулированы Национальным Институтом Здоровья США в 1997г.

Музыка является неотъемлемой частью нашего бытия, поскольку способна доставлять особое эстетическое наслаждение, которое могут переживать только люди и несвойственное животным. Вместе с тем, такое наслаждение резко снижает уровень гормонов стресса.

источник

Квантифероновый тест, это такая процедура, которая дает возможность с высокой степенью точности обнаружить туберкулез даже на первоначальной стадии. Способ внедрен не так давно, в связи с чем его испытание в клинических условиях продолжается.

По мнению врачей фтизиатров, формальный отказ от туберкулинодиагностики и применение названного выше метода диагностики было плохим решением. Так как эффективная экономия от внедрения этой процедуры стала важнее качества диагностики и здоровья пациента.

Несмотря на новую технологию, нельзя забывать про традиционные способы диагностики, дающие существенный эффект последнюю половину века. При их содействии получилось снизить смертность и процент заболеваемости.

Квантифероновый тест на туберкулез в Инвитро был создан как альтернатива для туберкулинодиагностики. Однако не опробован в клинических условиях. Только по результатам обследований можно признать высокую точность диагностики процедуры.

Основа квантиферонового теста состоит в установлении гамма-интерферона, высвобождаемого Т-лимфоцитами во время встречи с микобактерией туберкулеза. Инвитро устанавливают специфичные белки, имеющиеся в составе микобактерии человеческого туберкулеза и бычьего. С их поддержкой создаются специальные антитела. Обнаружение протеинов при содействии квантиферонового теста считается качественным показателем присутствия палочки Коха в теле человека.

При проведении процедуры также возможно обнаружение микобактериоза. Если результат диагностики положительный, то следует выполнить дифференцированное диагностирование между микобактериозом и возбудителем туберкулеза.

Тестирование обнаруживает наличие гамма-интерферона к протеинам. Итоговый результат устанавливается впоследствии оценки проверок с двух пробирок.

При практическом использовании квантиферонового тестирования медиками было установлено, что треть от всего народонаселения заражена микобактериями. Но лишь у 10% болезнь начинает развиваться. Неблагоприятные условия для жизни активизируют инфекцию при условии наличия слабой иммунной защитой.

В категорию высокого риска к положительному квантифероновому тесту относят:

• работа в противотуберкулезном учреждении;
• выходцы исправительных учреждений;
• носители ВИЧ-инфекции;
• граждан с сахарным диабетом;
• проживание с больными.

Квантифероновое обследование проводится при отсутствии возможности выполнить Диаскинтест и пробы Манту, в ситуациях:

1. при острых и соматических расстройствах, при обострении хронических заболеваний
2. при непереносимости туберкулина
3. при аллергических, дерматологических заболеваниях в период обострения
4. во время карантина в организациях, которые посещает ребенок.

Ложный положительный результат пробы Манту может встречаться у человека, имеющего индивидуальную непереносимость туберкулина. Подобная характерная черта туберкулинового теста стала главной причиной отказаться от пробы.

Сходные и отличительные черты тестов на туберкулез: Манту, квантифероновый тест, диаскинтест

• тестирование Манту и Диаскинтест являются дерматологическими пробами, а квантифероновое обследование выполняется при заборе крови.
• выполнение квантиферонового теста не имеет побочных эффектов
• к туберкулинодиагностике и диаскинтесту имеются противопоказания
• квантифероновый и диаскинтест имеют большую специфику
• при проведении пробы Манту может встречаться ложный результат

Зависимость от времени выполнения профилактической прививки у квантиферонового тестирования отсутствует, прочие процедуры выполняются спустя месяц после БЦЖ. Беспристрастное интерпретирование результатов возможно лишь при квантифероновом тесте.

Из этого следует ряд плюсов квантиферонового теста:

1. отсутствие ложных положительных результатов
2. нет ограничений и противопоказаний
3. отсутствие побочных реакций
4. безвредность
5. большая чувствительность и специфика.

Показания для выполнения квантиферонового теста:

• контактирование с больным туберкулезом
• высокая опасность контакта с возбудителем
• положительный результат пробы Манту
• противопоказания к проведению диаскинтеста и туберкулинодиагностики
• обследование мигрантов.

При квантифероновом тестировании не проводится разделения между активным и скрытым туберкулезом. При положительном результате необходим прием у фтизиатра, который установит последующий план лечения больного. Если установленный уровень гамма интерферона не говорит о наличии инфицирования, возможен риск скрытой фазы болезни, в этом случае необходимо вести динамическое наблюдение за пациентом.

Отрицательный результат сообщает об отсутствии инфекции в теле. Если результат положительный, то возможность присутствия болезни имеется. Если результат сомнительный. то можно предполагать чувствительность к ТВ-антигену.

Что означает положительное значение квантиферонового теста:

• Инфицирование нетуберкулезными бактериями
• Присутствие микобактерий туберкулеза в теле
• Оценка при спорном значении теста
• Плохая преаналитическая подготовленность
• Персональная особенность иммунитета.

Если получены вышеназванные результаты, выполняется новый забор крови.

Что означает отрицательный показатель теста:

• иммунодефицит
• ранняя стадия заражения
• невыполнение правил преаналитики
• возраст до 5 лет

Отрицательный результат не гарантирует полное исключение заражения туберкулезом.

Оценивание итогов теста выполняется учитывая клинико-эпидемиологическую картину и прочие анамнестические свойства лица.

Новый тест на туберкулез, названный диаскинтестом пришел на смену стандартной туберкулинодиагностике. Основой методики стало подкожное введение определенного количества белка, являющегося специфичным для туберкулезных микобактерий. Положительные значения говорят о том, что пациент имеет инфекцию в активной или скрытой стадии. Отрицательный показатель не гарантирует отсутствие инфекции. При выраженном иммунитете против туберкулезной микобактерии характерна негативная проба.

Однако медицинские результаты диаскинтеста считаются более точными и универсальными по сравнению с пробой Манту.

Новая методика диагностирования устанавливает тубинфицированность и основана на раскрытии ответа индивидуума на присутствие микобактерии. Исследование разработано в России и демонстрирует высокую точность.

• В растворе содержатся видоспецифичные белки.
• Высокая чувствительность.
• Результаты более точные
• Применяется при динамическом наблюдении за ходом лечения

Различие в составе препаратов теста Манту и диаскинтеста предполагает разные клинические показатели обоих тестов. Во время введения туберкулина возникают ложноположительные реакции, вызванные введением немалого числа чужеродного антигена. Диаскинтест дает положительный результат, если тело человека ранее имело дело с туберкулезными антигенами. Если проба Манту дала положительный эффект, то требуется профилактическая терапия, а это не всегда является разумным решением.

источник

Туберкулез — опасное заболевание, которое успешно лечится при своевременной диагностике.

Одно из наиболее информативных исследований, позволяющих выявить недуг на ранней стадии, носит название метод ПЦР (полимеразной цепной реакции).

Анализ ПЦР — не только самое информативное, но и одно из самых доступных исследований, которое позволяет выявить туберкулез на ранних стадиях.

Все живые микроорганизмы, включая вирусы и бактерии, содержат в своей структуре молекулы РНК и ДНК. Выделив эти кислоты, можно с большой достоверностью сказать, какие чужеродные агенты присутствуют в крови человека, и поставить точный диагноз.

Суть метода ПЦР заключается в особой обработке образцов биологических жидкостей, в результате чего можно определить, к какому виду относятся присутствующие в нем микроорганизмы.

Методика ПЦР применяется у людей с тяжелыми поражениями легких в тех случаях и респираторными проявлениями (сильный кашель, кровохаркание), когда точно диагностировать болезнь по клиническим симптомам невозможно.

Рекомендуется пройти исследование и после непосредственного контакта с носителем заболевания. В число преимуществ, которыми он обладает, входят:

• скорость выполнения — для получения результата не нужно выращивать культуру возбудителя или проводить другие сложные процедуры;
• высокая информативность — при диагностике туберкулеза точность анализа достигает 90% и выше;
• высокая чувствительность и специфичность — для выявления возбудителей болезни в материале может содержаться всего одна клетка вируса;
• универсальность — для анализа подходят практически любые биологические жидкости: мокрота, кровь, смывы бронхов.

Для сравнения: точность микроскопии мазков мокроты, которая используется для выявления туберкулеза, составляет всего 40-50%, а при низком количестве возбудителей снижается до 10% и меньше. Культуральные исследования мокроты более информативны, но для получения результатов требуется от 2 до 8 недель.

Можно использовать ПЦР на туберкулез вместо Манту, если у человека имеются какие-либо противопоказания к пробе.

К недостаткам методики относится риск получения ложноотрицательного результата. Иными словами, отсутствие в мокроте, крови или моче специфического ДНК еще не говорит об отсутствии туберкулеза у больного.

Важно. При диагностике туберкулеза у детей чувствительность анализа ПЦР ниже, чем у взрослых, и составляет около 25-83%.

Фото 1. Делать ПЦР вместо Манту ребенку, это хороший вариант, если он аллергик или часто болеет.

Процедура проведения анализа ПЦР проводится посредством специального прибора под названием амплификатор, и состоит из четырех этапов. Для проведения исследования необходимы участки ДНК, с которых начинается синтез молекул, нуклеотиды (основы молекул ДНК), а также полимераза, или фермент, ускоряющий проведение процедуры.

1. Забор биологического материала (мокрота, кровь, смывы бронхов).
2. Прогревание образца до температуры около 98% для разрушения первичной структуры цепочки ДНК.
3. Отжиг, или снижение температуры на несколько градусов, чтобы связать праймер с нитью ДНК.
4. Синтез молекул, необходимых для получения результата.

После проведения 25-30 подобных циклов образуется определенное количество копий ДНК вирусов, по которым легко определить возбудителя заболевания.

Внимание: анализ ПЦР не отличает «мертвые» микроорганизмы от «живых», поэтому результат может быть положительным в течение определенного времени после проведенного лечения.

Если сдается анализ крови ПЦР на туберкулез, то нет необходимости в специальной подготовке, но больным рекомендуется придерживаться общих правил: воздержаться от приема пищи не менее чем на 8 часов, исключить алкоголь и прием медикаментозных препаратов, не курить в течение часа перед забором материала.

Мокроту собирают в утреннее время после чистки зубов и тщательного полоскания полости рта.

Если экссудат выделяется плохо, накануне вечером следует принять отхаркивающий препарат или сделать ингаляцию. Диагностическую ценность имеет мокрота со слизью, гноем, белыми или желтоватыми вкраплениями.

Если взять мокроту на анализ невозможно, для выявления возбудителей заболевания используются смывы из бронхов. Такой анализ не требует подготовки, а забор материала выполняется следующим образом. С помощью гортанного шприца больному вливают в трахею раствор хлорида натрия, который вызывает сильный кашель — выкашлянная жидкость используется для исследования.

Внимание. Результат анализа искажают антибиотики, гепарин и другие препараты, использующиеся для местного лечения, поэтому исследование рекомендуется проводить через 10-14 дней после приема.

источник