Культуральное исследование мокроты на туберкулез

В здоровом организме бронхи вырабатывают слизь без цвета и запаха, которая необходима для того, чтобы очищать дыхательные пути от попадающих туда микроскопических частичек пыли, вдыхаемого мусора и микробов. Механизм очищения органов дыхания очень прост: реснички эпителия, устилающего их, поднимают слизь наверх вместе с чужеродными частицами. В норме такой мокроты вырабатывается очень мало, поэтому здоровый человек не замечает ее отделения, и она проглатывается вместе со слюной.

Но на фоне любого воспалительного процесса, сопровождающего, какое-либо заболевание дыхательных путей, в том числе и туберкулеза, количество продуцируемой бронхами мокроты значительно возрастает. Это связано, в первую очередь, с раздражением бокаловидных клеток, а также, при присоединении воспалительного процесса, когда клетки иммунной системы организма начинают поглощать патогенные микроорганизмы, образуются гнойные массы. Они также формируют отделяемое в виде мокроты при заболеваниях дыхательных путей. С помощью кашля организм выводит эту жидкость – именно с помощью нее диагностируются многие бронхо — легочные патологии и выявляется степень и характер течения воспалительного процесса.

Количество выделяемой при влажном кашле мокроты также указывает на некоторые особенности течения заболевания. При этом она может, не выводится посредством кашля совсем (трудноотделяемая мокрота) или, наоборот, биоматериал можно собрать без каких-либо трудностей. Два самых распространённых исследования этого отделяемого – это бактериоскопия и посев: именно эти два этапа позволяют провести точную диагностику заболевания, вызвавшего повышенное отделение мокроты и как следствие, влажный кашель с рядом сопутствующих симптомов.

1. Для начала необходимо позаботиться о контейнере – его можно купить в любой аптеке. Это специализированная емкость для сбора мокроты: она стерильна, с широким горлышком и крышкой. Также контейнер могут выдать в медицинском учреждении. Необходимый объем биоматериала для исследования – 5мл, поэтому емкость должна быть соответствующая.
2. Самым подходящим временем для сбора мокроты являются утренние часы, поскольку за время ночного сна скапливается достаточное количество и собрать ее гораздо легче. Однако бывают такие обстоятельства, когда мокрота забирается в любое время суток.
3. Перед тем, как приступить к сбору мокроты на анализ, тщательно прополоскать ротовую полость, при этом чистить зубы перед этим нельзя.
4. Биоматериал для анализа собирается следующим образом: сделав максимально глубокий вдох, задержать дыхание, после чего медленно выдохнуть – повторить еще раз. Сделав третий глубокий вдох, резко выдохнуть, как бы выталкивая воздух из лёгких, и как следует откашляться. Во время этого рот должен быть прикрыт марлевой повязкой.
5. Контейнер необходимо придерживать у нижней губы — сплюнуть в него все содержимое, которое получилось откашлять и плотно закрыть стерильную баночку крышкой.
6. Если после одного раза мокроты отошло очень мало, то процедуру следует повторить, для того чтобы собрать необходимое для исследования количество(5-7 мл.)

Для начала можно попробовать поменять положение тела при откашливании: облегчают отхождение мокроты наклоны вниз, положения, лежа на боку или на животе.

Если такие меры не привели к положительному результату, то можно принять отхаркивающие средства или сделать ингаляцию. Отхаркивающие препараты назначает лечащий врач, и начинать принимать их необходимо за сутки до сбора мокроты (бромгексин, амбробене и другие традиционные препараты). Совместно с приемом таких препаратов необходимо употреблять достаточно большое количество жидкости для облегчения отхождения мокроты.

Ингаляцию для этой цели делают на основе раствора соды и соли. Вдыхать такую смесь следует через небулайзер 10-15 минут(40-60 мл.). Если начинается усиленное слюноотделение, то ее нужно сплюнуть, только потом собирать мокроту.

Если не удается собрать мокроту всеми вышеперечисленными способами, то пациенту назначается процедура бронхоскопии. Еще такое исследование проводится в случаях, когда необходимо собрать секрет мокроты с бронхов, без примесей слюны и носоглоточной микрофлоры.

Процедура проводится посредством двух методик:

• В бронхи вводится 100-200 мл. физ. раствора через вставленный катетер, после чего полученная жидкость посредством аспирации выводится обратно.
• В просветы бронхиального дерева вводят катетер для прямой аспирации слизи.
  Пациенту необходимо пройти подготовку к этой процедуре: не употреблять пищу и жидкость в течение 6 часов, как правило, она назначается на утреннее время, чтобы пациенту было легче выдержать такой интервал времени. А после нее не употреблять аспириносодержащие препараты, которые обладают способностью разжижать кровь.
  И промывные воды, и непосредственно мокрота, полученные таким способом, используются для всех видов исследований на данном биоматериале.

Если сдача мокроты проводится в условиях стационара, то медицинский работник предоставляет пациенту специально оборудованную процедурную, консультирует по поводу процедуры сдачи и контролирует весь процесс. Также медработник подписывает контейнер с биоматериалом и отправляет его на исследование.

Анализ мокроты на туберкулез позволяет выявить легочный тип развития заболевания. Основными показаниями для его проведения являются:

• Кашель затяжного характера (влажный или сухой);
• Выявленные затемнения на снимках рентгена;
• Повышенная температура тела.

Для постановки диагноза туберкулез легких, анализ мокроты является обязательным в спектре исследований, проводимых при подозрении на данное заболевание. Обязательным исследование на инфицирование туберкулезом считается в тех случаях, когда больной больше трех месяцев страдает от сухого кашля, который не поддается никаким видам лечения.

В связи с тем, что биоматериал для исследования на микобактерии берется не только при помощи непосредственного отхаркивания, но и путем бронхоскопии, данное исследование имеет противопоказания. При процедуре бронхоскопии вводится трубка в верхние органы дыхания под общей или местной анестезией. Поэтому, такая методика забора анализа противопоказана:

• пациентам, страдающим аллергией на обезболивающие медикаменты;
• людям с тяжелой дыхательной недостаточностью;
• с нарушениями свертываемости крови;
• пациентам, в ближайшие пол года перенесшим инфаркт миокарда или инсульт;
• с такими заболеваниями, как эпилепсия и шизофрения.

Детям до 18 лет процедура бронхоскопии назначается и делается только с согласия родителей. Сама процедура является безопасной и осложнения вызывает крайне редко, но препараты, предназначенные для общей и местной анестезии, могут вызывать непереносимость и аллергические реакции. Этот вопрос необходимо обязательно обсудить перед процедурой с лечащим врачом.

Самым весомым плюсом этого анализа является стопроцентная точность диагностики и возможность выявления туберкулеза на ранних этапах заражения. Тест включает в себя забор нескольких проб, которые способны однозначно указать присутствие или отсутствие возбудителя в легких пациента.

Сам анализ вариативен, и проводить его можно удобным для пациента способом; данная методика выполняется в короткие сроки, и доставляет минимум дискомфорта пациенту.

Такой метод сбора анализа на микобактерии не имеет побочных воздействий на организм пациента. Нет необходимости вводить медицинские препараты или сдавать анализы крови, мочи. По сути, сбор анализа на микобактерии происходит естественно, без особых трудностей и дискомфорта для пациента. Часто это становится актуально, когда речь идет о малолетних детях, которые весьма негативно переносят такие диагностические процедуры.

С помощью такого информативного метода, как бронхоскопия, медики имеют возможность выявить и другие патологии небактериального характера на ранних сроках (бронхиальная астма, рак легких и т.д.). Расширенное исследование качественного состава мокроты позволяет произвести диагностику на любом этапе развития заболевания . Таким образом, анализ может не только подтвердить или опровергнуть диагноз туберкулез, но и установить причину возникновения тревожной симптоматики.

К минусам можно отнести достаточно долгое ожидание результата анализа. На это есть две главные причины: многостороннее обследование биоматериала, включающее в себя бактериологический анализ и посев мокроты на питательные типы сред, который и является самым долгосрочным видом исследования. Время ожидания может растянуться от 3 недель до двух месяцев.

К отрицательной стороне также можно отнести многократное проведение бронхоскопии при подозрении на заражение туберкулезом, при отсутствии главного симптома – кашля.

После того как биоматериал поступил на исследование в лабораторию, специалист в первую очередь, занимается его визуальной оценкой. При тяжелых формах туберкулеза, например, в мокроте наблюдаются вкрапления крови или кровяные сгустки. Но такое отделяемое не является стопроцентным показателем заражения туберкулезом – наличие крови в мокроте может говорить и о крупозной пневмонии, и об опухолевых процессах, о бронхоэктатической болезни.

Если все же речь идет о туберкулезном заражении, то при дальнейшем исследовании в мокроте будут обнаружены микобактерии. В современной медицине используются две основных проверенных временем методики лабораторного исследования мокроты: бактериоскопическая и культуральная (биологическая).

Бактериоскопия применяется в диагностике туберкулеза уже более ста лет. Она включает в себя макроскопическое описание, микроскопическое исследование – при нем выявляются эритроциты, волокна легочной ткани, коралловидные, спириллы Куршмана и т.д. В мокроте зараженного туберкулезом пациента обнаруживаются, помимо микобактерий, темные фрагменты (зерна) – это частицы старых, распадающихся очагов.

Этот метод используется не только для выявления и диагностики такого коварного заболевания, как туберкулез, также он помогает в выборе рациональных схем химиотерапии и оценке их клинической эффективности.

Бактериологическая диагностика проводится в таком порядке:

1. Обработка материала, поступившего в лабораторию.
2. Микроскопическое исследование мокроты.
3. Посев мокроты на туберкулез.
4. Идентификация микроорганизма при помощи бактериологического и биохимического тестирования.
5. Определение лекарственной чувствительности туберкулезной палочки.

Проводится исследование мокроты на туберкулез с помощью двух методов: обычная (простая) бактериоскопия и метод флорации. Простой метод включает в себя приготовление мазков из комочков мокроты – их помещают между двумя предметными стеклами. Затем одна часть биоматериала окрашивается по Грамму на общую флору, а другая – на микобактерии туберкулеза.

С начала 90-х годов многие современные лаборатории стали использовать в диагностике туберкулеза флюоресцентную микроскопию, основанную на кислотоустойчивости микобактерии. Под воздействием ультрафиолетового излучения туберкулезные палочки проявляются в ярко-желтом цвете на черном фоне.

Культуральный метод включает в себя такие диагностические процедуры:

1. Удаление белковых масс путем обработки мазка разжижающими веществами.
2. Удаление сопутствующей бактериальной формы с помощью деконтаминации образца.
3. Встряхивание.
4. Отстаивание смеси.
5. Помещение в холодную центрифугу.
6. После этого содержимое пробирки отбирается на посев:
   • агаровой среды,
   • плотной яичной среды,
   • бульонного культивирования автоматизированного типа.

Культуральный посев мокроты повышает точность исследования в разы — при более легких степенях развития заболевания, при которых бактериологический метод может показать отрицательный результат. Однако работа таким методом требует хорошо оснащенных, современных лабораторий, которых, к сожалению, не имеют многие небольшие города и поселки городского типа.

Самыми быстрыми и точными видами анализов на обнаружение туберкулезной палочки являются молекулярно-генетические методы диагностики. Это современные комплексы анализов, включающие в себя расшифровку генома микобактерии туберкулеза. Такие молекулярно-диагностические методы открыли в современной медицине хорошие перспективы на последующее развитие эффективных методик борьбы с этим коварным заболеванием. Наиболее часто используется способ полимеразной цепной реакции – это тест предназначен для выявления микобактерии в мокроте или установления вида бактерий в культуральных средах.

Что имеет первостепенное значение в постановке диагноза — это время: вместе с обработкой материала, идентификация туберкулезной палочки занимает всего 5-6 часов. Кроме того, реакция ПЦР обладает высокой чувствительностью и специфичностью, что является залогом стопроцентно точного результата.

источник

Туберкулез является одним из самых массовых заболеваний в мире. Это трудноизлечимая инфекционная болезнь, которая не проходит без последствий для организма и может привести к смертельному исходу. Основные клинические проявления туберкулеза – субфебрильная температура тела на протяжении нескольких недель и кашель, который сопровождается выделением мокроты, зачастую кровавой.

Анализ мокроты на выявление бактерий туберкулеза является одним из важнейших диагностических методов болезни. В случае туберкулезного воспаления, как и многих других воспалительных заболеваний дыхательной системы, «мокрый» кашель является защитным механизмом организма. При помощи этого процесса организм пытается избавиться от инфекции.

Выявлением пациентов, заболевших туберкулезом, занимаются врачи первичных лечебных заведений. Но подтверждается диагноз в специализированном противотуберкулезном учреждении. Сбор мокроты на микобактерии туберкулеза относится к обязательным диагностическим минимумам.

Симптоматика туберкулезной инфекции может не проявляться длительное время. При развитии патологии появляется сухой кашель, на смену которому приходит мокрый, с выделением патологической слизи.

Характер самого секрета может быть разным:

Изначально это вязкая, бело-гнойная мокрота, в последующем ее вязкость увеличивается.

Иногда в нем могут обнаруживаться прожилки крови, как проявление кавернозного процесса в легочной ткани.

В редких и тяжелых случаях слизистые выделения из легких могут быть представлены сплошной кровавой массой.

При активном туберкулезном инфекционно-воспалительном процессе не встречается пенистый секрет, как при бронхите или простуде.

Количество мокроты за сутки в течение всей болезни также изменяется. На пике болезни оно может достигать 300-400 мл за сутки. При этом постепенно отделение бронхиального секрета затрудняется, кашель приобретает спазматический характер. Первоначально мокрота преимущественно отходит утром, далее – в течение всего дня.

Основные методы выявления микобактерии туберкулеза в биологических жидкостях:

Согласно рекомендациям ВООЗ, забор проводят не меньше двух раз. Исследование назначают при обращении к врачу пациента с жалобами на кашель, который длится более 3 недель. После чего проводят бактериоскопическое исследование и выявляют наличие кислоустойчивых бактерий.

Существует определенная последовательность сдачи анализа мокроты при подозрении на туберкулез:

1. Всем пациентам, которые подвергаются клиническому обследованию, производят забор двух образцов секрета для микроскопии.
2. Контейнеры для сбора должны быть одноразовые с широкой горловиной, объемом не меньше 5-7 мл.

Первую порцию бронхиального секрета пациент собирает и сдает при посещении лечебного учреждения в день обращения с соответствующими жалобами.

Вторую порцию пациент собирает дома самостоятельно утром. Медицинский сотрудник должен разъяснить правила забора секрета.

При диагностическом исследовании важно знать правила сбора мокроты на туберкулез:

1. Забор материала производят в утреннее время до приема пищи – за ночь во время сна образуется большое количество мокроты, что облегчает непосредственно проведение забора выделений и повышает информативность исследования.
2. Нужно провести все гигиенические процедуры ротовой полости: почистить зубы и пополоскать слизистую рта – это проводится с целью предотвращения попадания в патологический материал остатков пищи и микрофлоры ротовой полости.
3. Перед самой процедурой не следует принимать противокашлевые лекарственные препараты, так как угнетение кашля может затруднить отхождение слизи.
4. Вечером перед сном накануне забора материала назначают препараты, которые облегчают отхождение секрета (муколитики). Если отхождение мокроты затруднено, то в таком случаем применяют ингаляционное введение разжижающих или отхаркивающих лекарственных средств.

Нужно приготовить стерильную герметическую емкость для материала.

Помещение, где проводится забор, должно быть хорошо проветрено, соответствовать санитарным нормам, быть отдаленным от большого собрания людей.

Для облегчения отхождения секрета можно выпить теплой воды. После этого хорошо откашливаются и сплевывают мокроту в контейнер. Необходимо проследить, чтобы не была сплюнута слюна.

Забором материала занимаются работники лечебных медицинских учреждений. Лучше всего сдавать мокроту под контролем медика, который определит правильность выполнения процедуры. Изучением патологического материала занимается лаборант, задача которого заключается в точном и правильном исследовании мокроты.

Мокроту для исследования на туберкулез необходимо доставить сразу же после ее забора. В крайнем случае, она хранится не более семи дней в холодильнике при температуре +3°С. При транспортировке все контейнеры плотно упаковывают в специальные биксы, фиксируя их в вертикальном положении. Должна быть защита от УФ лучей. К каждому боксу прикрепляют описание образцов ТБ-05(а), дату и номер забора.

Бактериоскопическое исследование заключается в создании мазка на предметном стекле, который проходит определенные этапы обработки. Одним из них является окрашивание по методу Циля-Нильсена. Далее проводят пересмотр 100 полей зрения. Если не обнаруживаются МБТ, то просматривают еще дополнительно 200.

Также исследуемый материал окрашивают карболовым фуксином. Затем обесцвечивают 5% раствором серной кислоты или 3% солянокислым спиртом. Затем мазок окрашивают метиленовым синим и просматривают в микроскопе с применением имерссионного масла.

Важно! Всем пациентам с подозрением на туберкулез проводят микроскопию трех различных образцов мокроты. Это может выполнить любая клиническая лаборатория. Данное исследование входит в диагностический минимум на предмет туберкулезной инфекции.

Микроскопическим методом обычно выделяют около 75% всех бактериовыделителей среди впервые заболевших туберкулезом. Важно придерживаться кратности диагностических мероприятий – это повышает выявляемость и информативность.

При своевременно проведенном бактериоскопическом исследовании можно выявить больного на начальной стадии заболевания, изолировать его, и уже в ближайшее время начать специфическую химиотерапию, что, в свою очередь, снизит вероятность возникновения осложнений.

Бактериологический метод исследования проводят при помощи таких способов, как:

• люминесцентная микроскопия мазков;
• посев мокроты на туберкулез;
• биологический способ (заражение морских свинок);
• иммуноферментное исследование;
• молекулярно-генетический способ;
• ВАСТЕС 460 – жидкостно-культуральная система;
• MGTT 960;
• амплификация нуклеиновых кислот – ПУР.

В основном эти методы относят к высоко специализированным и проводят в специальных лабораториях.

Расшифровка результатов анализа на наличие микобактерии туберкулеза заносится в форму ТБ-05 (заполняется на каждого пациента). Данное заключение содержит следующие пункты:

• название ЛПУ;
• дата заполнения;
• ФИО, возраст, пол, адрес пациента;
• причина проведения анализа (диагностика, контроль);
• номер образца и районный идентификационный номер пациента;
• дата забора мокроты;
• результаты диагностики (лабораторный порядковый номер, внешний вид мокроты, микроскопический анализ, ФИО лаборанта с подписью и датой).

Несмотря на то, что результат исследования может быть положительным, установлением окончательного диагноза занимаются фтизиатры в туберкулезном диспансере. Как правило, требуется проведение еще нескольких методов исследования, одним из которых является рентгенологический.

В зависимости от результатов микробиологического исследования, существует 4 варианта тактических действий:

1. При нахождении КУБ (кислотоустойчивых бактерий) в двух мазках бронхиального секрета больного необходимо направить в противотуберкулезный диспансер.
2. Если КУБ найдены в одном мазке из двух, необходимо провести рентгенологическое исследование. После этого больно отправляют в противотуберкулезный диспансер для уточнения диагноза.
3. Если КУБ не выявлены ни в одном из мазков, но тем не менее есть клинические проявления туберкулезной инфекции, а рентгенологически определяются очаговые или инфильтративные изменения в легких – проводят тест-терапию антибиотиками широкого спектра действия в течение двух недель. При этом нельзя назначать специфические к туберкулезному возбудителю препараты. Если терапия успешна – диагноз туберкулеза снимается. Но если терапия не дала результата, то в таком случае больного отправляют на дообследование в туберкулезный диспансер.

Мазок мокроты при туберкулезе

Если КУБ не найдены ни в одном из образцов бронхиального секрета, но в легких на рентгенограмме найдены очаги диссеминации, круглая или кольцевидная тень – то в таком случае пациента также отправляют на дообследование в диспансер.

Результаты считаются положительными и имеют определенную степень, если:

1. В каждом поле зрения определяется больше 10 КУБ – степень 3+. При этом проверяют не меньше 20 полей зрения.
2. В каждом поле зрения определяется от 1 до 10 кислотоустойчивых бактерий – степень 2+. При этом просматривают от 50 полей зрения.
3. На 100 полей определено от 10 до 99 КУБ – степень 1+. Проверяют при этом не меньше 100 полей.
4. На 300 полей определено 4-9 КУБ – недостаточно позитивный результат степень 1+. В соответствующей графе записывают конкретную цифру, например, 6/300.

Негативным считается результат, если:

1. При исследовании не меньше чем 300 полей зрения определено от 1 до 3 КУБ.
2. При исследовании 300 полей зрения не найдено ни одного КУБ.

Повторный забор проводят через несколько дней для постановки точного диагноза. Самый оптимальный вариант – трехразовая сдача. Иногда могут потребоваться дополнительные пробы. Результаты бактериологического исследования можно получить на следующий день после сдачи мокроты.

При соблюдении всех правил забора материала, техники безопасности и своевременном обращении за медицинской помощью диагностика и лечение туберкулеза не вызовет никаких затруднений.

источник

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ

БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

СОВРЕМЕННАЯ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ТУБЕРКУЛЕЗА

УДК 616.24-002.5-078 (075.8) ББК 55.4 я73 С 56

Авторы: канд. мед. наук, асе. Г.С. Авдеев; ст. науч. сотр. НИИ пульмонологии и фтизиатрии О.М. Залуцкая; канд. мед. наук, доц. П.С. Кривонос; д-р мед. наук, рук. отдела иммуноморфологических исследований Л.К. Суркова; канд. мед. наук, асе. В.В. Пылишев

Рецензент д-р мед. наук, доц. каф. фтизиопульмонологии Белорусской ме­дицинской академии последипломного образования А.Н. Лаптев

Утверждено Научно-методическим советом университета в качестве методических рекомендаций 28.05.2003 г., протоколе» 7

Современная бактериологическая диагностика туберкулеза: Метод, рекомен-С 56 дации / Г.С. Авдеев, О.М. Залуцкая, П.С. Кривонос и др. — Мн.: БГМУ, 2003. — 22 с.

Рассматриваются современные методы бактериологической диагностики туберкулеза. В частно­сти подробно излагаются методики забора материала для исследования, бактериоскопическое исследо­вание, люминисцентная микроскопия, культуральное исследование, биологические методы и основные молекулярно-генетические методы диагностики туберкулеза.

Предназначаются для студентов 4-6 курсов медицинского факультета иностранных учащихся, лечебного, педиатрического, медико-профилактического факультетов, для клинических ординаторов, стажеров и врачей-фтизиатров.

УДК 616.24-002.5-078 (075.8) ББК 55.4 я73

© Белорусский государственный медицинский университет, 2003

9. Молекулярно-генетические методы диагностики инфекционных заболеваний.

Контрольные вопросы по теме занятия:

Возбудитель туберкулеза: история открытия, основные свойства, так­сономическое положение.

Правила сбора мокроты для исследования на туберкулез.

Бактериоскопическое исследование мокроты с окраской мазка по Цилю-Нильсену: методика, интерпретация результатов.

Культуральное исследование на туберкулез: методика, интерпретация результатов.

Основные методы определения лекарственной устойчивости микобак­терии.

Автоматические системы для детекции микобактерии и определения лекарственной устойчивости.

Биологические методы диагностики туберкулеза.

Амплификационные методы, используемые для детекции микобакте­рии. ПЦР.

Генотипирование микобактерии туберкулеза.

УЧЕБНЫЙ МАТЕРИАЛ Возбудитель туберкулеза

Род Mycobacterium — единственный представитель группы 21 «Микобак­терии». Согласно девятому изданию «Определителя бактерий Берджи» этот род объединяет свыше 100 видов микобактерии; в клиническом диагностическом материале обычно определяется 10-12 видов микобактерии, 6 из которых пато­генны для человека. Это М. tuberculosis, M. bovis, M. qfricanum, M. avium, М. хепор и М. fortuitum. Хотя клеточная стенка микобактерии сходна с клеточ­ной стенкой грамположительных бактерий и представляет собой многослойный пептидогликановый комплекс, с ней связаны преимущественно липиды (мико-ловые кислоты, воски, фосфолипиды и ацетилированные трегалозы), а не белки и полисахариды, как у других бактерий. Это придает клеточной стенке мико­бактерии сильные гидрофобные свойства. В дополнение к липидам, которые могут составлять до 60% клеточной стенки, клетки микобактерии содержат уг­леводы и растворимые белки. Клеточная стенка микобактерии создает гидро­фобный барьер, затрудняющий проникновение в клетку водорастворимых со­единений. Вследствие этого микобактерии демонстрируют весьма медленную скорость роста и являются естественно устойчивыми к химическим воздействи­ям, в том числе к кислотам, спиртам и к большинству используемых в настоящее время антибиотиков. Поэтому выбор препаратов для лечения больных туберку­лезом и другими заболеваниями, вызываемыми микобактериями, ограничен.

Клетки микобактерии прямые или слегка изогнутые, имеют размеры 0,2-0,7 х 1,0-10 мкм. Микобактерии не образуют спор, жгутиков, мицелия и

капсул, одцако имеют микрокапсулу, отделенную от клеточной стенки осмие-фобной зоной. Типовой вид рода Mycobacterium — М. tuberculosis (МБТ). Ми­кобактерии характеризуются плеоморфизмом: клетки в молодых культурах имеют палочковидную форму, в старых — чаще кокковидную. Микобактерии иногда образуют L-формы, сохраняющие инфекционность_г а также фильтрую­щиеся формы (их патогенетическая роль изучена недостаточно). Вирулентные штаммы М. tuberculosis обладают так называемым*корд-фактором (трегалоза-6,6′-димиколат), обусловливающим слипание бактериальных клеток в микро­колониях. Микобактерии являются аэробами, но способны расти в факульта­тивно анаэробных условиях; концентрация С0₂ 5-10% способствует более бы­строму росту. Размножаются делением, время генерации составляет 14-18 ча­сов (для сравнения у E.coli — 20 минут). У микобактерии направления репликативной вилки и транскрипции совпадают только у 56% генов (для сравнения, у Bacillus subtilis этот показатель составляет 78%), что является еще одной причиной медленного роста. Для роста in vitro микобактерии нуждаются в белковом субстрате и глицерине, а также в углероде, хлоре, сере, фосфоре, азоте, факторах роста (биотине, никотиновой кислоте, рибофлавине и др.), в ионах (Mg 2+ , K + , Na + , Fe 2+ ). Температурный оптимум составляет 37-3 8°С, опти­мум рН 7,0-7,2.

Диагностический материал для исследования на туберкулез

При исследовании с целью выявления МБТ можно использовать любой патологический материал: мокроту, которую выделяет больной, или получен­ную после раздражающей ингаляции; бронхиальный секрет; бронхоальвеоляр-‘ный смыв (БАС); материал катетер- и аспирационной биопсии, полученный при бронхоскопии; аспираты из трахеи; экссудат; транссудат из плевральной и брюшной полостей; гной из натечников и свищей; мочу; спинномозговую жид­кость; содержимое открытых ран; менструальную кровь; соскобы эндометрия; сперму; секрет предстательной железы; пунктаты яичек; биопсийный, аутоп-сийный материал; органы экспериментальных животных; смывы с предметов больничной среды и др. Использование бронхоскопии для взятия микробиоло­гических образцов оправдано только при многократных неудачных попытках получения материала более простыми способами у больных с неясным диагно­зом. В ряде случаев, когда больному трудно откашлять мокроту, прибегают к специальным методам, например, стимуляции выделения мокроты. Мокрота, собранная после стимуляции, по внешнему виду напоминает слюну, поэтому такой материал перед направлением в лабораторию снабжают специальной маркировкой («индуцированная мокрота»).

Все клинические образцы, предназначенные для бактериологического ис­следования, должны быть собраны до или в течение первых нескольких дней химиотерапии, поскольку в некоторых случаях нескольких дней специфиче­ской терапии достаточно для того, чтобы прекратить бактериовыделение, и то­гда бактериологическое исследование бесполезно.

Эффективность микробиологической диагностики туберкулеза в значи­тельной степени зависит от правильности сбора диагностического материала. От соблюдения правил сбора, хранения и транспортировки диагностического материала зависит также эпидемиологическая безопасность окружающих.

Мокроту (основной диагностический материал для исследования на ту­беркулез) собирают в специальные стеклянные баночки емкостью около 50 мл с герметически закрывающимися крышками. Необходимо использовать баночки с широким горлышком (диаметр не менее 35 мм), чтобы пациент мог легко со­брать мокроту без контаминации наружной поверхности баночки. Мокроту можно собирать также в одноразовые плевательницы, которые после использо­вания подлежат уничтожению. Посуда для сбора мокроты должна быть сделана из прозрачного материала, чтобы можно было определить количество и состоя­ние собранного материала, не снимая крышку с баночки.

Мокрота для исследования должна собираться под контролем медицин­ского персонала с обязательным проведением инструктажа о правилах сбора мокроты, которые сводятся к следующему:

Добейтесь взаимопонимания с больным и объясните ему, для чего не­обходимо провести исследование мокроты, как нужно откашливать мокроту из глубоких отделов легких. Объясните больному, что он не должен собирать слюну или носоглоточную слизь.

Проинструктируйте больного, чтобы он прополоскал рот перед сдачей мокроты. При этом из полости рта удаляются остатки пищи и контаминирую-щие бактерии.

Пациент должен сделать два глубоких вдоха и задержать дыхание на несколько секунд после каждого из них, а затем медленно выдохнуть. Затем вдохнуть в третий раз и с силой выдохнуть воздух. Потом вдохнуть еще раз и затем покашлять. Это способствует получению мокроты из глубоких отделов легких.

После появления продуктивного кашля пациент должен поднести к губам контейнер и аккуратно сплюнуть в него мокроту. Нередко мокрота быва­ет густой и слизистой, хотя может быть и жидкой, с частицами некротических тканей из пораженных участков легких. Цвет мокроты может быть грязно-белым или грязновато-светло-зеленым. Мокрота с примесью крови имеет крас­ный или коричневый цвет.

Жидкая прозрачная слюна или выделения из носоглотки не являются мокротой и имеют небольшую ценность при диагностике туберкулеза.

Для исследования необходимо получить достаточное количество мок­роты (3-5 мл), содержащей плотные гнойные частицы, а не слюну.

Во время продуктивного кашля пациента образуется аэрозоль, содержа-щий МБТ. В целях обеспечения мер безопасности при откашливании мокроты пациентом и предупреждения инфицирования медицинского персонала потен­циально заразными аэрозолями сбор мокроты должен осуществляться в специ­ально оборудованном помещении, оснащенном бактерицидными лампами, ло­кальной вытяжной вентиляцией, в присутствии медицинского персонала с обя­зательным проведением инструктажа о правилах сбора мокроты. Если условия

этого не позволяют, то сбор мокроты проводят вне помещения (на открытом воздухе) или в помещении, где нет других людей, под контролем медицинского работника. В любом случае нельзя собирать мокроту в замкнутых помещениях. Образцы мокроты от одного пациента не объединяют в одном сосуде, а направ­ляют в лабораторию с указанием сведений о пациенте для каждой пробы. Дос­тавку мокроты в лабораторию осуществляют сразу после взятия в плотно за­крытом промаркированном контейнере, помещенном в бикс для транспорти­ровки. Если транспортировка откладывается, собранную мокроту следует хра­нить в холодильнике при 4°С не более одних суток или в консерванте не более трех суток.

Методы бактериологической диагностики туберкулеза

Бактериологическая лаборатория играет существенную роль в выявлении, диагностике туберкулеза, выборе рациональных схем химиотерапии и оценке их эффективности. Бактериологическая диагностика включает обработку кли­нического материала, микроскопическое исследование, выделение микроорга­низма с применением культуральных методов, идентификацию микобактерий с использованием бактериологических и биохимических тестов, а также опреде­ление лекарственной чувствительности микобактерий.

Существует несколько групп методов, используемых для выявления МБТ в различном диагностическом материале: рутинные (микроскопия, культураль-ное исследование), биологические (биопроба, определение вирулентности штаммов МБТ), автоматические системы (MGIT, BACTEC, MB/BacT, ESP Cul­ture System и др.), молекулярно-генетические методики (PCR, LCR, NASBA, Q—Beta и др.). Каждый из этих методов обладает определенной чувствительно­стью и специфичностью, что необходимо учитывать при клинической интер­претации полученных результатов.

Таблица 1 Чувствительность различных методов бактериологической диагностики туберкулеза

источник

Исследование мокроты на МБТ имеет важное клиническое и эпиде­миологическое значение. Обнаружение в мокроте микобактерий свидетель­ствует о том, что больной является бацилловыделителем, т.е. может выде­лять микобактерий во внешнюю среду. Такие больные представляют по­вышенную опасность для окружающих здоровых людей.

Мокроту лучше собирать утром, предварительно прополоскав рот, чтобы в ней было меньше слюны. При малом количестве мокроты ее соби­рают в течение суток. При отсутствии мокроты используют раздражающие ингаляции аэрозолями гипертонических растворов (например, поваренная соль с содой) для ее появления.

Исследование мокроты начинают с ее осмотра. При кровохарканье в мокроте обнаруживают прожилки или сгустки крови. Также в мокроте могут обнаруживаться кусочки бронхиолитов — обызвествленных камней бронхов.

При микроскопии мокроты в ней могут выявляться эритроциты, лей­коциты, эпителий, альвеолярные клетки, пылевые клетки, цилиндрический и плоский эпителий, известковые соли, кристаллы холестерина, эластиче­ские волокна.

Наибольшее значение имеет обнаружение в мокроте эластических во­локон. Эластические волокна выделяются из легких в виде пучков различ­ной величины, сохраняющих очертания альвеол, без сохранения альвео­лярного строения или в виде небольших обрывков. Кроме того, в мокроте могут обнаруживаться так называемые коралловидные волокна (волокна Коппена-Джонса) — толстые, шероховатые образования, которые образу­ются в результате отложения на эластических волокнах жирных кислот. Могут также выявляться обызвествленные волокна.

Наличие эластических волокон в мокроте указывает на разрушение легочной ткани. При свежем распаде пучки волокон сохраняют альвеоляр­ное строение, при пролиферативных формах туберкулеза альвеолярное строение не сохраняется. Коралловидные волокна появляются в основном в случаях старого туберкулеза, обызвествленные волокна — при распаде обызвествленных очагов во время обострения процесса.

В мокроте больных туберкулезом можно обнаружить известковые со­ли (в основном карбонаты и сульфаты). Они попадают в мокроту чаще всего из старых, распадающихся обызвествленных очагов.

Кристаллы холестерина, как правило, свидетельствуют о наличии в легких старых каверн.

В ряде случаев в мокроте может обнаруживаться так называемая «тетрада Эрлиха»:

Обызвествленные эластические волокна

Известь в виде кристаллических и аморфных образований

Обнаружение в мокроте тетрады Эрлиха свидетельствует об обо­стрении старого туберкулезного процесса.

Исследование мокроты также проводится бактериоскопическим, бак­териологическим и биологическим методами — см. предыдущий вопрос.

Исследование плевральной жидкости в основном применяется для диагностики туберкулезного плеврита.

Прозрачный светло-желтого цвета, с нитями фибрина экссудат назы­вают серозным. Содержание белка в нем колеблется в пределах 40-60 г/л. В начальном периоде острой фазы серозного плеврита в клеточном составе 50.-60% нейтрофилов, 15-25% лимфоцитов, также обнаруживаются эритро­циты, базофилы, мезотелиальные клетки.

При стабилизации или стихании воспаления в экссудате превалируют лимфоциты (90-95%). Увеличение в экссудате количества нейтрофилов и уменьшение лимфоцитов свидетельствует о нагноении экссудата.

Исследование ликвора имеет важное значение в диагностике туберку­лезного менингита.

В норме При туберкулезном менингите

Прозрачная, бесцветная, может слегка опалесцировать, при стоя­нии через 12-24 ч образуется паутинообразная пленка

Характер истече­ния при пункции

50-60 капель в минуту (при нор­мальном давлении в спинномозговом канале — 120-200 мм вод. ст.)

Вытекает очень частыми каплями или струей (вследствие повыше­ния давления)

Реакции Панди и Нонне-Апельта

Количество кле­ток в 1 мкл (цитоз)

Значительно повышено — 100-150 и больше. Вначале цитоз ней-трофильно-лимфоцитарный, поз­же — лимфоцитарный

Резко снижено. Степень сниже­ния пропорциональна тяжести менингита

источник

Анализ мокроты на туберкулез: отрицательный и положительный.

Туберкулез и пути распространения инфекции.

Туберкулез – инфекционное заболевание, которое вызывается микобактериями туберкулеза, кислотоустойчивыми грамположительными палочками.

В наше время эта болезнь настолько распространена, что приобрела характер эпидемии.

Туберкулез – это болезнь, которая поражает не только органы дыхания, как мы привыкли думать, под прицелом микобактерий также могут оказаться почки, кости, кишечник, мозг.

Заболеваемость среди людей, которые имели непосредственный длительный контакт с бактериовыделителями, в 3-5 раз больше, чем среди людей, у которых таких контактов не наблюдалось.

Также большая заболеваемость обнаруживается среди детей, которые имели постоянные контакты с бактериовыделителями.

Микобактерии туберкулеза способны проникать в организм человека различными путями, а именно — воздушно-капельным и пылевым – так называемым « аэрогенным», алиментарным (с продуктами питания, которые получили от животных, болеющих туберкулезом), контактным и герминативным (внутриутробно).

Как известно, основной путь передачи возбудителей туберкулеза — аэрогенный, что составляет 95-97% всех заражений туберкулезом.

То есть, микобактерии от больного человека могут распространяться с его слюной во время разговора, чиханья, кашля.

Но не стоит бояться таких людей, нет необходимости ездить в общественном транспорте в марлевой маске и избегать любых контактов, ведь вероятность заражения зависит от формы туберкулеза, а также количества возбудителей в единице объема воздуха и восприимчивости вашего организма.

Ведь наш иммунитет для того и существует, чтобы быть на страже и уничтожать всех патогенных микробов, которые атакуют организм.

К тому же попадание возбудителя в организм обуславливает заражение, но не во всех случаях вызывает заболевание.

Как известно, для передачи инфекции необходимо, чтобы туберкулезный больной выделял заразные частички в воздух, это возможно, как правило, при туберкулезе органов дыхания.

Но не все больные одинаковой мерой могут распространять болезнь.

Прежде всего это будет зависеть от количества микобактерий в бронхиальном секрете больного.

Причем существует прямая корреляция между количеством микобактерий туберкулеза в мокроте и контагиозностью, то есть, степенью заражения.

Мокрота больного – это смесь бронхиального секрета, слюны, а также некротизированной легочной ткани.

Для получения адекватных результатов анализа, необходимо правильно собрать мокроту.

Обычно она собирается утром, после полоскания рта, путем откашливания содержимого верхних дыхательных путей в стерильную емкость. Если мокроты мало, ее собирают на протяжении дня.

Начинают анализ мокроты с макроскопического исследования, то есть, оценивают ее количество, характер (слизистый, гнойный, слизисто-гнойный, кровянистый), запах, гомогенность.

У туберкулезных больных мокрота обычно слизистая, без запаха и патологических примесей.

После макроскопического анализа, проводят микроскопический анализ мокроты.

Каким же методом можно определить наличие или отсутствие возбудителей туберкулеза в мокроте больного?

Прежде всего это бактериоскопическое исследование. Готовят мазок мокроты больного, проводят окрашивание по Цилю-Нильсену, высушивают и исследуют под микроскопом.

Этот метод помогает выявить микобактерии при том условии, что в 1 мл мокроты содержится от 5000 до 10000 бактерий.

При незначительном содержании микробов, этот метод не является достаточно эффективным.

Бактериоскопию проводят на протяжении трех дней, после чего применяют метод флотации.

Данный метод основывается на том, что готовят суспензию углеводородов (ксилол, бензол) и мокроты больного.

Таким образом, на поверхности оказывается пена с микобактериями, ее снимают и наносят на предметное стекло около 5-6 раз, затем окрашивают по Цилю-Нильсену и исследуют под микроскопом.

Этот способ увеличивает чувствительность метода бактериоскопии на 10-13%.

Большей эффективностью обладает метод люминисцентной бактериоскопии, суть которого состоит в том, что микобактерии окрашивают специальными красителями — флюорохромами, после чего первые приобретают способность светиться в ультрафиолетовом свете.

Такой метод, как фазово-контрастная микроскопия, позволяет обнаруживать и исследовать палочки туберкулеза и их формы в нативном состоянии.

Для выполнения этого исследования необходимо специальное фазово-контрастное оборудование.

Цитологический метод исследования делает возможным выявление в мокроте нейтрофилов, мононуклеаров, казеозного некроза и гигантских клеток Лангханса, которые свидетельствуют о специфическом типе воспаления в легочной ткани.

В случае недостаточного количества мокроты, или ее отсутствия, больному показаны раздражающие ингаляции 15 %-ного раствора хлорида натрия в 1%-ном растворе соды, либо смыв с бронхов.

В последнем случае больному выполняют анестезию корня языка и задней стенки глотки раствором анестетика, затем шприцем вливают в трахею 10-15 мл 0,9%-ного раствора хлорида натрия.

У больного рефлекторно начинается кашель, и он выкашливает изотонический раствор в чашку Петри.

Затем проводят бактериоскопию и дальнейшее изучение биоматериала.

Следующий метод, который используют для анализа мокроты – бактериологический.

Его суть состоит в посеве исследуемого материала на питательные среды с дальнейшей дифференциацией микобактерий, определением чувствительности выделенных микробов к противотуберкулезным препаратам.

Его недостаток состоит в том, что первые колонии на питательной среде могут появиться лишь спустя 2-3 месяца, что значительно затрудняет диагностический поиск.

Как бактериоскопический, так и бактериологический анализ мокроты проводят трехкратно (3 дня подряд) до начала противотуберкулезной терапии.

Еще одним методом анализа является биологический метод. При этом патологический материал от больного прививается лабораторным животным, например в брюшную полость.

Если в материале присутствовали микобактерии, животные заболевают туберкулезом и гибнут через несколько месяцев.

К более быстрым методам определения возбудителей туберкулеза в исследуемого материале является метод индикаторной пробирки BBL MGIT (Micobacteria Growth Indicator Tube).

Такие пробирки содержат питательный бульон и флюоресцентное вещество, микобактерии поглощают кислород с бульона, соединение реагирует на уровень кислорода в пробирке и наблюдается явление флюоресценции.

Изначальный уровень кислорода в пробирке свечения не вызывает.

Сегодня достаточно эффективными являются методы молекулярной диагностики, такие как ПЦР-диагностика и метод ДНК-зондов.

Основаны на выявлении мельчайших частиц ДНК возбудителей в исследуемом материале. Эти методы имеют наибольшую чувствительность и позволяют выявить микроорганизмы в течение короткого времени (от 2 часов до 2 суток).

Так же в стадии исследований сейчас находятся методы выявления возбудителей туберкулеза с помощью моноклональных антител, что так же является более быстрым способом, чем тот же бактериологический метод.

На сегодняшний день методы, позволяющие определять наличие микобактерий в организме человека, постоянно разрабатываются и совершенствуются, что в скором времени приведет к улучшению диагностики, а таким образом и лечения туберкулеза.

источник

Палочки размножаются в лёгких, образуют там колонии, выделяются при кашле, именно поэтому исследование мокроты – важный диагностический этап. Лабораторная диагностика делается в основном микроскопическим, микробиологическим методом, бактерии культивируют на плотных средах Левенштейна-Йенсена или Финна-II, окрашивание выполняют по Цилю-Нильсену. Есть и другие технологии, но все они не идеальны, имеют свои преимущества и недостатки.

Туберкулёз легких называют ещё чахоткой, что является устаревшим названием. Возбудитель – различные представители вида Mycobacterium tuberculosis complex, которых ещё называют палочками Коха (в честь первооткрывателя). Бактерии туберкулёза поражают в основном лёгкие, где образуют многочисленные колонии. Именно поэтому можно исследовать мокроту на наличие возбудителя. Также они формируют туберкулы – полые узелки из соединительной ткани, внутри которых находится гной и масса бактерий.

Лабораторное исследование мокроты довольно редко проводится для обнаружения людей, заражённых туберкулёзом. Чаще применяется для подтверждения диагноза, анализа состояния пациента, подстройки лечения, дозировки при химиотерапии, контроля результатов терапии. То есть оценка мокроты является постоянным необходимым способом исследования.

К лабораторной диагностике относится множество методов:

• макроскопия;
• микроскопия;
• иммуноферментный анализ;
• флуоресцентная микроскопия;
• полимеразная цепная реакция;
• культивирование.

Показанием к исследованию мокроты лабораторными методами являются признаки туберкулёза:

• гипертермия;
• длительный продуктивный кашель;
• затемнения на флюорографии.

К достоинствам технологии относят следующие факты:

• результат можно получить достаточно быстро при ПЦР и микроскопии;
• установить точный штамм бактерии;
• проконтролировать влияние химиотерапии или антибиотиков.

Минусы анализа мокроты следующие:

• при скрытой форме туберкулёза бактерии не выделяются при кашле, из-за чего результат лабораторной диагностики будет отрицательным;
• мокроту довольно трудно собрать, для этого нужна специальная герметичная ёмкость;
• некоторые методы (культивирование) довольно длительные – более месяца.

Можно брать экссудат следующего рода:

• материал после ингаляции небулайзером;
• промыванием бронхов специальными растворами;
• мокрота из альвеол;
• получение слизи при бронхоскопии;
• взятие биоптата их трахеи, бронхов или плевры;
• мокрота из бронхов;
• мазки с гортани.

Мокроту собирают в плотно закрывающиеся стерильные и герметичные ёмкости. Это нужно для снижения вероятности занесения микробов в окружающий мир.

Ёмкости должны соответствовать следующим требованиям:

• делаться из ударопрочного материала;
• иметь хорошую прозрачность для возможности визуальной оценки качества и количества мокроты;
• расплавляться при температуре 40-45 градусов;
• иметь объём не меньше 40-50 мл;
• отверстие должно быть шире 3 см.

Результативность и достоверность исследования мокроты зависит от правильности её сбора, соблюдения рекомендаций, которые должны минимизировать вероятность загрязнения материала. Кроме того, откашливание производится в герметичной комнате, так как данная процедура опасна для всех окружающих.

При сборе материала нужно соблюдать ряд правил:

• откашливание мокроты во флакон делается до начала химиотерапии;
• также его проводят обязательно с утра, до завтрака и приёма препаратов;
• при исследовании берут 3 пробы (каждый раз откашливая в новую ёмкость) в течение 3 суток подряд;
• материал сразу же отвозят в лабораторию (в течение часа). В идеале она должна находиться в одном здании с туберкулёзным стационаром;
• при невозможности это сделать пробу ставят в холодильник при +4оС, но держать там можно не более 2 суток;
• крайне важно следить за целостностью ёмкостей. Нарушение герметичности приводит не только к порче пробы, но и к опасному заражению окружающей среды;
• объём одной пробы должен составлять 3-5 мл;
• медицинский работник обязательно одевает халат, шапку, медицинскую маску, резиновые перчатки и специальный фартук;
• больному нужно откашливать не слюну или слизь из носа и глотки, а именно мокроту из нижних отделов бронхов. Для создания продуктивного кашля можно сделать 2-3 глубоких вдоха;
• перед откашливанием рот тщательно промывают водой, чтобы удалить естественную микрофлору и кусочки пищи;
• ёмкость держат у самых губ, после откашливания мокроту сразу сплёвывают;
• медицинский работник стоит сзади больного, чтобы мокрота не попала на него. Его задача – контролировать правильность сбора материала;
• после сбора слизи флаконы сразу герметично запечатывают;
• если больному трудно откашливать мокроту, то накануне вечером, а также рано утром перед сбором слизи пациенту даёт отхаркивающие препараты.

Режим сбора материала для лабораторного анализа на туберкулёз легких зависит от стадии развития и лечения заболевания:

1. При первом поступлении в течение 3 суток делают по 3 пробы ежедневно.
2. Во время лечения ежемесячно собирают 3 пробы за раз.
3. На долечивании каждые 2-3 месяца берут 2 пробы мокроты.

Исследование мокроты делается множеством способов. У каждого метода есть свои преимущества и недостатки, выбор технологии диагностики зависит от решения врача и оснащения больницы.

Характер мокроты зависит от стадии туберкулёза лёгких:

1. При инфицировании на латентной стадии мокроты может не быть, или она имеется, но в минимальном количестве и обладает белым цветом или прозрачностью.
2. При развитии клинической стадии мокрота приобретает выраженный гнойный характер, оттенок меняется на серый, жёлтый или зелёный, появляется неприятный запах.
3. На более поздних стадиях, при появлении рецидивов в мокроте обнаруживаются прожилки крови.

Наиболее быстрый, простой и дешёвый способ оценки материала на туберкулёз легких. За счёт этого может применяться для постановки диагноза, однако он не имеет достаточно высокой надёжности, поэтому его сочетают с флюорографией. Используется для оценки состояния больного в процессе лечения.

1. Прямая микроскопия. Материал готовится непосредственно из мокроты.
2. Микроскопия осадка. Материал концентрируется с помощью центрифугирования.

Для 50% достоверности метода нужно минимум 5000 бактерий на мл мокроты.

Для увеличения надёжности способа исследуют минимум 3 пробы материала. Получение отрицательного результата не означает отсутствие туберкулёза, так как мокрота может содержать очень малое количество возбудителей из-за закрытой формы.

Окраска делается по Цилю-Нельсену:

1. В материал вносится карболовый фуксин при повышенной температуре и протравливании фенолом, который проникает во все бактерии препарата.
2. Препарат обесцвечивается 25% серной кислотой и 3% солянокислым спиртом. Из-за восково-липидной мембраны палочки Коха не подвергаются воздействию кислот, поэтому они сохраняют окраску.
3. Остальные микробы подкрашиваются 0,3% метиленовой синью. Бактерии туберкулёза не восприимчивы к анилиновым краскам, из-за этого цвет у них не меняется.

В итоге палочки Коха приобретают красный цвет, а все остальные клетки – синий. Препарат надо рассматривать через световой бинокулярный иммерсионный микроскоп с тысячекратным увеличением. Для постановки диагноза обычно хватает 100 полей зрения. При отсутствии бактерий рекомендуется просмотреть ещё 200 полей.

Метод основан на реакции антигена и антитела. Антитела – специфические иммуноглобулины, которые образуются в ответ на проникновение бактерий и вирусов. Антиген – протеины, вызывающие выработку иммуноглобулинов.

1. Берётся антитело, меченное каким-либо веществом. Оно добавляется в материал, где присутствует антитело. В ходе реакции образуется единый комплекс.
2. Добавляется фермент, который меняет цвет меченных комплексов антиген-антитело. Интенсивность окраски материала указывает на количество иммуноглобулинов.

ВАСТЕС MGIT960 – автоматизированный прибор на 960 проб, который самостоятельно проводит исследование материала. Суть метода состоит в следующем:

1. В ёмкость вносится флюоресцирующий материал, флуоресцентные свойства которого блокируются с помощью кислорода.
2. Бактерии при своей жизнедеятельности поглощают кислород, уменьшают его количество.
3. Из-за снижения концентрации усиливаются флуоресцентные свойства материала. Оно регистрируется в автоматическом режиме.

Первые результата регистрируются на 4-5 день, а для достижения максимума нужно 11 суток.

Люминесценция позволяет поднять результативность исследования на 10-15%, а требуемое время на это снизить в 2-3 раза. Применяют флуоресцентные краски: аурамин и родамин. Их действие связано со способностью вступать в реакцию с воскоподобными веществами бактериальной мембраны возбудителя. При облучении ультрафиолетом окрашенные таким способом палочки Коха начинают светиться оранжевым или красным цветом, при том, что остальной материал имеет чёрный или тёмно-зелёный оттенок.

Важно! Недостатком является сравнительно высокая стоимость метода.

Из-за того, что бактерии в препарате становятся очень яркими и контрастными, то можно уменьшить расширение микроскопа в 4-10 раз, сократив тем самым необходимое время на исследование материала. К тому же флуоресцентная окраска при соотнесении с окрашиванием по Цилю-Нельсену может дать информацию, сколько бактерий потеряло кислотоустойчивые свойства вследствие химиотерапии.

Метод основан на увеличении количества ДНК возбудителя в материале в 100-110 раз за счёт специальных ферментов. Данный способ применим лишь для тех микробов, у которых точно установлен состав нуклеотидной последовательности. В отличие от копирования ДНК в результате деления клеток при ПЦР создаются лишь обрывчатые короткие участки ДНК.

Метод имеет множество преимуществ:

• для положительного результата достаточно 10-100 бактерий в пробе;
• абсолютная специфичность, так как метод применяется для конкретной ДНК;
• результат становится известным через 4-5 часов.

Тем не менее, из-за высокой чувствительности метода возможны ложноположительные результаты, что является существенным минусом. Диагностика проводится с помощью амплификатора – специального прибора, в котором проходит реакция. Он создаёт условия для ПЦР и может использоваться для хранения препарата.

Для культивирования рекомендуется плотная среда. На западе используется состав Левенштейна-Йенсена, который даёт колонии через 15-25 суток. В России применяют среду Финна-II, которая уменьшает срок получения результата на 2-3 дня и увеличивает вероятность появления колонии на 6-8%. Однако при любой среде рекомендуется посев минимум 2-3 материалов. Связано это с тем, что даже при нескольких пробах нет точной гарантии достоверности результата. Установлено, что при 6 посевах вероятность обнаружения туберкулёза увеличивается на 7-8%.

Исследование мокроты при лечении туберкулёза – обязательное условие для контроля состояния пациента. Сбор слизи должен соответствовать всем требованиям, иначе будет портиться материал, появиться опасность заражения. Анализ можно проводить разными методами, каждый из которых имеет свои плюсы и минусы. При исследовании желательно сочетать сразу несколько технологий, чтобы повысить достоверность.

источник