Наборы реагентов «Амплитуб» для быстрой диагностики туберкулёза, в том числе с множественной и широкой лекарственной устойчивостью (МЛУ-ТБ, ШЛУ-ТБ).
В 2004 году по инициативе д.м.н., профессора Михаила Александровича Владимирского, заведующего сектором молекулярной диагностики туберкулёза НИИ Фтизиопульмонологии Первого МГМУ им. И.М.Сеченова, мы начали разработки в области ПЦР-диагностики туберкулёза.
«Амплитуб» — технология быстрой молекулярно-генетической диагностики туберкулёза для выявления микобактерий туберкулёзного комплекса, определения инфекционной опасности больного, определения антибиотикоустойчивости к препаратам I и II ряда, идентификации и генотипирования микобактерий.
Технология «Амплитуб» состоит из 3-х основных этапов: пробоподготовки, выделения ДНК и полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени. Оригинальные технологические разработки нашей компании применяются на каждом из этих этапов и в совокупности обеспечивают высочайшую чувствительность, специфичность и информативность анализа, быстроту получения результатов и их высокую достоверность.
Пробоподготовка: в процессе инкубации с «Амплитуб-Преп» происходит инактивация микобактерий, разжижение и гомогенизация респираторных образцов.
Выделение ДНК: использование оригинальных реагентов и магнитных частиц обеспечивает получение максимального количества чистой ДНК и позволяет автоматизировать процесс выделения ДНК.
ПЦР в реальном времени: одновременная детекция нескольких различных участков генома комплекса микобактерий туберкулёза (МБТ) увеличивает информативность и достоверность анализа.
Преимущества технологии «АМПЛИТУБ»
Скорость
Технология «Амплитуб» позволяет сократить время, необходимое для обнаружения M.tuberculosis complex и определения лекарственной устойчивости с 1-3 месяцев до 1 дня в сравнении с традиционными культуральными методами.
Высокая достоверность результатов
Высокая достоверность результатов обеспечивается как на этапе обнаружения МБТ, так и на этапе определения антибиотикоустойчивости. Применение технологии «Амплитуб» позволяет обнаружить МБТ с высокой чувствительностью (не более 100 КОЕ/мл мокроты) и 100% специфичностью. Точное определение мутаций в наиболее значимых кодонах основных генов, ассоциирующихся с лекарственной устойчивостью к рифампицину и изониазиду, позволяет определить 90% антибиотикоустойчивых образцов со специфичностью, близкой к 100%
Безопасность
Клинические образцы инактивируются с помощью «Амплитуб-Преп» уже на этапе взятия и транспортировки биологического материала.
Возможность работы с клиническими образцами
Важным преимуществом технологии «Амплитуб» является возможность исследования не только культур микобактерий, но и непосредственно клинического материала (мокроты, промывных вод бронхов, спинномозговой жидкости, экссудата, пунктата, биоптата, мочи, отделяемого половых путей).
Автоматизация
Роботизированная станция TECAN и набор реагентов «М-Сорб-Туб-Автомат» позволяют полностью автоматизировать наиболее трудоёмкий этап выделения ДНК. Технология «Амплитуб» обеспечивает автоматический расчет результатов ПЦР-анализа с указанием количества выявленного возбудителя в образце и конкретных мутаций, определяющих устойчивость к антибиотикам.
I этап – Пробоподготовка, инактивация
«Амплитуб-Преп» (инактивирующий реагент) специально адаптирован для обработки мокроты. Обладает исключительными муколизирующими свойствами, благодаря которым может использоваться вместо раствора NALC-NaOH для обработки мокроты перед молекулярно-генетическими исследованиями.
Клинические и технические испытания «Амплитуб-Преп» (инактивирующего реагента) проводились в ЦНИИ туберкулёза (Москва). 118 образцов мокроты от тяжёлых бациллярных больных с острым течением туберкулёза делили на две части, обрабатывали одну часть «Амплитуб-Преп», другую — NALC-NaOH.
Все образцы тестировали на BACTEC MGIT 960 и методом ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ). Рост микобактерий наблюдался только в контрольной группе, обработанной NALC-NaOH. В образцах, обработанных «Амплитуб-Преп», рост микобактерий не обнаружен. Результаты ПЦР-анализа образцов из обеих групп были положительными.
Компанией «Синтол» разработан ряд наборов реагентов для выделения ДНК микобактерий.
«М-Сорб-Туб» («Амплитуб-РВ» комплект №1)
набор реагентов для выделения ДНК (на магнитных частицах)
- Адаптирован для выделения ДНК микобактерий из мокроты, промывных вод бронхов, спинномозговой жидкости, экссудата, пунктата, биоптата, мочи, отделяемого половых путей, культур клеток.
- Набор «М-Сорб-Туб» обеспечивает лизис клеток, сорбцию ДНК на магнитных частицах, осаждение ДНК центрифугированием, промывку и элюцию ДНК.
- Предлагаемая компанией «Синтол» методика выделения ДНК сочетает в себе достоинства сорбционного метода и метода осаждения спиртом.
- Использование в качестве сорбента покрытых оксидом кремния магнитных частиц более удобно в сравнении с использованием других сорбентов, позволяет максимально стандартизировать и автоматизировать методику выделения ДНК.
- В каждый исследуемый образец добавляется внутренний положительный контроль (ВПК), по реакции амплификации ВПК судят о наличии/отсутствии ингибиторов ПЦР и эффективности выделения ДНК.
«М-Сорб-Туб-Автомат» («Амплитуб-РВ» комплект №1а; №1в)
набор реагентов для выделения ДНК микобактерий из клинических образцов и культур клеток на автоматизированных станциях TECAN
Набор представляет собой модификацию набора реагентов «М-Сорб-Туб», разработанную специально для использования на автоматизированных станциях фирмы TECAN, что обеспечивает ряд следующих преимуществ.
- Снижение риска контаминации во время выделения ДНК практически до нуля.
- Значительное уменьшение трудоёмкости процесса выделения ДНК.
- Стандартизированное выделение ДНК из клинических образцов.
- Экономическая выгода: низкий расход пластика и реактивов.
набор реагентов для ускоренной пробоподготовки и выделения ДНК микобактерий из образцов мокроты
- Совмещение процесса пробоподготовки и выделения ДНК из образцов мокроты позволяет провести эти два этапа работы за 1 час.
- Минимальное количество манипуляций при пробоподготовке и выделении ДНК. Набор состоит из 3 рабочих растворов: «Амплитуб-Преп», лизирующего и элюирующего растворов.
- Использование «Амплитуб-Преп» в составе набора «Экстра-Туб» позволяет увеличить выход ДНК в 5‑10 раз.
III этап – ПЦР в реальном времени
Обнаружение и количественное определение комплекса МБТ
Набор реагентов АМПЛИТУБ-РВ — это:
- высокая достоверность анализа благодаря одновременному обнаружению двух специфичных генов M.tuberculosis complex: IS6110 и regX3;
- оценка пригодности образца ДНК для определения антибиотикоустойчивости;
- высокая чувствительность (не более 100 КОЕ/мл мокроты или 1–10 копий фрагментов ДНК в реакции) и 100%‑ая специфичность, подтверждённые на панели QCMD (Quality Control for Molecular Diagnostics) Mtb EQA (UK).
Определение антибиотикоустойчивости МБТ к препаратам I и II ряда
Наборы реагентов АМПЛИТУБ-МЛУ-РВ, АМПЛИТУБ-FQ-РВ — это:
- диагностика форм туберкулеза с лекарственной устойчивостью, в том числе множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ) и широкой лекарственной устойчивостью (ШЛУ);
- быстрая детекция мутаций M.tuberculosis, ассоциирующихся с устойчивостью к антибиотикам первого и второго ряда (рифампицину, изониазиду, этамбутолу, фторхинолонам);
- достоверность результатов, ежегодно подтверждаемая при проведении Федеральной службой внешней оценки качества (ФСВОК) Росздравнадзора испытаний шифрованных тест-культур и образцов.
Наборы АМПЛИТУБ-МЛУ-РВ и АМПЛИТУБ-FQ-РВ основаны на использовании оригинальной мультиконкурентной аллель-специфичной методики ПЦР в реальном времени, позволяющей выявлять мутации в генах микобактерий туберкулеза, ответственных за устойчивость к конкретным антибиотикам.
Ниже представлен перечень производимых нами наборов серии «Амплитуб»
- Амплитуб-Преп — реагент для предобработки образцов, предположительно содержащих ДНК микобактерий (кат.№R-001) Регистрационное удостоверение № РЗН 2017/6634
- АМПЛИТУБ-РВ — набор реагентов для для выделения, обнаружения и количественного определения ДНК микобактерий туберкулезного комплекса (кат. № ОМ-200а и ОМ-200ат (для автоматизированной станции TECAN)) Регистрационное удостоверение № ФСР 2010/07635.
- Амплитуб МБТК + НТМБ — набор реагентов для обнаружения ДНК микобактерий туберкулёзного комплекса (МБТК) и нетуберкулёзных микобактерий (НТМБ)
- АМПЛИТУБ-МЛУ-РВ — набор реагентов для определения лекарственной устойчивости микобактерий туберкулёзного комплекса к рифампицину и изониазиду методом ПЦР в реальном времени (кат. № ОМ-400) Регистрационное удостоверение № ФСР 2010/07636.
- АМПЛИТУБ-FQ-РВ — набор реагентов для выявления генетических маркеров ДНК микобактерий туберкулёзного комплекса, ассоциированных с устойчивостью к фторхинолонам, методом ПЦР в реальном времени (кат. № ОМ-800) Регистрационное удостоверение № РЗН 2017/5772
- АМПЛИТУБ-ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ — набор реагентов для дифференциации видов микобактерий, входящих в M.tuberculosis complex (M.tuberculosis, M.bovis, M.bovis BCG и др. виды) (кат. № ОМ-114)
- АМПЛИТУБ-Beijing — набор реагентов для определения генотипа Beijing микобактерий туберкулёза (кат.№ ОМ-115)
- «Экспресс-Туб» — набор реагентов для быстрого выделения ДНК микобактерий из культур клеток (кат. № ОМ-518)
В 2006 году в НИИ Фтизиопульмонологии Первого МГМУ им. И.М.Сеченова совместно с ЗАО «Синтол» был проведен скрининг более 2000 клинических образцов культур МБТ из 25 регионов Российской Федерации. Процент МЛУ-MБТ штаммов (к рифампицину и изониазиду), полученных от впервые выявленных пациентов, составил 21,9%, а процент MЛУ-MБТ штаммов, полученных от ранее леченных больных, был 58,5%. Совпадение результатов с данными микробиологическогоанализасоставило 94%. В рамках мониторинга был проведен молекулярно-генетический анализ диапазона и частоты встречаемости различных кодонов и мутаций в генах МБТ, ответственных за устойчивость к рифампицину и изониазиду.
В 2007 году проведены клинические испытания наборов по определению устойчивости к рифампицину и изониазиду.
В 2008–2011 годах проведена апробация наборов по определению устойчивости к препаратам резервного ряда (фторхинолонам, капреомицину, амикацину). В 2010 году разработан и испытан «Инактивирующий реагент А».
В настоящее время он продаётся под торговой маркой «Амплитуб-Преп».
В 2014–2017гг. в сотрудничестве с ФГБНУ «ЦНИИТ» разработан набор «Амплитуб-МБТК+НТМБ», позволяющий в 1 пробирке обнаружить ДНК микобактерий туберкулёзного комплекса и ДНК нетуберкулёзных микобактерий (без определения конкретного вида НТМБ).
В настоящее время ведётся разработка набора, позволяющего определять наиболее актуальные для российской популяции виды НТМБ.
Принцип мультиконкурентной аллель-специфичной методики ПЦР в реальном времени
- В формате одной пробирки используются 5’-флуоресцентно-меченые аллель-специфичные праймеры с общим комплементарным им 3’-меченым олигонуклеотидом-гасителем и контрольный флуоресцентный зонд, комплементарный участку ДНК без мутаций.
- При отсутствии мутаций в ДНК нарастание флуоресценции в ходе ПЦР-РВ наблюдается только по флуорофору зонда.
- При наличии мутаций в ДНК нарастание флуоресценции в ходе ПЦР-РВ наблюдается как по флуорофору зонда, так и по флуорофору 5’-флуоресцентно-меченого аллель-специфичного праймера. Данный метод позволяет определить не только точку мутации, но и процент устойчивого мутантного штамма МБТ на фоне дикого.
Интерпретация результатов выявления мутаций на примере
531 кодона rpoB гена M.tuberculosis 
Гены, кодоны, замены, используемые в наборах реагентов
АМПЛИТУБ-МЛУ-РВ при определении антибиотикоустойчивости
Использование автоматизированных станций Freedom EVO (TECAN, Швейцария) для молекулярно-генетической диагностики туберкулёза
В 2011 году по инициативе сотрудников лаборатории молекулярно-генетических методов исследования ЦНИИТ РАМН группа разработчиков из ЦНИИТ под руководством профессора Черноусовой Ларисы Николаевны и «Синтола» впервые в России внедрила в лабораторную практику высокопроизводительную автоматизи-рованную систему выделения ДНК микобактерий на платформе Freedom EVO (TECAN) с использованием наборов реагентов «Амплитуб». Это позволило значительно сократить трудоёмкость ПЦР-диагностики туберкулёза и увеличить поток анализов.
Время анализа МБТ при использовании автоматизированных станций Freedom EVO («TECAN», Швейцария) и наборов реагентов «Амплитуб» («СИНТОЛ», Россия)
Трудозатраты — 1 час
Продолжительность выделения ДНК — не более 2 часов
Подготовка к амплификации и ПЦР-РВ — 1,5 часа
ИТОГО: результаты анализа будут готовы через 3,5 часа
Оператор затратит 1 час своего рабочего времени.
Устройство автоматизированной станции Freedom EVO («TECAN», Швейцария) показано ниже:
Выбирая технологию «Амплитуб» («Синтол») на платформе
Freedom EVO («TECAN»), Вы получаете:
- Обнаружение возбудителя туберкулёза — 48 образцов за 3 часа.
- Определение лекарственной устойчивости к препаратам I и II ряда за 1 день.
- Уменьшение трудозатрат в 6 раз.
- Увеличение производительности лаборатории.
- Безопасность работы благодаря «Амплитуб-Преп».
- Стандартизованное выделение ДНК.
- Снижение риска контаминации лаборатории.
- Низкую себестоимость 1 анализа.
- Признательность фтизиатров за быструю и точную диагностику!
источник
Межклиническая клинико-диагностическая лаборатория одна из крупнейших лабораторий Первого Московского государственного медицинского университета.
Межклиническая клинико-диагностическая лаборатория выполняет следующие виды исследований:
- гематологические исследования,
- копрологические исследования,
- исследование мочи, исследование мокроты,
- бактериоскопические исследования,
- широкий спектр цитологических исследований (цитологические исследования пунктата щитовидной железы, биоматериала молочной железы и т.д.),
- исследование спермы, исследование выпотных жидкостей.
Лаборатория оснащена современным оборудованием:
- Анализатор автоматический гематологический «ADVIA 2120»,
- Анализатор автоматический гематологический «Сисмекс –ХТ2000i»,
- Гематологическими автоанализаторами GEN’S фирмы Coulter (США),
- Прибор для измерения скорости оседания эритроцитов версии S 2000,
- Анализатор автоматический мочи «Aution Max AX 4030»,
- Анализатор автоматический осадка мочи « Айрис»,
- Микроскопы медицинские прямые СХ31 Олимпус
В Межклинической клинико-диагностической лаборатории Первого МГМУ им. И.М. Сеченова работают:
10 врачей клинической лабораторной диагностики высшей квалификационной категории (из них 1- кандидат медицинских наук)
7 фельдшеров-лаборантов высшей квалификационной категории
Заведующая лабораторией: Геладзе Марина Валерьяновна. Телефон: 8-499-246-28-32.
В лаборатории осуществляется внутрилабораторный контроль качества клинических лабораторных исследований.
Качество работы сертифицировано Федеральной системой внешней оценки качества клинических исследований.
Адрес: г. Москва, ул. Б. Пироговская, д. 2, стр. 4, корпус «Б»
Контактные телефоны: 8-499-246-28-32
8-499-245-50-12
Лицензия № ФС 77-01-007170 от 16.09.2015 года.
источник
Централизованная Лабораторно-Диагностическая Служба Лабораторно-Гемотрансфузиологического Комплекса Клинического центра Первого МГМУ им. И.М.Сеченова представлена совокупностью клинико-диагностических лабораторий, обеспечивающих оказание высококвалифицированной специализированной диагностической медицинской помощи амбулаторным и стационарным пациентам.
Выполняет широкий спектр биохимических и иммунохимических исследований для амбулаторных и стационарных пациентов Клинического центра. Все исследования выполняются в течение одного рабочего дня. Срочные исследования выполняются в течение 90 минут от момента поступления образца.
Межклиническая биохимическая лаборатория одной из первых в стране более 40 лет назад начала выполнять исследования на автоанализаторах. Накопленный опыт и оснащение современным оборудованием позволяют ей лидировать по качеству выполняемых анализов.
Лаборатория оснащена следующими автоматическими анализаторами:
1. Advia-1800 (Siemens, США — 2 прибора) — это высокопроизводительный автоматический биохимический анализатор выборочного действия. Имеет встроенную систему контроля качества исследований, возможность проведения срочных анализов и автоматического разведения проб. Исследуемый материал – сыворотка, плазма, моча. Анализатор выполняет спектрофотометрические, турбодиметрические и потенциометрические (K+, Na+, Cl-) тесты и является открытой системой (может использовать реактивы различных фирм производителей), поэтому лаборатория имеет возможность консолидировать большинство биохимических тестов, включая самые редкие, на одном анализаторе. Производительность анализатора — 1200 колориметрических тестов в час, 600 тестов в час на электролитном модуле, 1800 комбинированных тестов в час. Всего анализатор может выполнять 55 методов, включая 3 потенциометрических.
2. Synchron CX5 и CX9 (Beckman Coulter, США). Synchron CX5 – одновременно определяет 29 параметров (биохимические показатели плюс срочные тесты кальций, натрий, калий, хлориды, CO2). Производительность — до 600 тестов в час. Synchron CX9 -одновременно определяет 33 параметра (биохимические показатели плюс срочные тесты кальций, натрий, калий, хлориды, CO2, глюкоза, азот мочевины, креатинин, общий белок). Производительность — до 900 тестов в час. Оба прибора совместимы с любыми компьютерными сетями, их можно подключить к лабораторной информационной системе или управлять несколькими приборами с одного компьютера.
3. Автоматический прибор для капиллярного электрофореза белков Capillarys (Sebia, Италия – 2 прибора) с производительностью до 80 тестов/час.
4. Анализатор гликозилированного гемоглобина D-10 (Bio-Rad, США – 2 прибора) предназначен для определения гликозилированного и других фракций гемоглобина. В основе работы анализатора лежит референсный метод — жидкостная ионообменная хроматография высокого давления (ВЭЖХ).
В лаборатории выполняется более 50 видов биохимических исследований.
В составе межклинической биохимической лаборатории функционирует подразделение, выполняющее исследования гормонов, витаминов, онкомаркеров и других биологически-активных веществ.
С этой целью лаборатория укомплектована следующей аппаратурой:
1. Иммунохемилюминесцентная система Advia Centaur XP (Siemens, США – 2 прибора), представляющая собой полностью автоматизированный анализатор произвольного доступа. Метод детекции – прямая хемилюминесценция. Отсутствие каких-либо передаточных звеньев, таких, как ферменты, обеспечивает высочайшую точность результата, огромная поверхность «твердой фазы» на микрочастицах обеспечивает быстрое и надежное связывание. Программное обеспечение анализатора предлагает широчайшее меню определяемых параметров, к примеру, таких, как половые гормоны (ЛГ, ФСГ, Пролактин, Эстрадиол, Прогестерон, Тестостерон, общий ХГЧ), гормоны щитовидной железы (ТТГ, ТТГ третьего поколения, ТТ3, FT3, ТТ4, FТ4, антитела к тиреопероксидазе, антитела к тиреоглобулину). Производительность анализатора составляет до 240 тестов в час, и он является одним из самых мощных иммунодиагностических анализаторов произвольного доступа в мире.
2. Иммунохемилюминесцентная автоматическая система Immulite 2000 (Siemens, США — 2 прибора). Это система с постоянным свободным доступом и высокой производительностью, выполняющая до 200 тестов в час. Исключительно высокие характеристики тестов обеспечены используемой в Immulite 2000 хемилюминесцентной технологией. Появление тестов третьей генерации стало возможным благодаря сочетанию уникальной ферментативно-усиленной хемилюминесценции с собственной технологией промывки. Ферментативно-усиленная реакция хемилюминесценции, использованная в Immulite 2000, значительно увеличивает нижние границы определяемых концентраций по сравнению с обычной хемилюминесценцией.
На сегодняшний день меню тестов анализатора Immulite 2000 включает в себя 90 параметров, которые позволяют выполнять целый ряд диагностических программ: тиреоидная группа (Т3 общий, Т3 свободный, Т4 общий, Т4 свободный, ТТГ, ТТГ 3-го поколения, АТ-ТГ, АТ-ТПО, ТГ, ТСГ), репродуктивная функция (эстрадиол, прогестерон, общий тестостерон, ЛГ, ФСГ, пролактин, дегидроэпиандростерона-сульфат, глобулин, связывающий половые гормоны, ХГЧ, свободный β-ХГЧ, неконъюгированный эстриол, андростендион, ассоциируемый с беременностью протеин А), опухолевые маркеры (РЭА, АФП, ПКФ, ПСА, ПСА свободный, ПСА 3-го поколения, СА-125, СА-15-3, СА-19-9), метаболиты костной ткани (паратиреоидный гормон (интактный), кальцитонин), диагностика диабета (инсулин, С-пептид), диагностика анемии (витамин В12, фолиевая кислота), и ряд других аналитов (гастрин, кортизол, АКТГ, СТГ, инсулиноподобный фактор роста-1).
3. Многоканальный вертикальный фотометром Multiscan Multisoft фирмы “Labsystems’’ (Финляндия), позволяющий проводить фотометрические измерения в прозрачных 96-луночных планшетах на различных длинах волн (от 340 до 750 нм).
4. Микропланшетный фотометр Anthos 2020 фирмы «Biochrom» (Великобритания), позволяющий проводить различные колориметрические измерения (по конечной точке и кинетические) в прозрачных 96-луночных планшетах в рабочем диапазоне длин волн от 400 до 750 нм.
Оба фотометра эксплуатируются в комплекте с автоматическими промывочными станциями Wellwash 4Mk 2 (Labsystems, Финляндия) и Wellwash AC (Thermo Electron Corporation, Финляндия), а также шейкерами-инкубаторами iEMS Incubator/Shaker (Labsystems, Финляндия), Kodak Amerlite Shaker Incubator (Великобритания) и Thermo Shaker PST-60 HL plus (Вектор Бест, Россия).
Гормональное подразделение выполняет более 40 видов иммунохимических исследований.
Все анализаторы подключены к лабораторной информационной системе «1C:Медицина. Клиническая лаборатория».
В лаборатории постоянно осуществляется внутрилабораторный контроль качества выполняемых исследований с ежегодным участием в Федеральной системе внешнего контроля качества и в международной системе контроля качества EQAS (США).
Сотрудники лаборатории принимают непосредственное участие в выполнении лабораторных фрагментов научных исследований, проводимых в УКБ Клинического центра.
В лаборатории работает высококвалифицированный персонал — шесть врачей клинической лабораторной диагностики, два биолога, два медицинских технолога, пять фельдшеров-лаборантов и четыре лаборанта, большинство сотрудников имеет высшую квалификационную категорию.
Заведующая лабораторией — врач клинической лабораторной диагностики высшей категории Тугаринова Галина Викторовна. Телефон: 8-499-245-49-82.
Лицензия № ФС-77-01-007170 от 16.09.2015 г.
источник
КВАНТИФЕРОНОВЫЙ ТЕСТ (QuantiFERON®-ТВ Gold) – современный лабораторный тест для выявления туберкулезной инфекции, альтернатива классическому кожному тесту с туберкулином. В настоящий момент в различных странах разработано и выпущено большое число национальных рекомендаций по применению данного теста.
Квантифероновый тест основан на определении INF-γ (гамма-интерферона), высвобождаемого сенсибилизированными Т-клетками, стимулированными in vitro специфическими протеинами (ESAT-6, CFP-10, TB7.7 (p4)) микобактерий туберкулеза, входящих в комплекс Mycobacterium tuberculosis complex (M. tuberculosis, M. bovis, M. canettii, M. caprae, M. pinnipedii, M. mungi, M. microti, M. africanum и др.). Эти протеины отсутствуют в вакцинных штаммах M. bovis BCG и в большинстве нетуберкулезных микобактерий, за исключением M. kansasii, M. szulagai, M. marinum.
В исследуемой крови пациента (из пробирки с ТВ-антигеном) определяется содержание INFγ, результат анализируется в совокупности с данными, полученными из 2-х других пробирок (выполняющих роль контрольных).
Примерно 1/3 часть населения мира инфицирована МБТ, и только у 5-10% инфицированных лиц развивается заболевание. При наличии неблагоприятных факторов латентная туберкулезаня инфекция (ЛТИ – состояние, когда микобактерии туберкулеза (МБТ) присутствуют в организме человека, но при этом отсутствуют клинические и рентгенологические признаки туберкулеза) может перейти в активную форму с развитием внелегочного туберкулеза (например, туберкулез почек).
К группе высокого риска инфицирования МБТ относятся лица, имевшие контакт с больным туберкулезом, или имеющие высокую вероятность контакта (работники противотуберкулезных диспансеров, приютов, исправительных учреждений и др.), а также лица с сопутствующими заболеваниями (ВИЧ-инфекцией, сахарным диабетом и др.).
Используемые для диагностики ЛТИ кожные тесты – проба Манту и Диаскинтест®, имеют ряд противопоказаний и ограничений к применению.
Противопоказания к проведению пробы Манту и Диаскинтеста:
- Индивидуальная непереносимость туберкулина;
- Острые и хронические инфекционные заболевания и соматические заболевания в период обострения;
- Кожные заболевания и аллергические состояния в период обострения;
- Период карантина в детских коллективах.
У пациентов с индивидуальной гиперчувствительностью к туберкулину может наблюдаться ложноположительная реакция.
Сравнение тестов для диагностики туберкулезной инфекции
| Параметр | Проба Манту | Диаскинтест® | Квантифероновый тест |
|---|---|---|---|
| Метод исследования | Кожный тест | Кожный тест | Исследование крови |
| Побочные реакции | Возможны | Возможны | Нет |
| Противопоказания | Есть | Есть | Нет |
| Специфичность | Низкая | Высокая | Высокая |
| Ложноположительные результаты после вакцинации БЦЖ | Да | Нет | Нет |
| Зависимость от сроков проведения профилактических прививок | Да (не ранее чем через месяц) | Да (не ранее чем через месяц) | Нет |
| Интерпретация результатов | Субъективна | Субъективна | Объективна |
Преимущества КВАНТИФЕРОНОВОГО ТЕСТА:
- отсутствие противопоказаний и ограничений по времени проведения;
- отсутствие ложноположительных результатов в случае вакцинации БЦЖ;
- безопасность процедуры и отсутствие побочных реакций;
- интерпретация результатов этого теста менее субъективна, чем интерпретация результатов кожных туберкулиновых тестов;
- высокая специфичность (99,1%) и высокая чувствительность (89,0%).
Показания к назначению КВАНТИФЕРОНОВОГО ТЕСТА:
- Выявление ЛТИ в группах высокого риска: работники специализированных противотуберкулезных и других учреждений, где есть высокий риск контакта с возбудителем или больным туберкулезом, пациенты с сопутствующими заболеваниями и др.;
- Наличие известных контактов с больным туберкулезом (бактериовыделителем);
- Наличие положительной реакции пробы Манту для исключения поствакцинальной реакции;
- Наличие противопоказаний к проведению кожных туберкулиновых проб (пробы Манту и Диаскинтеста®);
- Дифференциальная диагностика инфекций, вызванных МБТ;
- Обследование иммигрантов.
Пример результата исследования и интерпретация:
| Параметр | Результат | Критерии оценки результатов |
|---|---|---|
| Содержание гамма-интерферона в контрольной пробирке (NIL) | 0,05 | До 8,00 |
| Содержание гамма-интерферона в пробирке с ТВ-антигеном (ТВ Ag) | 0,09 | Менее 0,35 (или свыше 0,35, но до 25% контрольного значения NIL) |
| Содержание гамма-интерферона в пробирке с митогеном (Mitogen) | 9,56 | От 0,50 |
| Квантифероновый тест (диагностика туберкулеза) | Отрицательный | Отрицательный |
Интерпретация результата исследования
Квантифероновый тест – современный лабораторный метод диагностики туберкулеза. Методика рекомендована национальными ведомствами здравоохранения в качестве альтернативы кожным пробам в странах с низкой заболеваемостью туберкулезом (европейские страны, США, Австралия).
Квантифероновый тест на туберкулез выявляет ту же реакцию иммунных клеток, что и Диаскинтест . Но с двумя отличиями:
Любой диагностический метод имеет два основных критерия:
Квантифероновый тест на туберкулез обладает рядом преимуществ:
Сделать квантифероновый тест на туберкулез в Москве сегодня не проблема. Существуют лаборатории в двух солидных институтах, которые проводят соответствующий анализ:
ООО «Инвитро» имеет офисы в каждом областном центре. Квантифероновый текст в Инвитро не проводится. В их арсенале есть другая известная методика – полимеразная цепная реакция на микобактерию туберкулеза. Однако считается, что в отношении туберкулеза этот анализ не информативен.