Лабораторная диагностика туберкулеза бактериологический метод

А. И. Каграманов, Н. А. Шмелев, Е. Д. Тимашева, О. П Архипова

Для обнаружения возбудителя туберкулеза в патологическом материале в основном пользуются бактериоскопическим и бактериологическим методами. Так как первый наиболее прост и доступен, его преимущественно и используют, несмотря на недостаточную чувствительность.

Бактериологический способ менее доступен и требует гораздо больше времени (от 7 дней до нескольких месяцев), тем не менее он применяется при диагностических исследованиях, поскольку имеет подчас решающее значение в постановке правильного диагноза, например, при дифференциации непатогенных кислотоупорных сапрофитов от туберкулезных микобактерий.

К бактериологическому исследованию обычно прибегают в случаях, когда бактериоскопический метод, включая и накопление микробов с помощью флотации, дает отрицательные результаты.Бактериологический способ исследования патологического материала распадается на следующие этапы:

1. выделение чистой культуры микобактерий туберкулеза;
2. диференциация ее от кислотоупорных сапрофитов;
3. биологический метод исследования (определение вирулентности).

Выделение чистой культуры микобактерий туберкулеза осуществляют посевом исследуемого материала на питательные среды. Следует при этом иметь в виду, что мокрота, кал и т. п., наряду с туберкулезными микробактериями, содержат множество других микробов, способных быстро размножаться и подавлять рост возбудителя туберкулеза. Поэтому туберкулезный материал до бактериологического исследования следует освободить от сопутствующей микрофлоры. Для этого пользуются двумя приемами.

С одной стороны, нестерильный патологический материал предварительно (до посева) обрабатывают 3-15% раствором серной кислоты с целью уничтожения посторонних микробов, а с другой — делают посевы на яичные среды (Петраньяни, Любенау-Гона, Левенштейна), содержащие краски, задерживающие рост посторонних микроорганизмов, но не препятствующие размножению туберкулезных микобактерий.

Выделенная на яичной среде культура в дальнейшем может сохраняться на других средах. Посевы держат в термостате при 37-38° и наблюдают за появлением роста в течение 2-3 месяцев, отмечая время появления первых признаков роста. Из выросших колоний делают окрашенные мазки и проверяют кислото- и спиртоустойчивость микробов. Атипичные колонии (пигментные, гладкие, быстро растущие, легко образующие суспензию) отвивают на среды для дальнейшего изучения.

При отсутствии роста в течение 8-10 недель берут соскоб с поверхности среды и микроскопией устанавливают наличие или отсутствие микророста. В положительных случаях приготовляют взвесь из соскоба и инфицируют ее морским свинкам для определения вирулентности.

Выделение чистой культуры из того или иного патологического материала имеет свои особенности главным образом в части предварительной обработки с целью подавления жизнедеятельности сопутствующей микрофлоры. В соответствии с этим приводим описание. обработки каждого патологического материала в отдельности.

Мокрота. Наиболее распространенным методом обработки материала на туберкулез является метод Гона. При этом методе мокроту собирают в стерильные баночки в утренние часы или в течение суток. Выбирают из нее гнойные частицы. Последние исследуют в окрашенных по Цилю и Граму мазках. Затем берут около 3 мл мокроты (с гнойными комочками), добавляют 6 мл 6-10% раствора серной кислоты, энергично в течение 10 минут встряхивают до полной гомогенизации, потом центрифугируют в стерильной центрифужной пробирке, жидкость сливают, а осадок сеют на яичные среды. Действие серной кислоты (с момента добавления до момента посева, включая и время центрифугирования) должно длиться 20 минут.

Метод Мазура. В ряд широких пробирок наливают по 3 мл 2-3% раствора серной кислоты. Затем, поместив в пробирки гнойные комочки мокроты, гомогенизируют их, умеренно сильно ударяя нижними частями пробирок об упругие поверхности (ладонь, предплечье, сложенное на столе полотенце) в течение 3 минут. При этом над эмульсией мокроты образуется толстый слой пены, содержащий смесь жизнеспособных туберкулезных микобактерий и убитых посторонних микробов. Часть такой пены сеют на яичную среду.

Обработка гортанного мазка. У детей и лиц, не выделяющих мокроты, микобактерии туберкулеза часто можно обнаружить в слизи из гортани. Последнюю снимают ватным тампоном, накрученным на нарезки слегка изогнутого металлического зонда длиной 20 см и толщиной 1 мм. До употребления зонд с тампоном заворачивают в бумагу и стерилизуют обычным способом. Прежде чем взять мазок, больному предлагают покашлять и под контролем гортанного зеркала тампоном снимают слизь с гортани. Затем тампон, снятый с зонда, помещают в пробирку с 5 мл 6% раствора серной кислоты, сильно в течение 5 минут встряхивают, после чего тампон удаляют стерильным пинцетом, предварительно отжав из него жидкость в пробирку. Содержимое пробирки центрифугируют и осадок сеют на яичные среды.

Промывные воды желудка. Промывные воды желудка рекомендуют исследовать у детей, которые, как правило, не умеют отплевывать мокроту и обычно проглатывают ее, а также у взрослых, не выделяющих мокроту или выделяющих ее в незначительном количестве. В подобных случаях промывание желудка и бактериологическое исследование осадка из этих вод оказывается наиболее чувствительным методом обнаружения возбудителя туберкулеза.

Промывные воды получают с помощью желудочного зонда у больных, которым утром натощак дают выпить стакан кипяченой воды. Вытекающую через зонд жидкость собирают в стерильную посулу. Эти воды нейтрализуют 20% раствором двууглекислой соды до нейтральной по лакмусу реакции, отстаивают 1-2 часа (или центрифугируют) и исследуют гнойные частицы осадка так же, как мокроту. Обработку и посев промывных вод не следует откладывать, так как через 6 часов после взятия материала жизнеспособность туберкулезных бактерий под влиянием желудочного сока заметно ослабевает.

Кал. Кал растирают в стерильной ступке с дестиллированной водой (5 г. кала + 10 мл воды) и оставляют в покое на 30 минут. За это время крупные частицы оседают на дно. Образовавшуюся на поверхности пленку снимают стерильной ложкой, которую смывают в пробирку 10 мл 4% раствора едкого натра и выдерживают 3 часа в термостате при периодическом встряхивании. После этого взвесь центрифугируют, осадок нейтрализуют по лакмусу несколькими каплями 8-10% раствора соляной кислоты и сеют на яичные среды.

Моча. При исследовании мочи следует помнить, что микобактерий туберкулеза в ней бывает мало. Обычно берут утреннюю мочу, а иногда и суточную. Для концентрации микробов в небольшом объеме пользуются центрифугированием со скоростью 3 000-6 000 об/мин всей порции мочи. Осадок сливают в одну пробирку и исследуют бактериоскопически. При отсутствии посторонних микробов сеют без предварительной обработки серной кислотой.

В противном случае добавляют, к осадку двойной объем 6% раствора серной кислоты, перемешивают, центрифугируют и сеют полученный осадок на яичные среды (обработка кислотой, включая процедуру центрифугирования, продолжается 20 минут).

Гной, экссудат, спинномозговую жидкость центрифугируют и осадок, не содержащий посторонних микробов, сеют на среды. Если материал не стерилен, осадок обрабатывают так же, как мокроту.

Обработка кусочков органов. Кусочки органов или желез измельчают в стерильной ступке сначала ножницами, а потом пестиком до кашицеобразной консистенции, добавляют 5 мл 6-10% раствора серной кислоты. Продолжая действовать пестиком, превращают всю массу в суспензию. Последнюю центрифугируют и сеют на яичные среды. Процесс обработки кислотой, включая процедуру центрифугирования, должен длиться 20 минут.

Обработка крови. К 5 мл стерильно взятой крови добавляют 3 мл 10% раствора лимоннокислого натрия, тщательно перемешивают встряхиванием и оставляют на 2-3 часа для получения осадка (или центрифугируют). Плазму отсасывают стерильной пипеткой, осадок переносят в колбу с 40-50 мл дестиллированной воды, осторожно перемешивают круговыми движениями колбы, затем переливают в центрифужные пробирки, центрифугируют 5-10 минут при 3 000 об/мин. Осадок при центрифугировании промывают дестиллированной водой, смешивают его с 1 мл 5% раствора серной кислоты, встряхивают в течение 3 минут, добавляют 5 мл стерильной дестиллированной воды и снова центрифугируют. После этого осадок измучивают в 1 мл физиологического раствора и стерильной пипеткой сеют на питательную среду.

Молоко. Для бактериологического исследования берут свежее молоко в количестве 30 мл. Его центрифугируют в течение 15-20 минут при 3 000 об/мин. Осадок сеют на питательную среду после предварительной обработки серной кислотой.

Метод Школьниковой. Нестерильный патологический материал обрабатывают 5-8-10-12% раствором серной кислоты около 20 минут (включая процесс центрифугирования), как описано выше. Осадок дважды при центрифугировании промывают дестиллированной водой (избыток кислоты задерживает рост микобактерий туберкулеза на кровяной среде). Промытый осадок засевают петлей в 3 пробирки с гемолитированной кровью.

Гемолизированная кровь готовится следующим образом: 1 часть цитратной крови кролика или барана гемолизируют добавлением 3 частей дестиллированной воды, после чего ее разливают по 5 мл в пробирки. Можно пользоваться донорской кровью, не содержащей консерванта.

Центрифужные осадки материалов, свободных от посторонней микрофлоры (экссудат, асцитическая и спинномозговая жидкость и т. п.), можно засевать в кровяную среду без предварительной обработки кислотой. Посевы (по одной пробирке) исследуют на наличие роста на 7-й, 10-й или 20-й день, причем среда с посевом центрифугируется, осадок промывается дестиллированной водой при центрифугировании для удаления кровяного пигмента, затрудняющего окраску и микроскопировяние препаратов, из промытого осадка делаются окрашенные по Циль-Нильсену мазки. Этот метод более чувствителен по сравнению с обычными посевами на яичные среды и, кроме того, заметно ускоряет получение результатов.

Метод Прайса. Изготовляют мазки из патологического материала на нескольких хорошо обезжиренных и простерилизованных обжиганием предметных стеклах. Готовые мазки сначала погружают на 5 минут в 6% раствор серной кислоты, а затем промывают погружением в стерильный физиологический раствор. Промытые препараты вносят в жидкую питательную среду (1 часть цитратной крови и 3 части дестиллированной воды). Через 7-10 дней на мазках появляется рост в виде микроколоний, которые хорошо видны под микроскопом на мазках, окрашенных по Циль-Нильсену.

В патологических продуктах иногда вместе с бактериями туберкулеза встречаются кислотоустойчивые сапрофиты. Некоторые виды сапрофитов отличаются от туберкулезных микобактерий тем, что легче обесцвечиваются смесью спирта с кислотой. Однако ряд сапрофитов (например, М. smegmae) не только кислотоустойчив, но и спиртоустойчив. Их можно отличить от микобактерий туберкулеза только по культуральным и патогенным свойствам. При инкубации в термостате рост проявляется через несколько дней, а не через 10-20 дней, как у туберкулезных микобактерий; инокуляция кислотоустойчивых сапрофитов морским свинкам не вызывает у них патологических изменений.

Наиболее чувствительным к туберкулезу лабораторным животным является морская свинка, которой пользуются при биологическом методе. С помощью этого метода можно доказать не только жизнеспособность, но и вирулентность микобактерий туберкулеза, даже при наличии единичных микобактерий в патологическом материале.

Диагностический материал, свободный от посторонней микрофлоры (серозный экссудат, спинномозговая и асцитическая жидкость и т. п.), вводят свинкам без предварительной обработки в количестве 2-3 мл. Нестерильный материал (мокрота, гной, щелочная моча и т. п.) предварительно обрабатывают 6-10% раствором серной кислоты, как при подготовке материала для посева (см. изложенное выше об обработке патологических материалов для культурального исследования). После кислотной обработки следует тщательно отмыть остатки кислоты в диагностическом материале с помощью двукратного или троекратного промывания физиологическим раствором при центрифугировании (введение плохо промытого материала вызовет некроз на месте инъекции и даже смерть подопытного животного).

Испытуемый материал вводят морским свинкам подкожно в область паха в количестве 2-3 мл. Зараженные диагностическим материалом морские свинки могут жить до 6 месяцев и дольше. Для ускорения выявления туберкулеза у свинок можно, не дожидаясь наступления смерти, взять с помощью пункции или надреза часть содержимого из регионарных паховых узлов и инфильтрат на месте инъекции и исследовать его в окрашенных мазках. Кроме того, рекомендуется проверка свинок с помощью туберкулиновой пробы. Обнаружение типичных туберкулезных микобактерий в мазках и положительная туберкулиновая проба дают право диагносцировать туберкулез у животных до вскрытия их.

В случаях, когда патологический материал, взятый у больного с активной формой туберкулеза, не вызывает генерализованного туберкулеза у морских свинок в течение 3 месяцев, необходимо пассировать слабо пораженные органы животного через новых животных.

Определение лекарственной устойчивости возбудителя туберкулеза становится необходимым и важным методом лабораторной работы противотуберкулезных учреждений.

Определение устойчивости можно производить:

1. «прямым» методом в полученном от больного патологическом материале (в мокроте, гнойном экссудате), если в нем бактериоскопически обнаруживают туберкулезные бактерии;
2. «непрямым» методом, т.е. с туберкулезными штаммами, предварительно выделенными из патологического материала, если в последнем бактериоскопически туберкулезных бактерий не находят.

Определение производится путем глубинного посева на жидкую питательную среду с различным содержанием лекарственного вещества и на ту же среду без этого вещества (контроль). При прямом методе засевается непосредственно патологический материал, а при непрямом — туберкулезная культура. Результаты посева учитываются через 14 и 21 день путем сравнения роста на среде, содержащей препарат, с ростом в контроле.

Схема техники определения лекарственной устойчивости к стрептомицину (по методике Московского областного туберкулезного института). Готовят различные разведения стрептомицина в жидкой питательной среде. Для этого сначала готовят основное разведение стрептомицина путем добавления 10 мл бидестиллированной воды во флакон, содержащий 100 000 ЕД сухого стрептомицина: получается содержание 10 000 ЕД в 1 мл. Из него последовательно готовятся следующие разведения:

1. к 0,5 мл этого разведения добавляют 4,5 мл питательной среды (без плазмы) — получается разведение 1 000 ЕД препарата в 1 мл;
2. к 0,1 мл разведения добавляют 0,9 мл питательной среды — получается 100 ЕД в 1 мл;
3. к 5 мл второго разведения добавляют 5 мл питательной среды — получается 50 ЕД в 1 мл;
4. к 4 мл третьего разведения добавляют 16 мл питательной среды — получается 20 ЕД в 1 мл;
5. к 10 мл четвертого разведения добавляют 10 мл питательной среды — получается 10 ЕД в 1 мл;
6. к 8 мл пятого разведения добавляют 12 мл питательной среды — получается 4 ЕД в 1 мл;
7. к 6 мл шестого разведения добавляют 6 мл питательной среды — получается 2 ЕД в 1 мл;
8. к 3 мл седьмого разведения добавляют 9 мл питательной среды — получается 0,5 ЕД в 1 мл.

Готовится жидкая питательная среда следующего состава: двуосновной фосфорнокислый натрий (Na2 НРО4) -6,3 г. одноосновной фосфорнокислый калий (КНг Р04) — 1,4 г. лимоннокислый натрий- 1,5 г. сернокислая магнезия — 0,6 г. аспарагин — 1 г. дистиллированная вода — до 1 000 мл.

Аспарагин берется отдельно в небольшом количестве воды из общего количества; все реактивы при подогревании прибавляются последовательно, как указано в рецепте. Предварительно надо получить полное растворение каждого предыдущего реактива. Полученная смесь фильтруется, разливается во флаконы по 100 мл и стерилизуется в автоклаве. После стерилизации среда мутнеет, но потом просветляется, поэтому средой можно пользоваться через 1-2 суток после стерилизации. pH среды при таком составе оказываете, равным 7,0-7,2; в случае уменьшения pH таковой корригируются аммиаком.

При отсутствии аспарагина его можно заменить казеиновым гидролизатом в количестве 80 мл. Непосредственно перед разливкой по пробиркам к питательной среде добавляется нитратная плазма человеческой крови (без антисептиков) в количестве до 20% к общей массе питательной арены.

На постановку каждого определения требуется 14 пробирок из расчета по 2 пробирки на каждую концентрацию и 2 пробирки контроля. Готовая среда разливается по 1 мл во все пробирки. Затем в эти же пробирки (кроме контрольных) доливается по 1 мл из предварительных разведений стрептомицина (8, 7, 6, 5, 4, 3).

Таким образом, в каждой пробирке получается по 2 мл среды, содержащей соответствующую рабочую дозу стрептомицина. Поскольку в каждую пробирку с разведением стрептомицина добавляется равное количество питательной среды, то исходная концентрация стрептомицина уменьшается вдвое. В контрольные пробирки доливается по 1 мл питательной среды без стрептомицина и без плазмы.

При «прямом» методе определения устойчивости во все пробирки засевают по 0,2 мл эмульсии патологического материала после предварительной обработки его по следующей методике: материал гомогенизируется в стерильной банке с бусами, заливается двойным объемом стерильного 10% раствора трехзамещенного фосфорнокислого натрия и выдерживается 24 часа в термостате при 37°. Через сутки все содержимое банки центрифугируется путем накапливания в 1-2 центрифужных пробирках, к осадку добавляется 3 мл питательной среды без плазмы; после тщательного смешивания эта эмульсия засевается по пробиркам.

Если определение производится «непрямым» методом, то засевается эмульсия туберкулезной культуры с плотной среды, приготовленная на вышеуказанной жидкой среде без плазмы. Густота эмульсии устанавливается по бактерийному стандарту, равному 1 млрд. микробных тел в 1 мл, или же готовится по весу — 1 мг в 1 мл и засевается по 0,2 мл.

Засеянные пробирки парафинируются и выдерживаются в термостате 14 и 21 день. Учет результатов проводится следующим образом; спустя 14 дней из термостата вынимаются по одной пробирке каждой концентрации стрептомицина и по одной контрольной пробирке; содержимое пробирок центрифугируется и из осадка каждой пробирки приготовляется мазок: высохшие мазюи фиксируются 2% раствором сулемы в течение 5 минут (можно и обычным прогреванием) и окрашиваются по Циль-Нильсену; результаты определения устанавливаются по микроскопической картине роста (количество типичных микроколоний в виде кос, их величину и зрелость сравнивают с ростом в контроле).

Результаты определения фиксируются через 14 дней в следующих случаях:

1. когда характерный микроскопический рост туберкулезных бактерий обнаруживается при концентрации стрептомицина не выше 1 ЕД в 1 мл; подобные культуры относятся к чувствительным, так как в таких случаях при более продолжительном выдерживании культур в термостате обычно не наблюдается роста на более высоких концентрациях;
2. когда уже через 14 дней характерный рост отмечается при содержании стрептомицина, равном 10 ЕД в 1 мл и выше; подобные культуры являются устойчивыми.

В случае, если к 14-му дню типичный микроскопический рост обнаруживается при концентрациях стрептомицина в 2 и 5 ЕД в 1 мл, то результат определения фиксируется через 21 день, поскольку к этому сроку может появиться рост и при более высоких концентрациях.

Оценка полученных результатов. Устойчивость данного штамма в целом выражается той максимальной концентрацией стрептомицина (количество его ЕД в 1 мл питательной среды), при которой еще наблюдается рост, по количеству и зрелости микроколоний приближающийся к росту в контроле.

Штаммы, у которых подобный рост наблюдается при концентрации стрептомицина ниже 10 ЕД в 1 мл питательной среды, расцениваются как чувствительные, что может быть выражено соответствующими цифровыми показателями: 0,25 ЕД/мл, 1 ЕД/мл, 2 ЕД и 5 ЕД в 1 мл.

Штаммы, дающие рост, приближающийся к росту в контроле при концентрации стрептомицина 10 ЕД в 1 мл среды и выше, относятся к устойчивым и степень их устойчивости соответственно выражается показателями 10 ЕД/мл, 25 ЕД/мл и т. д.

Определение стрептомициноустойчивости туберкулезных бактерий можно производить также методом глубинного посева непосредственно патологического материала на кровяные питательные среды, пользуясь описанными выше ускоренными методами посева по Школьниковой или по Прайсу. В этом случае к питательной среде предварительно добавляется стрептомицин в различных концентрациях (от 0,5 до 100 ЕД в 1 мл).

Определение фтивазид о устойчивости проводится в принципе по той же методике, что и определение стрептомициноустойчивости. Разведения фтивазида производятся серийно, начиная с 1:32 000 по 1:32 000 000. Чувствительность культур к фтивазиду характеризуется тем последним разведением, которое полностью задерживает их пост в среде.

Штаммы туберкулезных бактерий до лечения оказываются чувствительными к фтивазиду в разведении препарата от 1:4 000 000 до 1:8 000 000. По мере повышения устойчивости к фтивазиду рост туберкулезных бактерий наблюдается в соответствии с повышением концентрации препарата (1:2000 000, 1:1 000 000, 1:125000 и т. д.).

источник

Лабораторная диагностика туберкулеза. Бактериоскопическое исследование. Бактериологическое исследование. Биологическая проба.

Лабораторная диагностика туберкулеза используется для уста­новления специфической этиологии заболевания, подозрительного на туберкулез. Производят микробиологическое исследование материала от больных:

— пунктатов лимфатических узлов.

Исследование на возбудителя туберкулеза производят непо­средственно в доставленном материале бактериоскопическими, а кроме того, бактериологическими и биологическими метода­ми.

При необходимости исследовать свежую мокроту делают мазки препарата на предметных стеклах, высушивают на воз­духе, фиксируют на пламени горелки. Затем препарат окраши­вают карболовым фуксином, промывают водой и обесцвечи­вают 15—25%-ным раствором серной кислоты, промывают и докрашивают водным раствором метиленового спирта. После подсыхания препарат подвергают иммерсионной микро­скопии, просматривают 100 полей зрения (практически весь препарат). Туберкулезные микобактерии визуализируются как ярко-красные, тонкие, изящные, в одиночку или группами, большей частью лежащие вне клеток палочки. В настоящее время имеет распространение метод флотации с последующей микроскопией. Промывные воды желудка бактериоскопически, дальнейшее исследование проводят так же, как и при исследо­вании мокроты. Мазок из гортани или зева окрашивают по Цилю-Нильсену. Мочу центрифугируют и готовят мазок из осадка мочи. Спинномозговую жидкость, взятую асептично, отстаивают сутки на холоде, после чего образуется тонкая фибринозная пленка (паутинка), в которой содержатся туберкулезные мико­бактерии. Делают мазок на предметном стекле, высушивают на воздухе, фиксируют, окрашивают по Цилю-Нильсену. Если пле­ночка не образовалась, то исследованию подвергают отцен-трифугированный осадок.

Для обнаружения туберкулезных микобактерии применяется люминесцентная микроскопия, которая имеет ряд преимуществ перед прямой бактериоскопией в окрашенных препаратах. При люминесцентной микроскопии туберкулезные микобактерии светятся обычно золотисто-оранжевым светом на черном фоне (картина «звездного неба»); кислотоупорные сапрофиты — зе­леноватым с апельсиновым оттенком.

При исследовании спинномозговой жидкости методом люми­несцентной микроскопии положительные результаты можно получить в 12,5 раза чаще, чем при просмотре препаратов, ок­рашенных по Цилю-Нильсону.

Методика бактериологиче­ского обнаружения туберкулезных микобактерии основана на их способности противостоять воздействию кислот и щелочей.

Туберкулезная бактерия после такой обработки остается впол­не жизнеспособной, что позволяет еще до посева материала избавиться от находящихся в нем посторонних микробов. Ми-кобактерии туберкулеза характеризуются некоторыми основ­ными свойствами, используемыми для их дифференцирования. Они неподвижны, растут только в животном организме или на питательных средах специального состава (обычно с глицери­ном и яичным желтком); на обычных питательных (МПА) сре­дах не растут. Оптимальная температура, при которой растут туберкулезные бактерии, равна 37 °С, хотя возможен рост в пределах от 30 до 42 °С. Для размножения микробов требуется длительное время: на искусственных питательных средах рост появляется только через 10-30 дней. Колонии микобактерий туберкулеза имеют своеобразный вид, отличающийся шерохо­ватостью (в виде плоских чешуек с возвышенным центром или розеток с углублением в центре), или же они могут быть глад­кими блестящими, похожими на капли. На жидких питатель­ных средах образуется толстая морщинистая пленка.

Обычно для посева наследуемого материала пользуются среда­ми Любенац или Петракины. Посев выдерживают в термостате при температуре 37 °С в течение 3 мес, проверяя наличие роста каждую неделю. Наиболее часто рост наблюдается в сроки от

3 до 6 недель. Штаммы, выделенные от больных, леченных химиопрепаратами, вырастают в гораздо более поздние сроки (через 50—70—80 дней). В настоящее время предложены и ис­пытаны ускоренные методы выращивания культур туберкулез­ных микробов на препаратах — мазках (по Прайсу) и на кро­вяной среде.

Серологические исследования имеют относительное значение.

является по праву наиболее рациональным диагностическим приемом. Материал может быть введен под кожу или в полость живота морским свинкам. При наличии в материале вирулентных туберкулезных микобактерий обычно на 10-12-й день в месте его введения под кожей образуется уплотнение, переходящее в дальнейшем в незаживающую язву. Свинки погибают от генерализованного туберкулеза через 2—

4 мес. Ускоренная биологическая проба: через регионарный лим­фатический узел морской свинки вводят несколько капель на­следуемого материала. На 8—10-й день увеличенный лимфатиче­ский узел вырезают и исследуют бактериоскопически в препара­тах-отпечатках на присутствие туберкулезных микобактерий.

источник

МИКОБАКТЕРИИ Род Mycobacteriurn (сем. Mycobacteriaceae, порядок Actinomycetales) включает более 100 видов, широко распространенных в природе. Большая часть – сапрофиты и условно-патогенные. У человека вызывают туберкулез (М.tuberculosis – в 92% случаев, М.bovis — 5%, М.africanus – в 3%) и лепру (М.lерrае).

М.tuberculosis – туберкулез – хроническое инфекционное заболевание. В зависимости от локализации выделяют туберкулез органов дыхания и внелегочные формы (кожи, костей и суставов, почек и др.). Локализация зависит от путей проникновения и вида возбудителя.

Морфология. Гр+, прямые или слегка изогнутые палочки длиной 2–8 и шириной 0,3 мкм. Высокое содержание липидов придает ряд характерных свойств: устойчивость к кислотам, щелочам и спирту, трудное восприятие анилиновых красителей (для окраски применяют метод Циля–Нильсена). В культурах встречаются зернистые формы, ветвящиеся, зерна Муха (шаровидные кислотоподатливые, легко окрашивающиеся по Грамму). Возможен переход в L-формы. Неподвижны, спор и капсул не образуют.

Для размножения используют сложные пит среды, содержащие яйца, глицерин, картофель. Стимулируют рост микобактерий АСП, соли NН₄, альбумин, глюкоза, твин-80. Чаще всего применяют среду Левенштейна–Йенсена (яичная среда с добавлением картофельной муки, глицерина и соли) и среду, содержащую АСП, глицерин, цитрат Fe, фосфат калия. Размножаются медленно. Период генерации длителен – деление клеток в оптимальных условиях 1 раз в 14–15ч. Первые признаки роста обнаруживаются через 8–10 дней после посева. Затем на плотных средах появляются морщинистые, сухие с неровными краями колонии. В жидких средах – сначала нежная пленка на поверхности, затем утолщается и падает на дно. Среда при этом остается прозрачной.

АГ. Выделяют белковые, полисахаридные и липидные соединения. АТ образуются на туберкулиновые протеиды, на полисахариды, фосфатиды, корд-фактор. Специфичность АТ определяется в РСК, РНГА, преципитации в геле. АГ состав М.tuberculosis, М.bovis, M.leprae и других микобактерий (включая многие сапрофитические виды) сходен. Туберкулиновый протеин (туберкулин) обладает выраженными аллергенными свойствами.

Экология и распространение. В естественных условиях М tuberculosis вызывает туберкулез у человека, человекообразных обезьян. Из лабораторных животных высокочувствительными являются морские свинки, менее – кролики. К М.bovis – возбудитель туберкулеза у крупного рогатого скота, свиней и человека – высокочувствительны кролики и менее – морские свинки. М.africanus вызывает туберкулез в странах Африки. Путь заражения воздушно-капельный, возбудитель проникает через верхние дыхательные пути, иногда через слизистые оболочки ЖКТ или через поврежденную кожу.

В окружающей среде длительное время сохраняются (в высохшей мокроте – в течение нескольких недель, в воде – более года).

К действию дезинфицирующих веществ более устойчивы, чем другие бактерии Þ требуются более высокие концентрации и более длительное время воздействия. При кипячении погибают мгновенно, чувствительны к УФ.

Патогенез. Источник заражения – люди и животные с активно протекающим туберкулезом, с наличием воспалительных и деструктивных изменений, выделяющие микобактерии. В зоне проникновения и размножения возникает воспалительный очаг (первичный эффект – инфекционная гранулема), наблюдаются сенсибилизация и специфический воспалительный процесс в регионарных лимфоузлах – формируется первичный туберкулезный комплекс. При доброкачественном течении болезни первичный очаг может рассасываться, пораженный участок кальцинироваться и рубцеваться. Но этот процесс не завершается полным освобождением от возбудителя. В лимфоузлах и других органах туберкулезные бактерии сохраняются много лет, иногда в течение всей жизни. Такие люди, с одной стороны, обладают иммунитетом, а с другой – остаются инфицированными.

При сниженной сопротивляемости организма первичный туберкулезный процесс генерализуется. Диссеминация приводит к образованию в различных органах туберкулезных очагов. Характерна интоксикация. При генерализации – поражение органов мочеполовой системы, костей и суставов, мозговых оболочек, глаз.

Не синтезируют экзотоксин. Поражение тканей вызывает ряд веществ – липиды, мураминдипептид, фтионовые кислоты, сульфатиды, туберкулин, возникают специфические гранулемы и поражение тканей. Токсическое действие оказывает гликолипид, так называемый корд-фактор, разрушает митохондрии клеток, нарушает функцию дыхания.

Патогенетически важным является действие на организм инфицированного человека туберкулина. Очищенный от примесей туберкулин (PPD – очищенный протеиновый дериват) является белком. Внутрикожное введение туберкулина вызывает у инфицированных людей местную воспалительную реакцию в виде инфильтрата и покраснения (реакция Манту). Неинфицированные люди реакции на туберкулин не дают. Эту пробу применяют для выявления инфицированных, сенсибилизированных людей.

Иммунитет. Заражение не всегда приводит к развитию заболевания, это зависит от состояния микроорганизмов. Восприимчивость усиливается в неблагоприятных условиях (изнурительный труд, недостаточное и неполноценное питание, плохие жилищные условия и т.д.). Способствуют развитию туберкулезного процесса и эндогенные факторы – сахарный диабет; психические болезни и др. Значение АТ в формировании сопротивляемости к туберкулезной инфекции до сих пор неясно. Считается, что АТ являются «свидетелями» иммунитета и не оказывают ингибирующего действия на возбудитель.

Большое значение имеет клеточный иммунитет. По РБТЛ, цитотоксическому действию лимфоцитов на клетки-«мишени», содержащие АГ микобактерии, выраженности РТММ судят о течении заболевания. Т-лимфоциты после контакта с АГ синтезируют медиаторы, усиливающие фагоцитарную активность макрофагов. При подавлении функции Т-лимфоцитов туберкулезный процесс становится быстротечным и тяжелым.

Микобактерии туберкулеза разрушаются внутриклеточно в макрофагах. Фагоцитоз является одним из механизмов, приводящих к освобождению организма от микобактерии туберкулеза, но он часто незавершенный.

Другой важный механизм – фиксация микобактерий в очагах благодаря образованию инфекционных гранулем при участии Т-лимфоцитов, макрофагов и других клеток. В этом проявляется защитная роль ГЗТ.

Иммунитет при туберкулезе раньше называли нестерильным. Значение имеет не только сохранение живых бактерий, поддерживающих повышенную сопротивляемость к суперинфекции, но и явление «иммунологической памяти». При туберкулезе развивается реакция ГЗТ.

Лабораторная диагностика. Материалом для микробиологического исследования в зависимости от локализации процесса служат мокрота, гной, моча, спинномозговая жидкость, испражнения.

Бактериоскопическое исследование. Мокроту выливают в чашку Петри, ставят на черную поверхность стола, выбирают гнойные комочки, наносят их на предметное стекло и растирают между двумя стеклами. Спинномозговую жидкость для образования пленки фибрина и фиксации в ней микобактерии туберкулеза оставляют на сутки в холодном месте. Затем ее осторожно распределяют на предметном стекле. Мочу центрифугируют для получения осадка. Сделанные мазки окрашивают по Цилю–Нельсену. Микобактерии туберкулеза окрашиваются в ярко–красный (рубиновый) цвет. Если в материале находится небольшое количество микобактерии и в обычных мазках их нельзя обнаружить, применяют методы обогащения.

Метод гомогенизации. Суточную порцию мокроты выливают во флакон или банку, добавляют равный объем 1% водного раствора натрия гидроксида, плотно закрывают резиновой пробкой и энергично встряхивают до, полной гомогенизации (10–15 мин). Утратившую вязкость мокроту центрифугируют, жидкость сливают, осадок нейтрализуют добавлением 2–3 капель 10% соляной кислоты. Из осадка готовят мазки и окрашивают по Цилю–Нельсену.

Метод флотации. Подвергнутую щелочной гомогенизации мокроту для более полного растворения оставшихся слизистых комков помещают на 30 мин на водяную баню при температуре 55°С. Затем к ней добавляют 1–2 мл ксилола (бензола, бензина) и встряхивают в течение 10 мин, потом отстаивают 20 мин при комнатной температуре. Капельки ксилола с адсорбированными микобактериями всплывают, образуя сливкообразный слой, его снимают пипеткой и несколько раз наносят по мере высыхания на предметное стекло. Сделанные мазки тоже окрашивают по Цилю–Нельсену.

Бактериологический метод. Выделить культуру микобактерии туберкулеза удается при наличии в 1 мл исследуемого материала даже 20–100 микробных тел. При этом определяют ее устойчивость к лекарственным препаратам, для того чтобы разработать индивидуальную схему лечения больных.

Выделяя из мокроты культуру микобактерии туберкулеза, к ней в целях уничтожения кислотоподатливой микрофлоры добавляют двойной объем 6% серной кислоты, встряхивают в течение 10 мин, центрифугируют. Затем жидкость сливают, осадок нейтрализуют 1–2 каплями 3% натрия гидроксида или несколько раз отмывают изотоническим раствором натрия хлорида. Нейтрализованные осадки мокроты засевают на скошенную в пробирках яичную среду Левенштейна–Йенсена с малахитовым зеленым, который угнетает рост банальной микрофлоры.

Спинномозговая жидкость, экссудат, гной, кровь кислотно–щелочной обработке не подвергаются, их засевают на среду Левенштейна–Йенсена пипеткой с последующим втиранием бактериальной петлей. Ватные пробки, которыми закрывают засеянные пробирки, заливают парафином, чтобы избежать высыхания среды. Посевы помещают в термостат при температуре 37°С и выдерживают в течение 6–8 недель.

Биологический метод. Животных, чаще морских свинок, заражают для выделения чистых культур микобактерии туберкулеза и изучения патогенеза заболевания. Поскольку большинство изониазидустойчивых штаммов утратило к ним вирулентность, биологический эксперимент в настоящее время не находит широкого применения.

Аллергическая реакция Манту. Выполняют ее путем внутрикожного введения 0,1 мл альт–туберкулина в ладонную поверхность предплечья. Ее результат учитывают через 24–48 ч. В положительных случаях на месте введения туберкулина появляется инфильтрат с венчиком гиперемии диаметром 10 мм, который чаще всего свидетельствует об инфицированности туберкулезом, а у 2–3–летних детей может также являться диагностическим тестом активно развивающейся болезни.

Профилактика и лечение. Для специфической профилактики – живая вакцина БЦЖ-BCG (Bacille Calmette–Guerin). Штамм БЦЖ был получен при длительном пересеивании палочек на картофельно-глицериновой среде с добавлением желчи. За 13 лет была получена культура со сниженной вирулентностью. В нашей стране в настоящее время вакцинируют всех новорожденных на 5–7-й день жизни внутрикожно. Ревакцинация – лицам с отрицательной туберкулиновой пробой с интервалом в 5–7 лет до 30-летнего возраста. Создают т.о. инфекционный иммунитет, при котором возникает реакция ГЗТ. Для лечения – АБ, химиотерапевтические препараты I ряда: тубазид, фтивазид, изониазид, дигидрострептомицин, ПАСК и II ряда: этионамид, циклосерин, канамицин, рифампицин, виомицин. Также проводится десенсибилизирующая терапия и стимуляция естественных защитных механизмов организма.

источник

Туберкулез — общее инфекционное заболевание с преимущественной локализацией процесса в легких. При туберкулезе также поражаются лимфатические узлы, серозные оболочки, пищеварительный тракт, урогенитальная система, кожа, кости и суставы (туберкулез внелегочной локализации).

Материал для исследования: мокрота, слизь с задней стенки глотки, промывные воды бронхов и желудка, моча, спинномозговая жидкость, плевральный экссудат, гной из абсцессов и др.

Больной собирает мокроту в чистую баночку или карманную плевательницу. Лучшие результаты дают исследования мокроты, выделенной больным в течение полусуток. На баночку наклеивают бумажку с фамилией и инициалами больного, заполняют специальный сопроводительный бланк (фамилия и инициалы больного, диагноз, группа диспансерного учета, цель исследования) и направляют в лабораторию.

В микробиологической диагностике туберкулеза используют бактериоскопический, бактериологический и биологический методы, а также комплекс иммунологических исследований.

Бактериоскопический метод

Туберкулезные микобактерииокрашиваются в красный цвет, все остальные элементы мокроты и другие бактерии — в синий. Туберкулезные микобактерии имеют вид тонких, слегка изогнутых палочек различной длины с утолщениями на концах или посередине, располагаются группами и поодиночке.

При окраске по Цилю—Нильсену в красный цвет окрашиваются также кислотоустойчивые сапрофиты. Они находятся в почве, воде, молоке, масле, сметане, коже здоровых людей, желудке и т.д. При окраске по Цилю—Нильсену их трудно отличить от МБТ. Кислотоустойчивые сапрофитные бактерии окрашиваются в вишневокрасный цвет, но теряют свою окраску при длительном обесцвечивании солянокислым спиртовым раствором (от 3 ч до суток) или 0,01% раствором гипохлорита калия (КС10). Кислотоустойчивые сапрофиты в отличие от МБТ толстые, грубые, короткие, незернистые, иногда со вздутиями на концах, заостренные или веретенообразные, располагаются чаще кучками. Необходимо помнить, что аэробный микроорганизм Нокардиа (Nocardia asteroides), имеющий нежные, палочковидные, разветвляющиеся волокна диаметром 1 мкм, попадает в легкие при вдыхании воздуха и также затрудняет бактериоскопическую диагностику.

Кислотоустойчивая сапрофитная флора отличается от МБТ культуральными и биохимическими свойствами.

Положительное заключение выдают при обнаружении микобактерии туберкулеза в препарате после просмотра не менее 100 полей зрения: обязательно указывают число микробов в поле зрения. Отрицательный результат микроскопии необязательно должен свидетельствовать об отсутствии микобактерии в исследуемом материале.

Метод люминесцентной микроскопии

Препараты мокроты и промывных вод бронхов можно исследовать люминисцентным методом.

Принцип. Туберкулезные микобактерии, окрашенные ауромином-родамином, люминесцируют под влиянием ультрафиолетовых лучей в виде светящихся золотистых палочек (метод менее трудоемкий и более быстрый, чем предыдущие).

Мазки-препараты приготовляют из осадка, полученного методом накопления, фиксируют проведением через пламя. Мазки окрашивают в течение 15 мин смесью растворов флюорохромных красителей: на 1000 мл дистиллированной воды 1,0 ауромина 00 и 0,1 родамина С. После окраски мазок обесцвечивают 3% раствором соляно-кислого спирта в течение 30 сек, промывают водой. Если фон мазка сильно флюоресцирует, следует применить в качестве гасителя 0,25% водный раствор метиленового синего, промыть мазок водой, подсушить и микроскопировать в люминесцентном микроскопе. Микобактерии светятся золотисто-желтым светом на темно-зеленом фоне. Положительный ответ выдается, если в препарате обнаружено не меньше 4—5 палочек. При наличии 1—2 палочек в препарате анализ следует повторить.

Окраска ауромином-родамином, кроме того, выявляет нежизнеспособные МБТ. При окраске по Цилю—Нильсену они не выявляются, поэтому для оценки прогноза все аурамин-родамин позитивные пробы должны быть окрашены также и по Цилю—Нильсену.

Окрашивание ауромином-родамином имеет следующие преимущества перед окраской по Цилю—Нильсену:

1. кислотоустойчивые бациллы имеют большее сродство к ауромин-родаминовой окраске;

2. весь мазок может быть просмотрен при небольшом увеличении;

3. на темном фоне во флюоресцентном микроскопе МБТ выделяются более четко, и это позволяет быстрее и точнее просмотреть весь мазок.

При люминесценции кислотоустойчивые сапрофиты имеют бледно-желтый или зелено-желтый оттенок свечения, отличающийся от золотисто-оранжевого свечения МБТ.Исследуемую мокроту переносят в чашку Петри, с помощью препаровальных игл или пинцета выбирают гнойные комочки и переносят их на середину предметного стекла, накрывают комочек другим предметным стеклом и растирают материал между стеклами. Спинномозговую жидкость отстаивают в холодильнике и готовят мазки из нежной пленки фибрина. Мочу центрифугируют и делают мазки из осадка. Препараты обесцвечивают не только кислотой, но и спиртом для дифференциации от M.smegmatis, которые могут находиться в моче здоровых лиц.

Гомогенизация. Собрать в банку суточное количество мокроты и добавить равный объем 1% NaOH, закрыть стерильной резиновой пробкой и встряхивать в шюттель-аппарате до полного разжижения мокроты. Обычно для этого требуется 10-15 мин. Гомогенизированную мокроту переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют при 3000 оборотов в минуту в течение 10-15 мин. Жидкость сливают в раствор хлорамина, осадок нейтрализуют 1-2 каплями 10% раствора НСl, из осадка приготовляют мазки, окрашивают по Цилю-Нильсену и микроскопируют.

Флотация. Мокроту переливают в колбу, прибавляют равный объем 1% раствора NaOH, закрывают резиновой пробкой и встряхивают в шюттель-аппарате до полного разжижения. Колбу помещают в водяную баню 55°С и нагревают в течение 30 мин. а затем добавляют 1-2 капли ксилола или бензина, встряхивают 10 мин, доливают дистиллированную воду до горлышка колбы и оставляют при комнатной температуре на 25-30 мин.

Углеводород всплывает на поверхность и увлекает адсорбированные микобактерии. Образуется тонкий слой углеводорода и возбудителей туберкулеза в горлышке колбы в виде сливкообразного кольца.

На хорошо нагретую водяную баню кладут обычное стекло 20х20 см и на нем раскладывают предметные стекла для мазков. Проволочной петлей в форме улитки берут материал флотационного кольца и наносят на предметные стекла, по мере подсыхания материала добавляют новую порцию взвеси. Наслоение материала по принципу толстой капли на одно и то же место делают 3-4 раза, каждую каплю подсушивают, прежде чем наносят следующую.

Готовые, хорошо высушенные препараты промывают эфиром (огнеопасно!), подсушивают, фиксируют, окрашивают и бактериоскопируют.

Исследование промывных вод бронхов или желудка выполняют после нейтрализации материала 1-2 мл 0.5% раствора NaOH.

Флотация повышает на 10% обнаружение микобактерии туберкулеза в патологическом материале.

Бактериоскопическим методом удается обнаружить возбудителя туберкулеза при содержании в 1 мл патологического материала более тысячи микобактерии.

Бактериологический метод

Все материалы для исследования бактериологическим методом, как правило, содержат постоянную микрофлору, что практически делает невозможным выделить микобактерии в чистой культуре без предварительной обработки материалов. Исключением из этого правила является стерильно взятая спинномозговая жидкость.

С целью уничтожения сопутствующей микрофлоры и гомогенизации мокроты, гноя и других материалов применяют 10% раствор серной кислоты или 10% раствор трехзамещенного фосфорнокислого натрия 1:1.

Жидкие материалы центрифугируют 30-40 мин, осадок обрабатывают серной кислотой в течение 20-30 мин, устанавливают рН среды в пределах 7,2-7,6 и высевают на среду Левенштейна — Йенсена и среду Финн-2. Засеянные среды инкубируют в термостате при температуре 37°С 3-4 недели. Пробирки со средами, в которые исследуемый материал вносили петлей и втирали в поверхность среды, размещают вертикально; в тех случаях, когда посевы делают пастеровской пипеткой, пробирки помещают в термостат в полугоризоптальном положении на 2-3 сут, а затем вертикально. Все пробки заливают расплавленным парафином или закрывают целлофановым колпачком и уплотняют резиновым кольцом.

Посевы просматривают раз в неделю. Все пробирки, в которых обнаружен рост посторонней микробной флоры, удаляют. Рост микобактерий туберкулеза обычно обнаруживается на 3-й неделе, но иногда через 2,5-3 мес.

Микобактерии туберкулеза формируют колонии на плотных питательных средах с характерными признаками. Они как правило, сухие, морщинистые, грубые (напоминают бородавки), обычно в R-форме. S-форма колоний с пигментацией желтого или оранжевого цвета при влажном росте свойственна другим микобактериям.

При учете результатов следует фиксировать обильность и сроки появления роста микобактерий. Эти показатели, определяемые в динамике, имеют эпидемиологическое и прогностическое значение.

Культуры микобактерий туберкулеза, выращенные на питательных средах, микроскопируют. В мазках, окрашенных по Цилю — Нильсену, образуются скопления кислотоустойчивых типичных микобактерий.

В молодых культурах, выделенных из организма больных, леченных антибактериальными препаратами, обнаруживают микроорганизмы с измененной формой (короткие палочки, неправильной формы шары).

В некоторых случаях исследуемый материал высевают на 3-4 пробирки жидкой питательной среды с плазмой крови донора или сывороткой крупного рогатого скота.

Результаты посева учитывают через 10 дней. Берут одну пробирку и стерилизуют, из осадка готовят мазки, фиксируют, окрашивают и микроскопируют. Отрицательный результат выдают только после инкубирования посевов в термостате в течение месяца. Посторонние микроорганизмы в таких питательных средах растут, размножаются в первые дни культивирования и вызывают помутнение жидкости.

Микобактерии, выращенные на жидкой питательной среде, пересевают в пробирки с плотной средой. В таких случаях положительные результаты возрастают, но продолжительность исследования увеличивается.

Микобактерии могут размножаться и образовывать микроколонии на стекле. Для этой цели готовят полоски обычного стекла 10 см длиной и 0,9-1 см шириной, моют, обезжиривают, сушат и стерилизуют.

Мокроту больного выливают в чашку Петри, выбирают гнойные комочки, наносят их на полоску стекла и растирают другой такой же полоской так, чтобы получились два мазка, занимающие 2/3 длины стекла. Стекла кладут на стерильную бумагу и подсушивают. Сухие мазки погружают на 15-20 мин в пробирки с 2% раствором серной кислоты, а затем 2-3 раза промывают дистиллированной водой и помещают в жидкую синтетическую или кровяную среду, в которую добавляют 10 ЕД/мл пенициллина. Мазок должен быть полностью покрыт питательной средой. Инкубируют в термостате при 37-38°С. Результаты учитываются на 1-й. 15-й и 30-й день. Каждый раз один такой мазок вынимают из пробирки, высушивают, фиксируют, окрашивают по Цилю — Нильсену или аурамином и микроскопируют. Положительными будут посевы, в которых на стекле выявляются микроскопические колонии в виде «жгутиков», «кос» и «пауков».

Определение лекарственной устойчивости
микобактерий туберкулеза

Лекарственную устойчивость микобактерий туберкулеза определяют с помощью бактериологических методов перед началом лечения, затем спустя 3 мес и далее при продолжающемся выделении бактерий туберкулеза через каждые б мес. Это делают путем выращивания микобактерий на питательных средах с различным содержанием препарата, к которому определяют устойчивость, и на тех же средах без добавления его (контроль).

Определение лекарственной устойчивости может быть: а) прямое — посев соответственно обработанного патологического материала (мокрота, гной и т.д.) на среды, содержащие лекарственные препараты; б) непрямое — пересев предварительно выделенных чистых культур микобактерий туберкулеза на среды, содержащие лекарственные препараты.

Прямой способ более эффективен, но им можно пользоваться, если микобактерии обнаруживаются в материале бактериоскопически и содержатся в значительном количестве (1-5 палочек в поле зрения). Наиболее распространенными методами определения лекарственной устойчивости являются:

1) культивирование на плотных яичных средах;

2) микрокультивирование на стеклах;

3) глубинные посевы на полусинтетические среды;.

Результаты исследования учитывают по истечении определенного срока выращивания, достаточного для получения обильного роста в контрольных пробирках.

В остальных пробирках в зависимости от концентрации препарата и степени устойчивости к нему данного штамма микобактерии туберкулеза рост может быть различной интенсивности или к этому времени отсутствовать.

Лекарственно чувствительные штаммы дают рост в пределах определенных концентраций, различных для каждого препарата.

Штаммы, которые дают рост при соответственно более высоком содержании препаратов, относят к лекарственно устойчивым. Устойчивость определяют по макроросту на плотных и по микроросту на жидких средах. Устойчивость данного штамма в целом выражается той максимальной концентрацией антибактериального препарата (количество микрограммов в 1 мл питательной среды), при которой еще наблюдается рост, приближающийся к росту в контроле.

В части случаев выявляется обильный типичный рост микобактерии в присутствии той или другой концентрации антибактериального препарата, а на среде, содержащей более высокие концентрации этого же препарата, рост может быть скудным в виде единичных макро- или микроколоний, что указывает на размножение только некоторых, более резистентных, особей данного штамма. В таких случаях отмечают как максимальную концентрацию препарата, при которой еще размножается основная устойчивая масса микробных особей, так и предельную — при скудном росте («относительная устойчивость» см. таб.).

Дата добавления: 2016-12-17 ; просмотров: 785 | Нарушение авторских прав

источник