Методика исследования мокроты на туберкулез

Туберкулез является одним из самых массовых заболеваний в мире. Это трудноизлечимая инфекционная болезнь, которая не проходит без последствий для организма и может привести к смертельному исходу. Основные клинические проявления туберкулеза – субфебрильная температура тела на протяжении нескольких недель и кашель, который сопровождается выделением мокроты, зачастую кровавой.

Анализ мокроты на выявление бактерий туберкулеза является одним из важнейших диагностических методов болезни. В случае туберкулезного воспаления, как и многих других воспалительных заболеваний дыхательной системы, «мокрый» кашель является защитным механизмом организма. При помощи этого процесса организм пытается избавиться от инфекции.

Выявлением пациентов, заболевших туберкулезом, занимаются врачи первичных лечебных заведений. Но подтверждается диагноз в специализированном противотуберкулезном учреждении. Сбор мокроты на микобактерии туберкулеза относится к обязательным диагностическим минимумам.

Симптоматика туберкулезной инфекции может не проявляться длительное время. При развитии патологии появляется сухой кашель, на смену которому приходит мокрый, с выделением патологической слизи.

Характер самого секрета может быть разным:

Изначально это вязкая, бело-гнойная мокрота, в последующем ее вязкость увеличивается.

Иногда в нем могут обнаруживаться прожилки крови, как проявление кавернозного процесса в легочной ткани.

В редких и тяжелых случаях слизистые выделения из легких могут быть представлены сплошной кровавой массой.

При активном туберкулезном инфекционно-воспалительном процессе не встречается пенистый секрет, как при бронхите или простуде.

Количество мокроты за сутки в течение всей болезни также изменяется. На пике болезни оно может достигать 300-400 мл за сутки. При этом постепенно отделение бронхиального секрета затрудняется, кашель приобретает спазматический характер. Первоначально мокрота преимущественно отходит утром, далее – в течение всего дня.

Основные методы выявления микобактерии туберкулеза в биологических жидкостях:

Согласно рекомендациям ВООЗ, забор проводят не меньше двух раз. Исследование назначают при обращении к врачу пациента с жалобами на кашель, который длится более 3 недель. После чего проводят бактериоскопическое исследование и выявляют наличие кислоустойчивых бактерий.

Существует определенная последовательность сдачи анализа мокроты при подозрении на туберкулез:

1. Всем пациентам, которые подвергаются клиническому обследованию, производят забор двух образцов секрета для микроскопии.
2. Контейнеры для сбора должны быть одноразовые с широкой горловиной, объемом не меньше 5-7 мл.

Первую порцию бронхиального секрета пациент собирает и сдает при посещении лечебного учреждения в день обращения с соответствующими жалобами.

Вторую порцию пациент собирает дома самостоятельно утром. Медицинский сотрудник должен разъяснить правила забора секрета.

При диагностическом исследовании важно знать правила сбора мокроты на туберкулез:

1. Забор материала производят в утреннее время до приема пищи – за ночь во время сна образуется большое количество мокроты, что облегчает непосредственно проведение забора выделений и повышает информативность исследования.
2. Нужно провести все гигиенические процедуры ротовой полости: почистить зубы и пополоскать слизистую рта – это проводится с целью предотвращения попадания в патологический материал остатков пищи и микрофлоры ротовой полости.
3. Перед самой процедурой не следует принимать противокашлевые лекарственные препараты, так как угнетение кашля может затруднить отхождение слизи.
4. Вечером перед сном накануне забора материала назначают препараты, которые облегчают отхождение секрета (муколитики). Если отхождение мокроты затруднено, то в таком случаем применяют ингаляционное введение разжижающих или отхаркивающих лекарственных средств.

Нужно приготовить стерильную герметическую емкость для материала.

Помещение, где проводится забор, должно быть хорошо проветрено, соответствовать санитарным нормам, быть отдаленным от большого собрания людей.

Для облегчения отхождения секрета можно выпить теплой воды. После этого хорошо откашливаются и сплевывают мокроту в контейнер. Необходимо проследить, чтобы не была сплюнута слюна.

Забором материала занимаются работники лечебных медицинских учреждений. Лучше всего сдавать мокроту под контролем медика, который определит правильность выполнения процедуры. Изучением патологического материала занимается лаборант, задача которого заключается в точном и правильном исследовании мокроты.

Мокроту для исследования на туберкулез необходимо доставить сразу же после ее забора. В крайнем случае, она хранится не более семи дней в холодильнике при температуре +3°С. При транспортировке все контейнеры плотно упаковывают в специальные биксы, фиксируя их в вертикальном положении. Должна быть защита от УФ лучей. К каждому боксу прикрепляют описание образцов ТБ-05(а), дату и номер забора.

Бактериоскопическое исследование заключается в создании мазка на предметном стекле, который проходит определенные этапы обработки. Одним из них является окрашивание по методу Циля-Нильсена. Далее проводят пересмотр 100 полей зрения. Если не обнаруживаются МБТ, то просматривают еще дополнительно 200.

Также исследуемый материал окрашивают карболовым фуксином. Затем обесцвечивают 5% раствором серной кислоты или 3% солянокислым спиртом. Затем мазок окрашивают метиленовым синим и просматривают в микроскопе с применением имерссионного масла.

Важно! Всем пациентам с подозрением на туберкулез проводят микроскопию трех различных образцов мокроты. Это может выполнить любая клиническая лаборатория. Данное исследование входит в диагностический минимум на предмет туберкулезной инфекции.

Микроскопическим методом обычно выделяют около 75% всех бактериовыделителей среди впервые заболевших туберкулезом. Важно придерживаться кратности диагностических мероприятий – это повышает выявляемость и информативность.

При своевременно проведенном бактериоскопическом исследовании можно выявить больного на начальной стадии заболевания, изолировать его, и уже в ближайшее время начать специфическую химиотерапию, что, в свою очередь, снизит вероятность возникновения осложнений.

Бактериологический метод исследования проводят при помощи таких способов, как:

• люминесцентная микроскопия мазков;
• посев мокроты на туберкулез;
• биологический способ (заражение морских свинок);
• иммуноферментное исследование;
• молекулярно-генетический способ;
• ВАСТЕС 460 – жидкостно-культуральная система;
• MGTT 960;
• амплификация нуклеиновых кислот – ПУР.

В основном эти методы относят к высоко специализированным и проводят в специальных лабораториях.

Расшифровка результатов анализа на наличие микобактерии туберкулеза заносится в форму ТБ-05 (заполняется на каждого пациента). Данное заключение содержит следующие пункты:

• название ЛПУ;
• дата заполнения;
• ФИО, возраст, пол, адрес пациента;
• причина проведения анализа (диагностика, контроль);
• номер образца и районный идентификационный номер пациента;
• дата забора мокроты;
• результаты диагностики (лабораторный порядковый номер, внешний вид мокроты, микроскопический анализ, ФИО лаборанта с подписью и датой).

Несмотря на то, что результат исследования может быть положительным, установлением окончательного диагноза занимаются фтизиатры в туберкулезном диспансере. Как правило, требуется проведение еще нескольких методов исследования, одним из которых является рентгенологический.

В зависимости от результатов микробиологического исследования, существует 4 варианта тактических действий:

1. При нахождении КУБ (кислотоустойчивых бактерий) в двух мазках бронхиального секрета больного необходимо направить в противотуберкулезный диспансер.
2. Если КУБ найдены в одном мазке из двух, необходимо провести рентгенологическое исследование. После этого больно отправляют в противотуберкулезный диспансер для уточнения диагноза.
3. Если КУБ не выявлены ни в одном из мазков, но тем не менее есть клинические проявления туберкулезной инфекции, а рентгенологически определяются очаговые или инфильтративные изменения в легких – проводят тест-терапию антибиотиками широкого спектра действия в течение двух недель. При этом нельзя назначать специфические к туберкулезному возбудителю препараты. Если терапия успешна – диагноз туберкулеза снимается. Но если терапия не дала результата, то в таком случае больного отправляют на дообследование в туберкулезный диспансер.

Мазок мокроты при туберкулезе

Если КУБ не найдены ни в одном из образцов бронхиального секрета, но в легких на рентгенограмме найдены очаги диссеминации, круглая или кольцевидная тень – то в таком случае пациента также отправляют на дообследование в диспансер.

Результаты считаются положительными и имеют определенную степень, если:

1. В каждом поле зрения определяется больше 10 КУБ – степень 3+. При этом проверяют не меньше 20 полей зрения.
2. В каждом поле зрения определяется от 1 до 10 кислотоустойчивых бактерий – степень 2+. При этом просматривают от 50 полей зрения.
3. На 100 полей определено от 10 до 99 КУБ – степень 1+. Проверяют при этом не меньше 100 полей.
4. На 300 полей определено 4-9 КУБ – недостаточно позитивный результат степень 1+. В соответствующей графе записывают конкретную цифру, например, 6/300.

Негативным считается результат, если:

1. При исследовании не меньше чем 300 полей зрения определено от 1 до 3 КУБ.
2. При исследовании 300 полей зрения не найдено ни одного КУБ.

Повторный забор проводят через несколько дней для постановки точного диагноза. Самый оптимальный вариант – трехразовая сдача. Иногда могут потребоваться дополнительные пробы. Результаты бактериологического исследования можно получить на следующий день после сдачи мокроты.

При соблюдении всех правил забора материала, техники безопасности и своевременном обращении за медицинской помощью диагностика и лечение туберкулеза не вызовет никаких затруднений.

источник

Мокрота является патологическим отделяемым органов дыхательной системы. По характеру она может быть слизистая, гнойная или с примесями крови. Секреция происходит в бронхах, что приводит к раздражению рецепторов и появлению кашля. В результате появляется отделяемое, которое подлежит различным исследованиям. Проводят бактериоскопию и посев. Эти два этапа помогают в диагностике заболевания.

Туберкулёз — это заболевание, которое протекает в большинстве случаев под маской других болезней. Зачастую его путают с гриппом или ОРВИ. В постановке диагноза помогает проведение флюорографии, которая показывает патологические участки лёгких. Мокроту при появлении подозрений отбирают с целью установления факта выделения бактерий. То есть это исследование является не основным в выявлении туберкулёза, но обязательным. Чтобы правильно сдать анализ мокроты, необходимо:

1. Сдавать натощак, желательно рано утром часов в восемь.
2. Зубы перед сбором мокроты не чистить.
3. Тщательно прополоскать рот тёплой и заранее прокипячённой водой.
4. Вызывают мокроту несколькими глубокими вдохами.
5. После этого появляется позыв к кашлю.

Собирать следует в специально заготовленную ёмкость. Лучше приобрести её в аптеке, так как посуда должна быть полностью стерильной. Необходимый объем для анализа составляет 5 мл. После того как мокрота будет собрана, её необходимо доставить в лабораторию.

При сборе важно избегать касания ртом или руками краёв стерильной посудины. Это может исказить результаты исследования.

В целом схема сбора материала для определения микобактерии не отличается от вышеописанной. Но имеется ряд особенностей, которые следует учитывать для получения достоверных данных. Правила сбора мокроты на туберкулёз следующее:

1. Для этой процедуры требуется отдельная комната.
2. В помещении должна быть предусмотрена хорошая вентиляция.
3. Собирать только при условии открытых окон.
4. Необходимое количество 3 или 5 мл.

Собирать мокроту в домашних условиях следует в отдельной комнате при открытых окнах либо на улице. Если такой возможности нет, то все мероприятия проводятся перед открытым окном или форточкой в отсутствии других членов семьи.

Анализ мокроты на туберкулёз проводят сразу при обнаружении симптомов, говорящих об этом заболевание. Большое значение отводится контейнеру, в который непосредственно собирается материал от больного человека. Необходимо, чтобы ёмкость:

• имела широкое горло с диаметром более 3 см;
• обладала высокой прозрачностью и прочностью;
• была с крышкой, которая плотно и легко закрывается;
• из материала, позволяющего без труда нанести данные о пациенте;
• стерильной и одноразовой.

Обычно материал на исследование мокроты с целью выявления туберкулёза собирается в течение трёх дней подряд. Проводится все в утренние часы.

Если пациент не в состоянии откашлять мокроту, то ему назначается предварительная ингаляция с изотоническим раствором хлорида натрия.

При сборе мокроты на туберкулёз представляет трудность именно откашливание отделяемого. Существует несколько способов:

1. Сперва необходимо просто попробовать покашлять. При успешном отхождении мокроты следует собрать её в чистый контейнер.
2. Если таким способом не получилось собрать материал, то можно попробовать постучать несколько раз в грудь. Это поможет спровоцировать кашель.
3. Также следует сделать два глубоких вдоха. Затем на несколько секунд задержать дыхание, после чего медленно выдыхать. Далее вдохнуть в третий раз и резко выдохнуть воздух.
4. При отсутствии эффекта можно провести обычные дыхательные упражнения.
5. В последнюю очередь сделать ингаляцию. В домашних условиях подышать можно над тёплой водой. В неё добавляют 1 столовую ложку соли или пищевой соды.

Все эти мероприятия помогают вызвать кашлевой рефлекс и соответственно вызвать и собрать мокроту для анализа. Для получения достоверных результатов необходимо помнить о некоторых важных правилах. К ним относится следующее:

• сбор материала проводится только в чистую и стерильную ёмкость;
• всегда в утреннее время;
• зубы не чистятся, ротовая полость только ополаскивается;
• контейнер после сбора плотно закрывается;
• руки следует помыть с мылом.

Желательно собирать мокроту на улице. Это связано с тем, что микобактерии при кашле могут выделяться в окружающую среду. В результате они длительное время сохраняются на вещах домашнего обихода. Это может стать риском заражения других здоровых членов семьи.

Ещё одним важным моментом при сборе мокроты является обращение с самим контейнером. После его вскрытия нельзя обхватывать его губами или трогать внутренние стороны ёмкости руками. Следует максимально близко поднести его к ротовой полости и осторожно собрать мокроту.

Все перечисленные моменты играют важную роль в получении правильных результатов. Также важно своевременно доставить контейнер в лабораторию. Оптимальное время два часа.

Выделяют четыре способа, благодаря которым можно выявить наличие или отсутствие микобактерий. К ним относят:

• микроскопию по Цилю-Нельсену;
• люминесцентный;
• бактериологический (или посев);
• ПЦР.

Все перечисленные методы позволяют в мокроте обнаружить Палочки Коха. После сдачи материала в специальный контейнер, его доставляют в лабораторию, где проводится необходимое исследование. Для получения достоверного результата сдаётся три пробы мокроты, с каждой из которых отбирают необходимое количество материла. Если хотя бы в одном из трёх мазков обнаруживают КУМ (кислотоустойчивые микобактерии – признак туберкулёза), то результат считается положительным. Рассмотрим, как именно проводится анализ мокроты с целью выявления туберкулёза.

В настоящее время является основным главным методом, позволяющим определить возбудителей заболевания. На основании результатов, можно сделать вывод о наличии или отсутствии микобактерии. То есть такой способ диагностики выступает в качестве маркерного, позволяющего определить, есть ли КУМ или нет.

Анализ мокроты проводится следующим образом:

1. Мазки окрашивают специальным раствором.
2. Затем просматривают в микроскопе.
3. Для этих целей используют прибор с иммерсионной системой.
4. На приготовленных мазках КУМ приобретают красный цвет.

Результат при исследовании таким методом можно получить уже в течение одного часа. Обычно анализ готовится сутки. Микроскопия является доступным и экономичным способом выявления туберкулёза. Но при этом отсутствует специфичность, то есть он может обнаружить любые виды микобактерий, даже те, которые не вызывают данную патологию лёгких.

Из названия становится понятно, что для исследования используют специальный микроскоп. Сами микобактерии при этом светятся жёлтым светом на фоне тёмного окраса. Метод важен тем, что с его помощью определяют количество бактерий. То есть по нему судят о тяжести и длительности заболевания.

Метод является достаточно информативным. Суть: происходит копирование одного участка известного ДНК. В результате это позволяет обнаружить микобактерии в анализе мокроты. Готовится анализ в течение 4 часов. То есть с помощью ПЦР можно быстро узнать о наличии или отсутствии туберкулёза. Метод высокочувствительный и универсальный.

Посев мокроты на туберкулёз проводится путём нанесения материала на специальные питательные среды. Для 100% выявления возбудителей необходимо всего 20 жизнеспособных КУМ. Растут бактерии в течение нескольких месяцев. Обычно от 20 дней до 12 недель.

На питательной среде растут в виде колоний, которые отличаются своей шероховатостью и грубоватостью на поверхности. С помощью этого метода судят о наличии бактериовыделения. Результат определяют по 3 баллам:

• «+» говорит о скудной картине;
• «++» свидетельствует об умеренном выделении;
• «+++» обильное.

Последнее представляет собой наибольшую опасность как для самого человека, так и окружающих его людей.

При исследовании мокроты обязательно определяют наличие лекарственной чувствительности. Проводится она только после вырастания колоний на питательной среде. После определения делают корректировки в лечении пациента.

Учитывая, что исследовать мокроту можно несколькими способами, следует выделить плюсы проведения анализа. К ним относят:

• выявление бактерии в короткие сроки в случае проведения ПЦР или микроскопии;
• определение вида микобактерии;
• выявление активности бактериовыделения;
• устойчивость к антибиотикам.

В настоящее время определение туберкулёза проводится многими методами. Обычно это флюорография или реакция Манту. Для подтверждения проводится бактериологическое исследование или посев. Только с его помощью можно выделить важную информацию в отношении больного человека. Важным является определение лекарственной устойчивости. Учитывая эти сведения, врач подбирает адекватную терапию.

Важно понимать, что исследование мокроты проводится для определения степени выделения возбудителя в окружающую среду. Если у пациента имеется закрытая форма туберкулёза, то не факт что в мокроте могут обнаружиться бактерии.

В первую очередь, это трудность сбора. Не каждый человек может правильно и без погрешностей собрать материал в контейнер. Поэтому важно спрашивать у врача или медицинской сестры о правилах.

Вторым отрицательным моментом является длительность. То есть результат готовится при посеве в течение одного или трёх месяцев. Поэтому на протяжении этого времени лечение проводится всеми препаратами, согласно принятой схеме.

При обнаружении туберкулёза проводится исследование мокроты. Осуществляется это несколькими методами, каждый из которых обладает своими плюсами и минусами. Оптимальным является посев материала на питательные среды. Для получения быстрого результат стоит прибегнуть к ПЦР или микроскопии.

Сдавать мокроту нужно только в стерильный контейнер и как можно раньше следует доставить его в лабораторию.

источник

Исследование мокроты на МБТ имеет важное клиническое и эпиде­миологическое значение. Обнаружение в мокроте микобактерий свидетель­ствует о том, что больной является бацилловыделителем, т.е. может выде­лять микобактерий во внешнюю среду. Такие больные представляют по­вышенную опасность для окружающих здоровых людей.

Мокроту лучше собирать утром, предварительно прополоскав рот, чтобы в ней было меньше слюны. При малом количестве мокроты ее соби­рают в течение суток. При отсутствии мокроты используют раздражающие ингаляции аэрозолями гипертонических растворов (например, поваренная соль с содой) для ее появления.

Исследование мокроты начинают с ее осмотра. При кровохарканье в мокроте обнаруживают прожилки или сгустки крови. Также в мокроте могут обнаруживаться кусочки бронхиолитов — обызвествленных камней бронхов.

При микроскопии мокроты в ней могут выявляться эритроциты, лей­коциты, эпителий, альвеолярные клетки, пылевые клетки, цилиндрический и плоский эпителий, известковые соли, кристаллы холестерина, эластиче­ские волокна.

Наибольшее значение имеет обнаружение в мокроте эластических во­локон. Эластические волокна выделяются из легких в виде пучков различ­ной величины, сохраняющих очертания альвеол, без сохранения альвео­лярного строения или в виде небольших обрывков. Кроме того, в мокроте могут обнаруживаться так называемые коралловидные волокна (волокна Коппена-Джонса) — толстые, шероховатые образования, которые образу­ются в результате отложения на эластических волокнах жирных кислот. Могут также выявляться обызвествленные волокна.

Наличие эластических волокон в мокроте указывает на разрушение легочной ткани. При свежем распаде пучки волокон сохраняют альвеоляр­ное строение, при пролиферативных формах туберкулеза альвеолярное строение не сохраняется. Коралловидные волокна появляются в основном в случаях старого туберкулеза, обызвествленные волокна — при распаде обызвествленных очагов во время обострения процесса.

В мокроте больных туберкулезом можно обнаружить известковые со­ли (в основном карбонаты и сульфаты). Они попадают в мокроту чаще всего из старых, распадающихся обызвествленных очагов.

Кристаллы холестерина, как правило, свидетельствуют о наличии в легких старых каверн.

В ряде случаев в мокроте может обнаруживаться так называемая «тетрада Эрлиха»:

Обызвествленные эластические волокна

Известь в виде кристаллических и аморфных образований

Обнаружение в мокроте тетрады Эрлиха свидетельствует об обо­стрении старого туберкулезного процесса.

Исследование мокроты также проводится бактериоскопическим, бак­териологическим и биологическим методами — см. предыдущий вопрос.

Исследование плевральной жидкости в основном применяется для диагностики туберкулезного плеврита.

Прозрачный светло-желтого цвета, с нитями фибрина экссудат назы­вают серозным. Содержание белка в нем колеблется в пределах 40-60 г/л. В начальном периоде острой фазы серозного плеврита в клеточном составе 50.-60% нейтрофилов, 15-25% лимфоцитов, также обнаруживаются эритро­циты, базофилы, мезотелиальные клетки.

При стабилизации или стихании воспаления в экссудате превалируют лимфоциты (90-95%). Увеличение в экссудате количества нейтрофилов и уменьшение лимфоцитов свидетельствует о нагноении экссудата.

Исследование ликвора имеет важное значение в диагностике туберку­лезного менингита.

В норме При туберкулезном менингите

Прозрачная, бесцветная, может слегка опалесцировать, при стоя­нии через 12-24 ч образуется паутинообразная пленка

Характер истече­ния при пункции

50-60 капель в минуту (при нор­мальном давлении в спинномозговом канале — 120-200 мм вод. ст.)

Вытекает очень частыми каплями или струей (вследствие повыше­ния давления)

Реакции Панди и Нонне-Апельта

Количество кле­ток в 1 мкл (цитоз)

Значительно повышено — 100-150 и больше. Вначале цитоз ней-трофильно-лимфоцитарный, поз­же — лимфоцитарный

Резко снижено. Степень сниже­ния пропорциональна тяжести менингита

источник

Палочки размножаются в лёгких, образуют там колонии, выделяются при кашле, именно поэтому исследование мокроты – важный диагностический этап. Лабораторная диагностика делается в основном микроскопическим, микробиологическим методом, бактерии культивируют на плотных средах Левенштейна-Йенсена или Финна-II, окрашивание выполняют по Цилю-Нильсену. Есть и другие технологии, но все они не идеальны, имеют свои преимущества и недостатки.

Туберкулёз легких называют ещё чахоткой, что является устаревшим названием. Возбудитель – различные представители вида Mycobacterium tuberculosis complex, которых ещё называют палочками Коха (в честь первооткрывателя). Бактерии туберкулёза поражают в основном лёгкие, где образуют многочисленные колонии. Именно поэтому можно исследовать мокроту на наличие возбудителя. Также они формируют туберкулы – полые узелки из соединительной ткани, внутри которых находится гной и масса бактерий.

Лабораторное исследование мокроты довольно редко проводится для обнаружения людей, заражённых туберкулёзом. Чаще применяется для подтверждения диагноза, анализа состояния пациента, подстройки лечения, дозировки при химиотерапии, контроля результатов терапии. То есть оценка мокроты является постоянным необходимым способом исследования.

К лабораторной диагностике относится множество методов:

• макроскопия;
• микроскопия;
• иммуноферментный анализ;
• флуоресцентная микроскопия;
• полимеразная цепная реакция;
• культивирование.

Показанием к исследованию мокроты лабораторными методами являются признаки туберкулёза:

• гипертермия;
• длительный продуктивный кашель;
• затемнения на флюорографии.

К достоинствам технологии относят следующие факты:

• результат можно получить достаточно быстро при ПЦР и микроскопии;
• установить точный штамм бактерии;
• проконтролировать влияние химиотерапии или антибиотиков.

Минусы анализа мокроты следующие:

• при скрытой форме туберкулёза бактерии не выделяются при кашле, из-за чего результат лабораторной диагностики будет отрицательным;
• мокроту довольно трудно собрать, для этого нужна специальная герметичная ёмкость;
• некоторые методы (культивирование) довольно длительные – более месяца.

Можно брать экссудат следующего рода:

• материал после ингаляции небулайзером;
• промыванием бронхов специальными растворами;
• мокрота из альвеол;
• получение слизи при бронхоскопии;
• взятие биоптата их трахеи, бронхов или плевры;
• мокрота из бронхов;
• мазки с гортани.

Мокроту собирают в плотно закрывающиеся стерильные и герметичные ёмкости. Это нужно для снижения вероятности занесения микробов в окружающий мир.

Ёмкости должны соответствовать следующим требованиям:

• делаться из ударопрочного материала;
• иметь хорошую прозрачность для возможности визуальной оценки качества и количества мокроты;
• расплавляться при температуре 40-45 градусов;
• иметь объём не меньше 40-50 мл;
• отверстие должно быть шире 3 см.

Результативность и достоверность исследования мокроты зависит от правильности её сбора, соблюдения рекомендаций, которые должны минимизировать вероятность загрязнения материала. Кроме того, откашливание производится в герметичной комнате, так как данная процедура опасна для всех окружающих.

При сборе материала нужно соблюдать ряд правил:

• откашливание мокроты во флакон делается до начала химиотерапии;
• также его проводят обязательно с утра, до завтрака и приёма препаратов;
• при исследовании берут 3 пробы (каждый раз откашливая в новую ёмкость) в течение 3 суток подряд;
• материал сразу же отвозят в лабораторию (в течение часа). В идеале она должна находиться в одном здании с туберкулёзным стационаром;
• при невозможности это сделать пробу ставят в холодильник при +4оС, но держать там можно не более 2 суток;
• крайне важно следить за целостностью ёмкостей. Нарушение герметичности приводит не только к порче пробы, но и к опасному заражению окружающей среды;
• объём одной пробы должен составлять 3-5 мл;
• медицинский работник обязательно одевает халат, шапку, медицинскую маску, резиновые перчатки и специальный фартук;
• больному нужно откашливать не слюну или слизь из носа и глотки, а именно мокроту из нижних отделов бронхов. Для создания продуктивного кашля можно сделать 2-3 глубоких вдоха;
• перед откашливанием рот тщательно промывают водой, чтобы удалить естественную микрофлору и кусочки пищи;
• ёмкость держат у самых губ, после откашливания мокроту сразу сплёвывают;
• медицинский работник стоит сзади больного, чтобы мокрота не попала на него. Его задача – контролировать правильность сбора материала;
• после сбора слизи флаконы сразу герметично запечатывают;
• если больному трудно откашливать мокроту, то накануне вечером, а также рано утром перед сбором слизи пациенту даёт отхаркивающие препараты.

Режим сбора материала для лабораторного анализа на туберкулёз легких зависит от стадии развития и лечения заболевания:

1. При первом поступлении в течение 3 суток делают по 3 пробы ежедневно.
2. Во время лечения ежемесячно собирают 3 пробы за раз.
3. На долечивании каждые 2-3 месяца берут 2 пробы мокроты.

Исследование мокроты делается множеством способов. У каждого метода есть свои преимущества и недостатки, выбор технологии диагностики зависит от решения врача и оснащения больницы.

Характер мокроты зависит от стадии туберкулёза лёгких:

1. При инфицировании на латентной стадии мокроты может не быть, или она имеется, но в минимальном количестве и обладает белым цветом или прозрачностью.
2. При развитии клинической стадии мокрота приобретает выраженный гнойный характер, оттенок меняется на серый, жёлтый или зелёный, появляется неприятный запах.
3. На более поздних стадиях, при появлении рецидивов в мокроте обнаруживаются прожилки крови.

Наиболее быстрый, простой и дешёвый способ оценки материала на туберкулёз легких. За счёт этого может применяться для постановки диагноза, однако он не имеет достаточно высокой надёжности, поэтому его сочетают с флюорографией. Используется для оценки состояния больного в процессе лечения.

1. Прямая микроскопия. Материал готовится непосредственно из мокроты.
2. Микроскопия осадка. Материал концентрируется с помощью центрифугирования.

Для 50% достоверности метода нужно минимум 5000 бактерий на мл мокроты.

Для увеличения надёжности способа исследуют минимум 3 пробы материала. Получение отрицательного результата не означает отсутствие туберкулёза, так как мокрота может содержать очень малое количество возбудителей из-за закрытой формы.

Окраска делается по Цилю-Нельсену:

1. В материал вносится карболовый фуксин при повышенной температуре и протравливании фенолом, который проникает во все бактерии препарата.
2. Препарат обесцвечивается 25% серной кислотой и 3% солянокислым спиртом. Из-за восково-липидной мембраны палочки Коха не подвергаются воздействию кислот, поэтому они сохраняют окраску.
3. Остальные микробы подкрашиваются 0,3% метиленовой синью. Бактерии туберкулёза не восприимчивы к анилиновым краскам, из-за этого цвет у них не меняется.

В итоге палочки Коха приобретают красный цвет, а все остальные клетки – синий. Препарат надо рассматривать через световой бинокулярный иммерсионный микроскоп с тысячекратным увеличением. Для постановки диагноза обычно хватает 100 полей зрения. При отсутствии бактерий рекомендуется просмотреть ещё 200 полей.

Метод основан на реакции антигена и антитела. Антитела – специфические иммуноглобулины, которые образуются в ответ на проникновение бактерий и вирусов. Антиген – протеины, вызывающие выработку иммуноглобулинов.

1. Берётся антитело, меченное каким-либо веществом. Оно добавляется в материал, где присутствует антитело. В ходе реакции образуется единый комплекс.
2. Добавляется фермент, который меняет цвет меченных комплексов антиген-антитело. Интенсивность окраски материала указывает на количество иммуноглобулинов.

ВАСТЕС MGIT960 – автоматизированный прибор на 960 проб, который самостоятельно проводит исследование материала. Суть метода состоит в следующем:

1. В ёмкость вносится флюоресцирующий материал, флуоресцентные свойства которого блокируются с помощью кислорода.
2. Бактерии при своей жизнедеятельности поглощают кислород, уменьшают его количество.
3. Из-за снижения концентрации усиливаются флуоресцентные свойства материала. Оно регистрируется в автоматическом режиме.

Первые результата регистрируются на 4-5 день, а для достижения максимума нужно 11 суток.

Люминесценция позволяет поднять результативность исследования на 10-15%, а требуемое время на это снизить в 2-3 раза. Применяют флуоресцентные краски: аурамин и родамин. Их действие связано со способностью вступать в реакцию с воскоподобными веществами бактериальной мембраны возбудителя. При облучении ультрафиолетом окрашенные таким способом палочки Коха начинают светиться оранжевым или красным цветом, при том, что остальной материал имеет чёрный или тёмно-зелёный оттенок.

Важно! Недостатком является сравнительно высокая стоимость метода.

Из-за того, что бактерии в препарате становятся очень яркими и контрастными, то можно уменьшить расширение микроскопа в 4-10 раз, сократив тем самым необходимое время на исследование материала. К тому же флуоресцентная окраска при соотнесении с окрашиванием по Цилю-Нельсену может дать информацию, сколько бактерий потеряло кислотоустойчивые свойства вследствие химиотерапии.

Метод основан на увеличении количества ДНК возбудителя в материале в 100-110 раз за счёт специальных ферментов. Данный способ применим лишь для тех микробов, у которых точно установлен состав нуклеотидной последовательности. В отличие от копирования ДНК в результате деления клеток при ПЦР создаются лишь обрывчатые короткие участки ДНК.

Метод имеет множество преимуществ:

• для положительного результата достаточно 10-100 бактерий в пробе;
• абсолютная специфичность, так как метод применяется для конкретной ДНК;
• результат становится известным через 4-5 часов.

Тем не менее, из-за высокой чувствительности метода возможны ложноположительные результаты, что является существенным минусом. Диагностика проводится с помощью амплификатора – специального прибора, в котором проходит реакция. Он создаёт условия для ПЦР и может использоваться для хранения препарата.

Для культивирования рекомендуется плотная среда. На западе используется состав Левенштейна-Йенсена, который даёт колонии через 15-25 суток. В России применяют среду Финна-II, которая уменьшает срок получения результата на 2-3 дня и увеличивает вероятность появления колонии на 6-8%. Однако при любой среде рекомендуется посев минимум 2-3 материалов. Связано это с тем, что даже при нескольких пробах нет точной гарантии достоверности результата. Установлено, что при 6 посевах вероятность обнаружения туберкулёза увеличивается на 7-8%.

Исследование мокроты при лечении туберкулёза – обязательное условие для контроля состояния пациента. Сбор слизи должен соответствовать всем требованиям, иначе будет портиться материал, появиться опасность заражения. Анализ можно проводить разными методами, каждый из которых имеет свои плюсы и минусы. При исследовании желательно сочетать сразу несколько технологий, чтобы повысить достоверность.

источник

В здоровом организме бронхи вырабатывают слизь без цвета и запаха, которая необходима для того, чтобы очищать дыхательные пути от попадающих туда микроскопических частичек пыли, вдыхаемого мусора и микробов. Механизм очищения органов дыхания очень прост: реснички эпителия, устилающего их, поднимают слизь наверх вместе с чужеродными частицами. В норме такой мокроты вырабатывается очень мало, поэтому здоровый человек не замечает ее отделения, и она проглатывается вместе со слюной.

Но на фоне любого воспалительного процесса, сопровождающего, какое-либо заболевание дыхательных путей, в том числе и туберкулеза, количество продуцируемой бронхами мокроты значительно возрастает. Это связано, в первую очередь, с раздражением бокаловидных клеток, а также, при присоединении воспалительного процесса, когда клетки иммунной системы организма начинают поглощать патогенные микроорганизмы, образуются гнойные массы. Они также формируют отделяемое в виде мокроты при заболеваниях дыхательных путей. С помощью кашля организм выводит эту жидкость – именно с помощью нее диагностируются многие бронхо — легочные патологии и выявляется степень и характер течения воспалительного процесса.

Количество выделяемой при влажном кашле мокроты также указывает на некоторые особенности течения заболевания. При этом она может, не выводится посредством кашля совсем (трудноотделяемая мокрота) или, наоборот, биоматериал можно собрать без каких-либо трудностей. Два самых распространённых исследования этого отделяемого – это бактериоскопия и посев: именно эти два этапа позволяют провести точную диагностику заболевания, вызвавшего повышенное отделение мокроты и как следствие, влажный кашель с рядом сопутствующих симптомов.

1. Для начала необходимо позаботиться о контейнере – его можно купить в любой аптеке. Это специализированная емкость для сбора мокроты: она стерильна, с широким горлышком и крышкой. Также контейнер могут выдать в медицинском учреждении. Необходимый объем биоматериала для исследования – 5мл, поэтому емкость должна быть соответствующая.
2. Самым подходящим временем для сбора мокроты являются утренние часы, поскольку за время ночного сна скапливается достаточное количество и собрать ее гораздо легче. Однако бывают такие обстоятельства, когда мокрота забирается в любое время суток.
3. Перед тем, как приступить к сбору мокроты на анализ, тщательно прополоскать ротовую полость, при этом чистить зубы перед этим нельзя.
4. Биоматериал для анализа собирается следующим образом: сделав максимально глубокий вдох, задержать дыхание, после чего медленно выдохнуть – повторить еще раз. Сделав третий глубокий вдох, резко выдохнуть, как бы выталкивая воздух из лёгких, и как следует откашляться. Во время этого рот должен быть прикрыт марлевой повязкой.
5. Контейнер необходимо придерживать у нижней губы — сплюнуть в него все содержимое, которое получилось откашлять и плотно закрыть стерильную баночку крышкой.
6. Если после одного раза мокроты отошло очень мало, то процедуру следует повторить, для того чтобы собрать необходимое для исследования количество(5-7 мл.)

Для начала можно попробовать поменять положение тела при откашливании: облегчают отхождение мокроты наклоны вниз, положения, лежа на боку или на животе.

Если такие меры не привели к положительному результату, то можно принять отхаркивающие средства или сделать ингаляцию. Отхаркивающие препараты назначает лечащий врач, и начинать принимать их необходимо за сутки до сбора мокроты (бромгексин, амбробене и другие традиционные препараты). Совместно с приемом таких препаратов необходимо употреблять достаточно большое количество жидкости для облегчения отхождения мокроты.

Ингаляцию для этой цели делают на основе раствора соды и соли. Вдыхать такую смесь следует через небулайзер 10-15 минут(40-60 мл.). Если начинается усиленное слюноотделение, то ее нужно сплюнуть, только потом собирать мокроту.

Если не удается собрать мокроту всеми вышеперечисленными способами, то пациенту назначается процедура бронхоскопии. Еще такое исследование проводится в случаях, когда необходимо собрать секрет мокроты с бронхов, без примесей слюны и носоглоточной микрофлоры.

Процедура проводится посредством двух методик:

• В бронхи вводится 100-200 мл. физ. раствора через вставленный катетер, после чего полученная жидкость посредством аспирации выводится обратно.
• В просветы бронхиального дерева вводят катетер для прямой аспирации слизи.
  Пациенту необходимо пройти подготовку к этой процедуре: не употреблять пищу и жидкость в течение 6 часов, как правило, она назначается на утреннее время, чтобы пациенту было легче выдержать такой интервал времени. А после нее не употреблять аспириносодержащие препараты, которые обладают способностью разжижать кровь.
  И промывные воды, и непосредственно мокрота, полученные таким способом, используются для всех видов исследований на данном биоматериале.

Если сдача мокроты проводится в условиях стационара, то медицинский работник предоставляет пациенту специально оборудованную процедурную, консультирует по поводу процедуры сдачи и контролирует весь процесс. Также медработник подписывает контейнер с биоматериалом и отправляет его на исследование.

Анализ мокроты на туберкулез позволяет выявить легочный тип развития заболевания. Основными показаниями для его проведения являются:

• Кашель затяжного характера (влажный или сухой);
• Выявленные затемнения на снимках рентгена;
• Повышенная температура тела.

Для постановки диагноза туберкулез легких, анализ мокроты является обязательным в спектре исследований, проводимых при подозрении на данное заболевание. Обязательным исследование на инфицирование туберкулезом считается в тех случаях, когда больной больше трех месяцев страдает от сухого кашля, который не поддается никаким видам лечения.

В связи с тем, что биоматериал для исследования на микобактерии берется не только при помощи непосредственного отхаркивания, но и путем бронхоскопии, данное исследование имеет противопоказания. При процедуре бронхоскопии вводится трубка в верхние органы дыхания под общей или местной анестезией. Поэтому, такая методика забора анализа противопоказана:

• пациентам, страдающим аллергией на обезболивающие медикаменты;
• людям с тяжелой дыхательной недостаточностью;
• с нарушениями свертываемости крови;
• пациентам, в ближайшие пол года перенесшим инфаркт миокарда или инсульт;
• с такими заболеваниями, как эпилепсия и шизофрения.

Детям до 18 лет процедура бронхоскопии назначается и делается только с согласия родителей. Сама процедура является безопасной и осложнения вызывает крайне редко, но препараты, предназначенные для общей и местной анестезии, могут вызывать непереносимость и аллергические реакции. Этот вопрос необходимо обязательно обсудить перед процедурой с лечащим врачом.

Самым весомым плюсом этого анализа является стопроцентная точность диагностики и возможность выявления туберкулеза на ранних этапах заражения. Тест включает в себя забор нескольких проб, которые способны однозначно указать присутствие или отсутствие возбудителя в легких пациента.

Сам анализ вариативен, и проводить его можно удобным для пациента способом; данная методика выполняется в короткие сроки, и доставляет минимум дискомфорта пациенту.

Такой метод сбора анализа на микобактерии не имеет побочных воздействий на организм пациента. Нет необходимости вводить медицинские препараты или сдавать анализы крови, мочи. По сути, сбор анализа на микобактерии происходит естественно, без особых трудностей и дискомфорта для пациента. Часто это становится актуально, когда речь идет о малолетних детях, которые весьма негативно переносят такие диагностические процедуры.

С помощью такого информативного метода, как бронхоскопия, медики имеют возможность выявить и другие патологии небактериального характера на ранних сроках (бронхиальная астма, рак легких и т.д.). Расширенное исследование качественного состава мокроты позволяет произвести диагностику на любом этапе развития заболевания . Таким образом, анализ может не только подтвердить или опровергнуть диагноз туберкулез, но и установить причину возникновения тревожной симптоматики.

К минусам можно отнести достаточно долгое ожидание результата анализа. На это есть две главные причины: многостороннее обследование биоматериала, включающее в себя бактериологический анализ и посев мокроты на питательные типы сред, который и является самым долгосрочным видом исследования. Время ожидания может растянуться от 3 недель до двух месяцев.

К отрицательной стороне также можно отнести многократное проведение бронхоскопии при подозрении на заражение туберкулезом, при отсутствии главного симптома – кашля.

После того как биоматериал поступил на исследование в лабораторию, специалист в первую очередь, занимается его визуальной оценкой. При тяжелых формах туберкулеза, например, в мокроте наблюдаются вкрапления крови или кровяные сгустки. Но такое отделяемое не является стопроцентным показателем заражения туберкулезом – наличие крови в мокроте может говорить и о крупозной пневмонии, и об опухолевых процессах, о бронхоэктатической болезни.

Если все же речь идет о туберкулезном заражении, то при дальнейшем исследовании в мокроте будут обнаружены микобактерии. В современной медицине используются две основных проверенных временем методики лабораторного исследования мокроты: бактериоскопическая и культуральная (биологическая).

Бактериоскопия применяется в диагностике туберкулеза уже более ста лет. Она включает в себя макроскопическое описание, микроскопическое исследование – при нем выявляются эритроциты, волокна легочной ткани, коралловидные, спириллы Куршмана и т.д. В мокроте зараженного туберкулезом пациента обнаруживаются, помимо микобактерий, темные фрагменты (зерна) – это частицы старых, распадающихся очагов.

Этот метод используется не только для выявления и диагностики такого коварного заболевания, как туберкулез, также он помогает в выборе рациональных схем химиотерапии и оценке их клинической эффективности.

Бактериологическая диагностика проводится в таком порядке:

1. Обработка материала, поступившего в лабораторию.
2. Микроскопическое исследование мокроты.
3. Посев мокроты на туберкулез.
4. Идентификация микроорганизма при помощи бактериологического и биохимического тестирования.
5. Определение лекарственной чувствительности туберкулезной палочки.

Проводится исследование мокроты на туберкулез с помощью двух методов: обычная (простая) бактериоскопия и метод флорации. Простой метод включает в себя приготовление мазков из комочков мокроты – их помещают между двумя предметными стеклами. Затем одна часть биоматериала окрашивается по Грамму на общую флору, а другая – на микобактерии туберкулеза.

С начала 90-х годов многие современные лаборатории стали использовать в диагностике туберкулеза флюоресцентную микроскопию, основанную на кислотоустойчивости микобактерии. Под воздействием ультрафиолетового излучения туберкулезные палочки проявляются в ярко-желтом цвете на черном фоне.

Культуральный метод включает в себя такие диагностические процедуры:

1. Удаление белковых масс путем обработки мазка разжижающими веществами.
2. Удаление сопутствующей бактериальной формы с помощью деконтаминации образца.
3. Встряхивание.
4. Отстаивание смеси.
5. Помещение в холодную центрифугу.
6. После этого содержимое пробирки отбирается на посев:
   • агаровой среды,
   • плотной яичной среды,
   • бульонного культивирования автоматизированного типа.

Культуральный посев мокроты повышает точность исследования в разы — при более легких степенях развития заболевания, при которых бактериологический метод может показать отрицательный результат. Однако работа таким методом требует хорошо оснащенных, современных лабораторий, которых, к сожалению, не имеют многие небольшие города и поселки городского типа.

Самыми быстрыми и точными видами анализов на обнаружение туберкулезной палочки являются молекулярно-генетические методы диагностики. Это современные комплексы анализов, включающие в себя расшифровку генома микобактерии туберкулеза. Такие молекулярно-диагностические методы открыли в современной медицине хорошие перспективы на последующее развитие эффективных методик борьбы с этим коварным заболеванием. Наиболее часто используется способ полимеразной цепной реакции – это тест предназначен для выявления микобактерии в мокроте или установления вида бактерий в культуральных средах.

Что имеет первостепенное значение в постановке диагноза — это время: вместе с обработкой материала, идентификация туберкулезной палочки занимает всего 5-6 часов. Кроме того, реакция ПЦР обладает высокой чувствительностью и специфичностью, что является залогом стопроцентно точного результата.

источник