Полимеразная цепная реакция для выявления туберкулеза

Полимеразная цепная реакция (далее ПЦР) — это высокоточный метод молекулярно-генетического исследования материла, который позволяет выявить у человека различные инфекционные заболевания и установить генотип возбудителя.

ПЦР для выявления различных заболеваний стала применяться в самом конце прошлого века. Первооткрывателем этого метода исследования является американский биохимик Кэри Муллис. Свое открытие он сделал в 1983 году. Но еще несколько лет понадобилось, чтобы доработать метод.

С помощью ПЦР-диагностики можно обнаружить фрагменты чужеродного ДНК в любой жидкой среде организма. На анализ могут быть взяты такие жидкости:

• Кровь.
• Слюна.
• Мокрота.
• Выделения из половых органов.
• Смывная жидкость бронхов.
• Желудочный сок.

Лечащий врач сам определяет, какую биологическую жидкость лучше взять на анализ при конкретном заболевании.

ПЦР-диагностика позволяет не только обнаружить микрофрагменты чужеродной ДНК, но и определить к какому конкретному виду она относится. То есть с помощью ПЦР можно не только точно установить возбудителя заболевания, но и выяснить к какому виду он принадлежит.

Процесс анализа ПЦР — очень сложный. Он состоит из нескольких этапов:

1. Сначала нужно обнаружить фрагменты вредоносной ДНК в предоставленном образце.
2. Копирование фрагмента ДНК. Маленького участка ДНК для анализа недостаточно, поэтому его копируют. Нуклеиновая кислота может копироваться в пробирке с помощью фермента полимеразы (вне живого организма). В пробирке образуется множество клонов, то есть происходит цепная реакция. Весь процесс происходит в три этапа под воздействием различных температур.
3. Когда генетического материала становится достаточно для исследования, тогда возбудитель определяется обычными методами.

Метод ПЦР очень точен и может выявить наличие любого возбудителя по небольшому фрагменту ДНК или РНК.

ПЦР-анализ на туберкулез является самым информативным методом диагностирования этого заболевания. Относительно туберкулеза этот метод позволяет не только установить наличие микобактерий в организме, но и определить к какому виду они принадлежат.

Результат ПЦР диагностики может быть простой и расширенный. В простом результате указывается только наличие/отсутствие микобактерии. Расширенный результат дает представление о дополнительных параметрах протекания заболевания. Правильно понять, что написано в результате анализа ПЦР может только фтизиатр.

ПЦР-диагностика туберкулеза не проводится всем без исключения. Это объясняется дороговизной реактивов и недоступностью проведения исследования в некоторых отдалённых районах (в таких местах пользуются другими методами диагностики).

Показаниями для проведения ПЦР-исследования являются:

• Длительный контакт с больным туберкулезом.
• Беременность. ПЦР крови на туберкулез является самым быстрым и безопасным методом для беременной женщины.
• Экстренная ситуация. Например, необходимость срочного оперативного вмешательства, при котором нужно точно установить наличие/отсутствие туберкулеза в организме.
• Аллергическая реакция на туберкулиновые пробы.
• ВИЧ-инфекция.
• Невозможность диагностирования заболевания другими способами, при наличии явных признаков туберкулеза.
• Неоднозначные симптомы, которые не позволяют создать четкую клиническую картину заболевания (болезни верхних дыхательных путей, сопровождающиеся большим количеством мокроты, кровохарканьем и пр.).

Метод ПЦР, при всей своей сложности и дороговизне, проводится и расшифровывается в течение нескольких часов. Что делает этот метод золотым стандартом при диагностике туберкулезной инфекции.

Забор материала — это первый этап при выполнении ПЦР-исследования. Для того, чтобы выполнить качественный анализ, нужно соблюдать определенные правила по сбору материла:

• Для ПЦР мокроты на туберкулез нужно тщательно провести туалет полости рта. Делать это нужно вечером и утром перед анализом. Все это время не есть. Вечером выпить муколитическое средство для лучшего отхождения мокроты.
• Перед сдачей крови на ПЦР нужно не употреблять пищу в течение 8 часов. Лучше всего производить забор крови утором натощак. Курить перед забором крови также нельзя. Кровь берется из вены на локтевом сгибе руки в стерильную пробирку. В эту же емкость добавляется антикоагулянт, чтобы кровь оставалась жидкой. Смешивать антикоагулянт с кровью нужно очень аккуратно, не делая резких движений. Если кровь была взята не в лабораторных условиях, то она должна быть предоставлена лаборанту до истечения пятичасового срока. Иначе результат может быть не точным.
• Моча собирается в стерильную емкость утром, до приема пищи. Перед сбором мочи необходим тщательный туалет промежности.
• Остальные виды жидкостей (смывы с бронхов, спинномозговая жидкость) может собрать только специалист в условиях стационара.
• Перед забором жидкостей на ПЦР-исследование запрещено принимать некоторые препараты (например, прием некоторых антибиотиков нужно прекратить за две недели до забора материала).
• Требования к лаборатории, в которой проводится забор анализов на ПЦР очень строгие. Лаборатория должна быть стерильна, чтобы не произошло перекрестное загрязнение материала. В этом случае результаты могут быть ложноположительными.

ПЦР-тест на туберкулез — высокоточный информативный анализ. И требования к его проведению крайне строгие. Чтобы анализ получился, нужно соблюдать регламент.

Для работы в ПЦР-лаборатории приглашаются специально обученные врачи: бактериологи, вирусологи, микробиологи. Все они прошли дополнительное обучение для работы на сложном оборудовании.

Лаборатория должна иметь лицензию на выполнение работ связанных с бактериологически-опасными вирусами и бактериями.

В самой лаборатории должны быть выделены такие рабочие зоны:

• Зона приемки и сортировки проб.
• Зона подготовки проб. В этом помещении выделяются нуклеиновые кислоты из образцов материала.
• Зона проведения реакционных проб.
• Зона для учета результатов и расшифровки анализов.

Все помещения располагают последовательно. Допуск в эти зоны разрешен только работающим там сотрудникам, которые при входе соблюдают правила личной защиты от бактерий и вирусов.

Лучше, если есть возможность расположить лабораторию в отдельно стоящем здании с собственной системой вентиляции.

В лаборатории соблюдаются стерильные условия работы, чтобы избежать перекрестного загрязнения проб. Даже если один фрагмент чужеродной ДНК попадет в исследуемый материал, ПЦР его размножит, и анализ получится ложноположительным.

В каждой зоне лаборатории имеется свой набор оборудования и посуды для проведения исследований. Также имеются свои холодильники, которые не могут быть использованы в других целях, кроме хранения материала конкретной зоны исследований.

Использованные расходные материалы и остатки биологического материала уничтожаются специальными способами, в соответствии с инструкциями.

ПЦР-тест на туберкулез имеет множество плюсов, которые делают этот метод диагностики все более востребованным:

• Срок проведения. Несмотря на сложность проведения анализа, он готовится намного быстрее других лабораторных методов диагностики туберкулеза (около пяти часов). Это свойство анализа ПЦР становится особенно важным, когда анализ необходимо провести экстренно.
• Анализ ПЦР абсолютно безопасен и может проводиться беременным женщинам и детям.
• ПЦР-исследование можно сделать, когда по каким-то причинам нельзя выполнить другие методы диагностики.
• С помощью ПЦР-диагностики можно провести исследование любой биологической жидкости на выбор. В некоторых случаях это имеет большое значение.
• Позволяет обнаружить возбудителя на любой фазе заболевания. Даже после проведенного лечения, сохранившиеся остатки ДНК мертвых микобактерий будут обнаружены.
• Высочайшая чувствительность этого метода позволяет обнаруживать в биологическом материале даже единичные фрагменты ДНК микроорганизмов.
• Метод ПЦР позволяет не только обнаружить присутствие заболевания, но и может определить генотип возбудителя, отличив его от похожих микроорганизмов.
• ПЦР-исследование очень эффективно при рецидивирующем течении заболевания.
• Благодаря высочайшей чувствительности, анализ ПЦР может распознать микобактерии в организме человека, когда он только недавно инфицировался туберкулезом, задолго до появления клинических симптомов.

Казалось бы, метод ПЦР-диагностики содержит в себе только плюсы, но это не так.

Минусы этого метода исследования тоже существенны. При выборе метода исследования туберкулеза это также стоит учитывать:

• Это дорогостоящий метод исследования. Для проведения ПЦР-диагностики нужна специально-оборудованная лаборатория. Оборудование для таких исследований стоит очень дорого, и не во всякой лаборатории оно имеется. В крайнем случае, можно обратиться в платную лабораторию.
• Сразу же после проведенного лечения метод ПЦР применять не рекомендуется. В крови пациента некоторое время сохраняется небольшое количество живых и мертвых микобактерий. Если провести анализ в этот период, он покажет ложноположительный результат.
• При мутациях микобактерий, анализ будет недостоверным, так как нормальная ДНК не сможет синтезироваться.
• Для ПЦР-исследования имеет значение правильный выбор биологической жидкости на анализ.
• Сверхчувствительность. Это тот случай, когда достоинство метода становится его недостатком. Если при проведении анализа в биологический материал каким-то образом попадет даже единичный фрагмент чужеродного ДНК, то ПЦР его размножит, и будет получен ложный результат.

ПЦР-лаборатория имеется только в крупных противотуберкулезных диспансерах и диагностических центрах.

Объясняется это высокой стоимостью оборудования и высокими требованиями к содержанию лаборатории (реактивы, обработка).

Медицинские чиновники не сильно переживают из-за отсутствия ПЦР-лаборатории в каком-то конкретном населенном пункте, поскольку анализы на туберкулёз можно провести другими методами (культивирование микобактерий, микроскопическое исследование).

Если в населённом пункте нет бесплатной ПЦР-лаборатории, пациент по желанию может обратиться в платное учреждение.

В последнее время ПЦР-диагностика занимает все более прочные позиции в диагностике туберкулеза и других заболеваний, отодвигая на задний план другие методы диагностики.

источник

Возбудителем туберкулеза является микобактерия под названием туберкулезная палочка или палочка Коха. Попадая в организм человека, она может длительное время себя никак не проявлять. Но со временем, как только возникнут благоприятные условия, бактерия может вызвать туберкулез легких или других органов.

Для успешной борьбы с этим заболеванием очень важно диагностировать его на ранних стадиях. Анализ крови на туберкулез методом ПЦР является самым эффективным и быстрым способом диагностики туберкулеза. На его проведение достаточно четыре часа. Он более удобен, чем другие методы, у него меньше противопоказаний и почти стопроцентная достоверность.

На сегодняшний день анализ ПЦР является одним из новейших методов диагностики различных заболеваний организма. Для выявления туберкулеза этот способ самый эффективный, по сравнению с другими способами, применяемыми до сих пор. Метод был открыт в 1983 году известным химиком К.Мюллисом, через десять лет получившим за него Нобелевскую премию.

В основе этого способа применяется полимеразная цепная реакция, позволяющая определить не только наличие возбудителя в крови, но и его вид. С этой целью при помощи ПЦР метода, выявляется часть ДНК возбудителя и проводится его идентификация. Даже если в крови находится несколько разных возбудителей, эта методика позволяет обнаружить их всех.

Анализ крови ПЦР на туберкулез назначают пациенту, когда есть подозрение на наличие туберкулезной палочки, но другими методами она не обнаруживается.

При желании каждый может сдать этот анализ самостоятельно, обратившись в клинику, где его проводят, например в ИНВИТРО. Это одна из крупнейших частных компаний, содержащих медицинские лаборатории во многих странах.

В настоящее время нет более точного анализа для выявления палочки Коха в организме пациента. Общий анализ крови эффективен, но позволяет получить положительный или отрицательный результат только спустя достаточно длительное время. Для этого делается посев исследуемого материала на питательную среду и лишь через несколько недель становится видно, идет ли размножение бактерии.

Метод ПЦР позволяет выявить ДНК бактерии за считанные часы, что является большим плюсом для диагностики. Кроме того, анализ позволяет точно идентифицировать бактерию, даже если ее в крови очень мало.

Данный метод исследования почти не имеет противопоказаний. Ввиду того, что используется кровь, состояние пациента не имеет значения. Наличие простудных заболеваний не влияет на результат анализа.

Не рекомендуется его проводить после прививки, а также после недавно проведенного лечения. Это объясняется тем, что организм еще не очистился, и остатки бактерий могут повлиять на результат.

Анализ крови ПЦР на туберкулез имеет ряд преимуществ перед другими методами исследования, такими как реакция Манту или рентген. Среди них можно выделить следующие качества:

1. Быстрота выполнения. По сравнению с другими анализами ПЦР делается в течение нескольких часов.
2. Для проведения процедуры можно использовать не только кровь, но и другие биологические выделения организма.
3. Процедура не имеет противопоказаний, ее можно проводить не только взрослым, но и детям. Также подходит беременным женщинам без вреда для их здоровья.
4. Метод позволяет выявить заражение крови бактериями на самых первых стадиях, когда еще нет внешних признаков заболевания.
5. Методика позволяет выявить возбудителя при самых малых количествах бактерий в материале.
6. Дает хороший эффект при исследовании больного, заразившегося повторно.
7. Анализ можно брать независимо от того, как себя чувствует пациент. Например, реакция Манту делается, если у больного нет простудных заболеваний и повышения температуры. В данном случае таких ограничений нет.

Как видно из предоставленного списка, этот метод диагностики гораздо предпочтительнее, чем другие. Он абсолютно безвреден для пациентов, страдающих аллергическими реакциями. Его можно успешно использовать взрослым и детям. Методика позволяет сэкономить время на диагностику и быстрее начать лечение.

Метод также удобен для людей из провинции, где нет соответствующих лабораторий. Им не приходится приезжать несколько раз в клинику, достаточно одного дня, чтобы получить результат анализов и назначение лечения от врача.

Кроме преимуществ у этого метода есть ряд недостатков, которые могут быть препятствием для проведения анализа ПЦР:

1. Относительная дороговизна процедуры. Для проведения такого анализа необходимо дорогостоящее оборудование и не каждая клиника может себе это позволить. Оно есть в крупных лабораториях частных компаний. Цены там, как правило, всегда высокие.
2. Анализ дает правильный результат лишь в том случае, если материал для исследования правильно подобран. К примеру, при туберкулезе мочеполовой системы, исследование крови наличие заболевания не покажет. В этом случае нужно собрать мочу или выделения из мочеполовых органов.
3. Метод не всегда дает точного результата у детей. Это объясняется влиянием прививок. Например, после прививки БЦЖ делать этот анализ не рекомендуется.
4. Есть вероятность получения ложноположительного или ложноотрицательного результата. Что это такое? Способ обладает очень высокой чувствительностью. При сборе материала должна соблюдаться повышенная стерильность. В случае если в материал попадет самое малое количество посторонних бактерий, анализ будет испорчен, результат исказится.

Несмотря на недостатки, метод достаточно широко используется. Например, в тех случаях, когда необходимо срочно определить заболевание у пациента. Его могут назначить беременным при подозрении на инфекцию, способную угрожать ребенку или матери. Иногда назначают детям перед принятием в детский сад. Но это по желанию родителей.

Перед взятием анализа пациенту необходимо провести подготовительные мероприятия. Они зависят от того, какой материал будет сдаваться:

1. Если необходимо сдать кровь, должна быть подготовлена стерильная пробирка. В нее добавляется антикоагулянт – специальный раствор, препятствующий свертыванию крови. В него помещается собранный материал и осторожно смешивается. Кровь собирают одноразовым шприцем из вены.
2. Процедура проводится утром натощак. Хранится кровь в холодильнике не более пяти часов. Если пренебречь этим правилом, результаты анализа могут быть неточными.
3. За неделю до сдачи биоматериала следует прекратить прием любых лекарств.
4. Нельзя сдавать кровь после приема алкогольных напитков.
5. При наличии хронических инфекционных или воспалительных заболеваний процедура переносится до тех пор, пока человек полностью не выздоровеет.

Обязательно во время процедуры необходимо соблюдать по возможности максимальную стерильность. Поэтому важно сдавать анализы только в проверенных клиниках под руководством опытного специалиста. Следует помнить, что минимальное попадание посторонних микроорганизмов может дать неправильный результат. Во избежание этого, доктор может назначить повторное исследование.

Чтобы сдать кровь на анализ, больной должен не принимать пищу более шести часов. Лучше всего проходить процедуру утром натощак. Кровь забирается из локтевой вены через одноразовую иглу сразу в стерильную пробирку. Туда же вводится антикоагулянт, чтобы кровь не свернулась. Смешивать содержимое пробирки следует осторожно, не допуская резких движений.

Если кровь была взята вне лаборатории, ее надо немедленно доставить лаборанту. Для проведения анализа на туберкулез она должна храниться не более пяти часов. По истечении этого времени результат может быть неточным. Взятие материала вне лаборатории допускается только в том случае, если пациент не может приехать в больницу по состоянию здоровья. Например, он лежачий, и нет возможности нанять соответствующий транспорт.

Результат ПЦР может быть либо положительным, либо отрицательным. Положительный означает присутствие бактерии в организме. Отрицательный свидетельствует о том, что она отсутствует. Хотя не всегда положительный результат говорит о туберкулезе. Он может быть ошибочным, поэтому для подтверждения диагноза требуется пройти дополнительные диагностические тесты.

Вся остальная информация сложна для восприятия больного, и ею занимается специалист. При положительном результате врач назначает необходимое лечение.

Цена процедуры может отличаться в зависимости от медицинского центра, где она проводится. Подробнее в нижерасположенной таблице.

Метод ПЦР для анализа на туберкулез сравнительно новый, и многие пациенты с ним еще не знакомы. В большинстве случаев больные предпочитают Манту и флюорографию. Но, как показывает практика, этот способ диагностики более эффективный и в конечном итоге полностью себя окупает.

Отсутствие противопоказаний и быстрота выполнения делает его привлекательным по сравнению с другими анализами. Медицина не стоит на месте и этот метод с каждым разом усовершенствуется и становится все более надежным.

источник

Расшифровка результатов анализа ПЦР на туберкулез.

Всем школьникам ежегодно делают реакцию Манту, при помощи которой выявляют заболевание туберкулёзом.

В наше время набирает обороты диагностика заболевания туберкулёзом посредством анализа ПЦР.

Сейчас этот метод считается самым точным и эффективным способом диагностики.

С каждым годом частота заболеваний этой тяжелой инфекцией становится всё больше.

Медики стараются найти более надёжные способы выявления инфицирования микобактериями на самых ранних стадиях их развития.

Болезнь, обнаруженная в самом начале развития, лечится намного легче, чем, когда она перешла в более активную фазу. Именно с этой целью сейчас и применяют анализ ПЦР.

ПЦР – полимеразно-цепная реакция. Прибегнув к её помощи можно всего лишь в течение нескольких часов выявить наличие палочки Коха, даже если она будет всего одна среди огромного количества других клеток.

• самое главное – стопроцентное обнаружение микобактерий, потому что в пробе, взятой на анализ определяется от 10 до 100 клеток;
• анализ очень быстрый – на его проведение нужно всего 4-4,5 часа;
• специфичность ДНК микобактерий очень высокая;
• выявление туберкулёза лёгких практически на начальной стадии, для других методов это можно сказать просто нереально;
• определяется только часть бактерии возбудителя заболевания, которая характерна только для этого вида микобактерий;
• для исследования подходят: кровь, кал, слюна, моча, мокрота, спинномозговая жидкость;
• для проведения такого метода исследований нет противопоказаний, его можно применять для обследования детей и беременных.

Для исследования на заболевание туберкулёзом чаще всего берут мокроту, которая выделяется во время кашля.

Взятую пробу помещают в специальный прибор — амплификатор, который удваивает цепочки ДНК.

Затем их исследуют на наличие ДНК микобактерий туберкулёзис, способствующих развитию туберкулёза.

На основании этих испытаний делают заключение: результат может быть положительным или отрицательным.

Современное медицинское оборудование способно провести не только полимеразно-цепную реакцию, а ещё и выдать результаты проведённого обследования, их расшифрует врач-фтизиатр.

Иногда результаты этого анализа бывают ложноположительными. Это может произойти только в случаях неправильной подготовки к забору, сдаче или транспортировке материалов для проведения анализа.

Именно по этой причине больным и докторам необходимо строго выполнять правила.

Результат расшифровки анализов бывает простым или сложным. Простой – определяется формулировкой «положительно» или «отрицательно».

Наличие отрицательного значения расшифровки говорит, что в образце, представленном для исследования, не выявлено следов ДНК микобактерий туберкулёза и пациент здоров.

В случаях, когда расшифровка имеет положительное значение производится сложная расшифровка этого теста.

Этот вид расшифровки помогает сделать наиболее точные выводы.

Пациенты не могут самостоятельно и правильно расшифровать полученные данные. Это сделает врач и всё подробно объяснит больному.

Благодаря этим показателям доктор определит местоположение очагов, стадии их развития и причины появления туберкулёзной инфекции.

На основании этих выводов выбираются методы и препараты для необходимого лечения.

• о результате говорит содержание относительных единиц. В случае, когда их менее 0,9 – результат отрицательный;
• когда содержание относительных единиц 0,9 — 1,1 – результат сомнительный;
• в случаях, когда присутствие относительных единиц превышает 1,1 — результат является положительным.

Сделать анализ ПЦР часто направляют больных, в случаях затруднительной постановки диагноза. Обычно это тест проводят комплексно вместе с другими исследованиями.

Это делается в случаях подозрения первичного инфицирования, а другие способы не позволяют выявить заболевание.

Или же ПЦР-диагностику проводят в случаях, если больной самостоятельно не может прибыть в лабораторию, тогда материалы для проведения анализа доставляют его родственники.

Это может быть моча, мокрота, слюна или посев. Посевы на дому могут сделать только медицинские работники, имеющие сертификат на выполнение таких действий.

Именно ПЦР поможет выявить заболевания туберкулёзом у детей. Это исследование совершенно безвредно и имеет более высокую точность, в сравнении с пробой Манту.

Также проведение этого анализа показано и беременным женщинам, которым нельзя делать флюорографию.

Используют ПЦР-анализ и пред проведением операций, потому что такой способ более быстрый и точный.

Если возникли сомнения в результатах рентгена лёгких и пробы Манту, такую диагностику можно пройти самостоятельно.

При заболевании туберкулёзом проводится масса различных анализов, которые назначает врач, чтобы как можно точнее поставить диагноз. Часто приходится проходить целый комплекс анализов.

Иногда в расшифровке ИФА могут быть ложноположительные результаты, из-за содержания в крови антител после приёма курса лечения.

Также недостоверными могут оказаться и другие исследования. На данный момент ПЦР — самый точный из способов диагностики.

Направить на ПЦР-диагностику сможет любой из перечисленных специалистов, а расшифрует результаты и сделает окончательные выводы — врач-фтизиатр.

Кроме этого фтизиатр изберёт нужный курс лечения и где именно его потребуется пройти: в условиях специализированного стационара или же на дому.

Вместе с этим даст пациенту нужные рекомендации по борьбе с этим заболеванием.

Хоть этот способ и универсален и высокоточен, но его использование повсеместно просто невозможно.

Потому что для его проведения нужно очень дорогое оборудование, и не во всех государственных поликлиниках и больницах есть средства, для его приобретения.

А сдать такой анализ в платных клиниках есть возможность далеко не у всех пациентов.

• этот анализ имеет высокую стоимость;
• быстрые мутации и изменения микобактерий сводят эффективность ПЦР-анализа к нулю, потому что происходит изменение строения цепочек ДНК бактерий;
• необходимо правильно выбрать материал, который будет подвержен исследованию, в противном случае оно не будет эффективно. Если при туберкулёзе лёгких взять на исследование мочу, то ПЦР-тест не выявит присутствия микобактерий.

Исследования ПЦР – новые методики, которые уже очень хорошо зарекомендовали себя. Самым большим плюсом этих исследований стала универсальность.

Для проведения этого анализа можно использовать любую среду: спинномозговую жидкость, кровь, слюну, мочу, мокроту и т.д.

При современной оснащённости лабораторий выявить микобактерии можно разными способами на ранних стадиях развития и у взрослых, и у детей.

Но несмотря на все профилактические меры и рекомендации, которые проводятся нашими медиками, заболеваемость растёт год от года.

Расшифровывая результаты исследований, врачи делают заключение, что каждый раз патология приобретает всё более тяжелые и осложнённые формы.

За всё происходящее вина лежит, в первую очередь на самих больных. Сделайте регулярными профилактические посещения врача.

Сегодняшние методы диагностики различных заболеваний в значительной степени облегчают лечение и снижают риск осложнений.

источник

Анализ ПЦР на туберкулёз позволяет выявить заболевание на любых стадиях развития при минимальном количестве микобактерий или даже при наличии их фрагментов в организме человека по ДНК возбудителя.

ПЦР появилась сравнительно недавно. В 1983 году метод был создан американским микробиологом Кэри Мюллисом, за что он получил Нобелевскую премию. В основе ПЦР лежит многократное удвоение определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro). В результате ДНК возбудителя модно визуализировать даже при его наличии в минимальных количествах (следы присутствия). Это золотой стандарт специфичности.

ПЦР (полимерный цепной процесс) на туберкулёз – диагностическая процедура для выявления инфекции при помощи генной инженерии. Такой метод исследования применяется в микробиологических, вирусологических и иммунологических медицинских лабораториях в сомнительных и практически бесперспективных в смысле диагностики случаях.

Для анализа требуется 3 составляющих:

• Образец ДНК.
• Нуклеотидные соединения.
• Фермент полимераза.

Анализ сдаётся в лаборатории по назначению лечащего доктора.

В начале проведения обследования из биожидкости извлекают сегмент ДНК микроорганизма.

ПЦР определяет вид возбудителя, спустя 2–3 часа после проведения теста. При этом его не нужно выделять из биологического материала или растить продолжительный период в лабораторных условиях. Главное, что образец содержал частичку инфицированной ДНК. Во время анализа на туберкулёз в пробирке искусственно создаётся синтез рибонуклеиновых кислот инфекции. За счёт быстрой реакции спустя пару часов можно получить достоверный результат.

ПЦР на туберкулёз — это простой метод диагностики, позволяющий получить ответ за короткие сроки. Для определения tbc берётся биологический материал заражённого (кровь, мокрота, биожидкость).

Диагностика проходит в три основных этапа:

• После взятия образца в лабораторных условиях разрушается первичная форма ДНК. При температуре 980 градусов через 1,5 минуты разъединяются 2 цепочки.
• На следующем этапе делается отжиг, температура воздуха понижается на пару делений, ДНК с праймером соединяется.
• Последняя стадия исследования называется элонгация. На ней происходит биосинтез молекул.

Чтобы выявить нужное ДНК с частицей инфекции диагностика может проводиться 20–25 раз.

Анализ ПЦР на туберкулёз делается всегда, когда в этом есть необходимость, он входит в стандарт качества обследования пациента на туберкулез. Для его проведения нужно только направление от лечащего врача. Чаще всего, в поликлиниках проводят другие способы диагностирования для определения туберкулёза.

• Анкетирование и сбор анамнеза.
• Медицинский осмотр.
• Туберкулиновая проба Манту.
• Рентген или флюорография.
• УЗИ.
• Микроскопическая диагностика образца мокроты.

Несмотря на большое количество диагностических инструментов, количество заражённых с каждым годом растёт. Кроме того, патология приобрела некоторые особенности: остроту процесса, увеличение летальных исходов, иммунитет возбудителя к препаратам.

Врачи не рекомендуют отказываться от ежегодного осмотра и вакцинации, так как это повышает риск стать заражённым. Анализ ПЦР имеет множество преимуществ, поэтому считается наиболее точным и информативным из всех инструментальных методов выявления tbc и широко применяется в современных клиниках.

Полимерный цепной процесс часто используется в комплексе с дополнительными методами для выявления туберкулёзной инфекции. Ценность метода заключается в следующем:

• Короткое время проведения. Уже спустя 2–3 часа после сдачи крови можно выявить наличие инфекции в биологическом материале. Это незаменимо в тех случаях, когда стоит вопрос жизни и смерти, и нужно выявить точный диагноз для оперативного вмешательства.
• Некоторые методы диагностики имеют свои противопоказания и не всегда отображают полную картину диагноза. При помощи ПЦР возбудитель выявляется сразу, и проводить процедуру можно людям всех возрастов.
• В качестве образца можно брать любой биологический материал заражённого. Для определения лёгочных форм болезни берётся моча или слюна. Образец крови помогает выявить все формы патологии. Спинномозговая жидкость нужна для определения туберкулёзного менингита.
• Безопасность метода. Для исследования требует только биологический материал пациента. Поэтому это полностью безопасная и безвредная процедура как для детей, так и взрослых, в отличие от флюорографии, которая делается с 18 лет, и Манту, вызывающей негативные реакции организма.
• Высокочувствительный тест. Он даёт возможность выявить патологию даже на ранних этапах развития, когда вирус не поразил ещё все клетки организма.
• Эффективный метод диагностики рецидива патологии.
• Инновационный способ, выявляющий палочку Коха с первых дней её развития. Это позволяет максимально быстро начать правильное лечение и спасти человека от гибели. На ранних этапах развития патологию удаётся вылечить полностью без осложнений.

Такой метод диагностики имеет множество преимуществ и активно используется в разных медицинских учреждениях. Однако, несмотря на свои плюсы, у ПЦР есть и свои отрицательные черты.

К минусам полимерного цепного процесса относят:

• Высокую стоимость процедуры.
• Способ не подходит для тех, кто уже проходил курс лечения tbc, так как умершие инфекционные клетки могут дать ложноположительный результат.
• При мутации клеток ДНК может быть ложный результат.
• Специалист должен правильно взять нужный биологический материал, чтобы определить тип инфекции и место ее локализации.
• Не всегда разрешён пациентам с поражением лёгких.

Чаще всего такой анализ назначается:

• • Если итоги проведения Манту дали сомнительные данные, сдаётся кровь из вены на туберкулёз.
  • Пациент имел контакт с инфицированным человеком, но медицинский осмотр не помог определить правильный диагноз.

• При экстренной операции, при которой нужно в минимальные сроки узнать заражён ли пациент.
• Во время беременности, когда другие методы диагностики не могут дать точный результат без вреда для плода.

Изучив все достоинства и недостатки диагностики tbc, можно сделать вывод, что лучше всего для постановки точного диагноза использовать сразу несколько методов диагностики. Это поможет удостовериться, есть ли инфекция в организме и на каком этапе прогрессирования она находится. Правильно определив диагноз, удастся начать быстрое консервативное лечение и спасти человека от смерти.

источник

На данный момент существует достаточное количество лабораторных способов определения бактерий Коха. У каждого имеются определенные преимущества и недочеты, например, требуется наличие определенной концентрации клеток в пробе или достаточное время для культивирования.

На данный момент более приемлемым анализом считается ПЦР на туберкулез, который характеризуется высокой результативностью (100%) даже при наличии небольшого количества фрагментов генетического аппарата микобактерий Mycobacterium tuberculosis. Полимеразная цепная реакция дает возможность выявлять ограниченные и диссеминированные формы патогенеза, что важно при обследовании детей, когда микробиологическая диагностика не дала результата.

Туберкулез – инфекционное заболевание, вызываемое микобактерией – палочка Коха. Чаще поражаются легкие, но очаги могут быть и в других тканях. Передается респираторно, а также со слюной, кровью, при совместном использовании бытовых приборов и тесном контакте в быту.

Заболевание протекает в двух формах:

1. Закрытая стадия. Больной при контакте не опасен для окружающих. В мокроте анализы не выявляются признаки возбудителей, ложной будет и ПЦР диагностика на туберкулез. При отсутствии лечения патогенез усугубляется.
2. Открытая стадия. Палочка Коха присутствует в биологических жидкостях человека, легко диагностируется лабораторными методиками. В таком состоянии человек является опасным для окружающих.

Обратите внимание. Поскольку начало туберкулеза легких протекает латентно, то проводится скрининг. Взрослые люди должны раз в год или два (зависит от региона проживания) проходить флюорографию, которая показывает наличие инфильтрата в тканях. Это дешёвый и быстрый способ диагностики.

На данный момент для выявления опасных микобактерий проводят ряд анализов:

• методы рентгенографии;
• КТ или МРТ;
• туберкулиновые пробы (реакция Манту).

Однако именно анализ крови на ПЦР на туберкулез дает наиболее достоверный результат, причем определяет наличие инфекции вне зависимости от локации очага.

Врач фтизиатр, пульмонолог или терапевт может направить больного на прохождение диагностики при наличии подозрений.

Кроме этого, тест ПЦР на туберкулез требуется, если:

• возможны внелегочные очаги;
• наличие признаков бактериемии на фоне туберкулезной инфекции (субфебрилитет, потливость и прочие);
• при регулярном контакте с инфицированным человеком;
• при ВИЧ-инфекции;
• ПЦР диагностика туберкулеза у детей показана при ненормальной реакции на пробу Манту;
• сильные увеличения лимфоузлов при заболевании нижних дыхательных путей (прикорневые воспаления легких, бронхиты);
• кровохарканье при этом человек слаб и быстро утомляется;
• длительный кашель после острых бронхитов и пневмоний.

Полимеразная цепная реакция основана на узнавании целых цепочек бактериальной ДНК и РНК или их фрагментов, находящихся в крови пациента или других биологических жидкостях:

• мокрота;
• легочные и бронхиальные смывы;
• моча.

Обратите внимание. Высокая результативность данной методики основана на принципе работы фермента полимеразы (основная функция сборка нуклеиновых молекул). Она может узнавать даже самые мелкие фрагменты генного материала возбудителя. Поэтому результат будет положительный или отрицательный.

Преимущества анализа ПЦР на микобактерии туберкулеза:

• выявление специфических последовательностей ДНК микобактерий;
• точность – 98%;
• чувствительность анализа не менее 100 ДНК-копий в 5 мкл пробе, прошедшей особую обработку;
• срочный анализ дает возможность получить результат в течение 4 ч., после забора крови.

Использование полимеразной цепной реакции существенно облегчило определение многих заболеваний (не только туберкулеза). Причем метод позволяет регистрировать наличие патогена на самых начальных стадиях патогенеза, когда нет еще никаких признаков. Гарантированность результата обеспечивается благодаря тому, что полимераза среди тысяч клеток может находить по определенному маркеру комплементарные (подходящие) только ей последовательности бактериальных генов или даже их фрагменты.

Помимо этого, ПЦР при туберкулезе помогает выяснить уровень резистентности к назначенной терапии и скорректировать лечение, что в разы повышает его эффективность. Длительность такого анализа три, максимум четыре дня, но при этом врач получает данные, существенно меняющие качество противотуберкулезной терапии. Более подробно обо всех нюансах полимеразной цепной реакции изложено на видео в этой статье.

Инструкция проведения анализа на данный момент не представляет особой сложности: сначала проводится отбор исследуемого материала, после чего выделяется ДНК и проводится его классификация по типу патогенной бактерии. Основные моменты указаны в таблице.

Таблица. Как проводится анализ ПЦР на туберкулез:

Полученный материал должен быть на несколько минут нагрет до высоких температур (97º С). Такая мера нужна для расщепления парных молекул нуклеиновых кислот на отдельные цепи (разрыв спирали). Это нужно для того, чтобы полимераза начала работу. При понижении температуры особая молекулярная структура праймер, ассоциируется с одной из свободных цепей ДНК, что позволит в дальнейшем инициировать сборку новой спирали. Если полимераза нашла нужные бактериальные последовательности и начала сборку, то результат положительный, в противном случае отрицательный.