Положительная реакция пцр на туберкулез

Расшифровка результатов анализа ПЦР на туберкулез.

Всем школьникам ежегодно делают реакцию Манту, при помощи которой выявляют заболевание туберкулёзом.

В наше время набирает обороты диагностика заболевания туберкулёзом посредством анализа ПЦР.

Сейчас этот метод считается самым точным и эффективным способом диагностики.

С каждым годом частота заболеваний этой тяжелой инфекцией становится всё больше.

Медики стараются найти более надёжные способы выявления инфицирования микобактериями на самых ранних стадиях их развития.

Болезнь, обнаруженная в самом начале развития, лечится намного легче, чем, когда она перешла в более активную фазу. Именно с этой целью сейчас и применяют анализ ПЦР.

ПЦР – полимеразно-цепная реакция. Прибегнув к её помощи можно всего лишь в течение нескольких часов выявить наличие палочки Коха, даже если она будет всего одна среди огромного количества других клеток.

• самое главное – стопроцентное обнаружение микобактерий, потому что в пробе, взятой на анализ определяется от 10 до 100 клеток;
• анализ очень быстрый – на его проведение нужно всего 4-4,5 часа;
• специфичность ДНК микобактерий очень высокая;
• выявление туберкулёза лёгких практически на начальной стадии, для других методов это можно сказать просто нереально;
• определяется только часть бактерии возбудителя заболевания, которая характерна только для этого вида микобактерий;
• для исследования подходят: кровь, кал, слюна, моча, мокрота, спинномозговая жидкость;
• для проведения такого метода исследований нет противопоказаний, его можно применять для обследования детей и беременных.

Для исследования на заболевание туберкулёзом чаще всего берут мокроту, которая выделяется во время кашля.

Взятую пробу помещают в специальный прибор — амплификатор, который удваивает цепочки ДНК.

Затем их исследуют на наличие ДНК микобактерий туберкулёзис, способствующих развитию туберкулёза.

На основании этих испытаний делают заключение: результат может быть положительным или отрицательным.

Современное медицинское оборудование способно провести не только полимеразно-цепную реакцию, а ещё и выдать результаты проведённого обследования, их расшифрует врач-фтизиатр.

Иногда результаты этого анализа бывают ложноположительными. Это может произойти только в случаях неправильной подготовки к забору, сдаче или транспортировке материалов для проведения анализа.

Именно по этой причине больным и докторам необходимо строго выполнять правила.

Результат расшифровки анализов бывает простым или сложным. Простой – определяется формулировкой «положительно» или «отрицательно».

Наличие отрицательного значения расшифровки говорит, что в образце, представленном для исследования, не выявлено следов ДНК микобактерий туберкулёза и пациент здоров.

В случаях, когда расшифровка имеет положительное значение производится сложная расшифровка этого теста.

Этот вид расшифровки помогает сделать наиболее точные выводы.

Пациенты не могут самостоятельно и правильно расшифровать полученные данные. Это сделает врач и всё подробно объяснит больному.

Благодаря этим показателям доктор определит местоположение очагов, стадии их развития и причины появления туберкулёзной инфекции.

На основании этих выводов выбираются методы и препараты для необходимого лечения.

• о результате говорит содержание относительных единиц. В случае, когда их менее 0,9 – результат отрицательный;
• когда содержание относительных единиц 0,9 — 1,1 – результат сомнительный;
• в случаях, когда присутствие относительных единиц превышает 1,1 — результат является положительным.

Сделать анализ ПЦР часто направляют больных, в случаях затруднительной постановки диагноза. Обычно это тест проводят комплексно вместе с другими исследованиями.

Это делается в случаях подозрения первичного инфицирования, а другие способы не позволяют выявить заболевание.

Или же ПЦР-диагностику проводят в случаях, если больной самостоятельно не может прибыть в лабораторию, тогда материалы для проведения анализа доставляют его родственники.

Это может быть моча, мокрота, слюна или посев. Посевы на дому могут сделать только медицинские работники, имеющие сертификат на выполнение таких действий.

Именно ПЦР поможет выявить заболевания туберкулёзом у детей. Это исследование совершенно безвредно и имеет более высокую точность, в сравнении с пробой Манту.

Также проведение этого анализа показано и беременным женщинам, которым нельзя делать флюорографию.

Используют ПЦР-анализ и пред проведением операций, потому что такой способ более быстрый и точный.

Если возникли сомнения в результатах рентгена лёгких и пробы Манту, такую диагностику можно пройти самостоятельно.

При заболевании туберкулёзом проводится масса различных анализов, которые назначает врач, чтобы как можно точнее поставить диагноз. Часто приходится проходить целый комплекс анализов.

Иногда в расшифровке ИФА могут быть ложноположительные результаты, из-за содержания в крови антител после приёма курса лечения.

Также недостоверными могут оказаться и другие исследования. На данный момент ПЦР — самый точный из способов диагностики.

Направить на ПЦР-диагностику сможет любой из перечисленных специалистов, а расшифрует результаты и сделает окончательные выводы — врач-фтизиатр.

Кроме этого фтизиатр изберёт нужный курс лечения и где именно его потребуется пройти: в условиях специализированного стационара или же на дому.

Вместе с этим даст пациенту нужные рекомендации по борьбе с этим заболеванием.

Хоть этот способ и универсален и высокоточен, но его использование повсеместно просто невозможно.

Потому что для его проведения нужно очень дорогое оборудование, и не во всех государственных поликлиниках и больницах есть средства, для его приобретения.

А сдать такой анализ в платных клиниках есть возможность далеко не у всех пациентов.

• этот анализ имеет высокую стоимость;
• быстрые мутации и изменения микобактерий сводят эффективность ПЦР-анализа к нулю, потому что происходит изменение строения цепочек ДНК бактерий;
• необходимо правильно выбрать материал, который будет подвержен исследованию, в противном случае оно не будет эффективно. Если при туберкулёзе лёгких взять на исследование мочу, то ПЦР-тест не выявит присутствия микобактерий.

Исследования ПЦР – новые методики, которые уже очень хорошо зарекомендовали себя. Самым большим плюсом этих исследований стала универсальность.

Для проведения этого анализа можно использовать любую среду: спинномозговую жидкость, кровь, слюну, мочу, мокроту и т.д.

При современной оснащённости лабораторий выявить микобактерии можно разными способами на ранних стадиях развития и у взрослых, и у детей.

Но несмотря на все профилактические меры и рекомендации, которые проводятся нашими медиками, заболеваемость растёт год от года.

Расшифровывая результаты исследований, врачи делают заключение, что каждый раз патология приобретает всё более тяжелые и осложнённые формы.

За всё происходящее вина лежит, в первую очередь на самих больных. Сделайте регулярными профилактические посещения врача.

Сегодняшние методы диагностики различных заболеваний в значительной степени облегчают лечение и снижают риск осложнений.

источник

Полимеразная цепная реакция (далее ПЦР) — это высокоточный метод молекулярно-генетического исследования материла, который позволяет выявить у человека различные инфекционные заболевания и установить генотип возбудителя.

ПЦР для выявления различных заболеваний стала применяться в самом конце прошлого века. Первооткрывателем этого метода исследования является американский биохимик Кэри Муллис. Свое открытие он сделал в 1983 году. Но еще несколько лет понадобилось, чтобы доработать метод.

С помощью ПЦР-диагностики можно обнаружить фрагменты чужеродного ДНК в любой жидкой среде организма. На анализ могут быть взяты такие жидкости:

• Кровь.
• Слюна.
• Мокрота.
• Выделения из половых органов.
• Смывная жидкость бронхов.
• Желудочный сок.

Лечащий врач сам определяет, какую биологическую жидкость лучше взять на анализ при конкретном заболевании.

ПЦР-диагностика позволяет не только обнаружить микрофрагменты чужеродной ДНК, но и определить к какому конкретному виду она относится. То есть с помощью ПЦР можно не только точно установить возбудителя заболевания, но и выяснить к какому виду он принадлежит.

Процесс анализа ПЦР — очень сложный. Он состоит из нескольких этапов:

1. Сначала нужно обнаружить фрагменты вредоносной ДНК в предоставленном образце.
2. Копирование фрагмента ДНК. Маленького участка ДНК для анализа недостаточно, поэтому его копируют. Нуклеиновая кислота может копироваться в пробирке с помощью фермента полимеразы (вне живого организма). В пробирке образуется множество клонов, то есть происходит цепная реакция. Весь процесс происходит в три этапа под воздействием различных температур.
3. Когда генетического материала становится достаточно для исследования, тогда возбудитель определяется обычными методами.

Метод ПЦР очень точен и может выявить наличие любого возбудителя по небольшому фрагменту ДНК или РНК.

ПЦР-анализ на туберкулез является самым информативным методом диагностирования этого заболевания. Относительно туберкулеза этот метод позволяет не только установить наличие микобактерий в организме, но и определить к какому виду они принадлежат.

Результат ПЦР диагностики может быть простой и расширенный. В простом результате указывается только наличие/отсутствие микобактерии. Расширенный результат дает представление о дополнительных параметрах протекания заболевания. Правильно понять, что написано в результате анализа ПЦР может только фтизиатр.

ПЦР-диагностика туберкулеза не проводится всем без исключения. Это объясняется дороговизной реактивов и недоступностью проведения исследования в некоторых отдалённых районах (в таких местах пользуются другими методами диагностики).

Показаниями для проведения ПЦР-исследования являются:

• Длительный контакт с больным туберкулезом.
• Беременность. ПЦР крови на туберкулез является самым быстрым и безопасным методом для беременной женщины.
• Экстренная ситуация. Например, необходимость срочного оперативного вмешательства, при котором нужно точно установить наличие/отсутствие туберкулеза в организме.
• Аллергическая реакция на туберкулиновые пробы.
• ВИЧ-инфекция.
• Невозможность диагностирования заболевания другими способами, при наличии явных признаков туберкулеза.
• Неоднозначные симптомы, которые не позволяют создать четкую клиническую картину заболевания (болезни верхних дыхательных путей, сопровождающиеся большим количеством мокроты, кровохарканьем и пр.).

Метод ПЦР, при всей своей сложности и дороговизне, проводится и расшифровывается в течение нескольких часов. Что делает этот метод золотым стандартом при диагностике туберкулезной инфекции.

Забор материала — это первый этап при выполнении ПЦР-исследования. Для того, чтобы выполнить качественный анализ, нужно соблюдать определенные правила по сбору материла:

• Для ПЦР мокроты на туберкулез нужно тщательно провести туалет полости рта. Делать это нужно вечером и утром перед анализом. Все это время не есть. Вечером выпить муколитическое средство для лучшего отхождения мокроты.
• Перед сдачей крови на ПЦР нужно не употреблять пищу в течение 8 часов. Лучше всего производить забор крови утором натощак. Курить перед забором крови также нельзя. Кровь берется из вены на локтевом сгибе руки в стерильную пробирку. В эту же емкость добавляется антикоагулянт, чтобы кровь оставалась жидкой. Смешивать антикоагулянт с кровью нужно очень аккуратно, не делая резких движений. Если кровь была взята не в лабораторных условиях, то она должна быть предоставлена лаборанту до истечения пятичасового срока. Иначе результат может быть не точным.
• Моча собирается в стерильную емкость утром, до приема пищи. Перед сбором мочи необходим тщательный туалет промежности.
• Остальные виды жидкостей (смывы с бронхов, спинномозговая жидкость) может собрать только специалист в условиях стационара.
• Перед забором жидкостей на ПЦР-исследование запрещено принимать некоторые препараты (например, прием некоторых антибиотиков нужно прекратить за две недели до забора материала).
• Требования к лаборатории, в которой проводится забор анализов на ПЦР очень строгие. Лаборатория должна быть стерильна, чтобы не произошло перекрестное загрязнение материала. В этом случае результаты могут быть ложноположительными.

ПЦР-тест на туберкулез — высокоточный информативный анализ. И требования к его проведению крайне строгие. Чтобы анализ получился, нужно соблюдать регламент.

Для работы в ПЦР-лаборатории приглашаются специально обученные врачи: бактериологи, вирусологи, микробиологи. Все они прошли дополнительное обучение для работы на сложном оборудовании.

Лаборатория должна иметь лицензию на выполнение работ связанных с бактериологически-опасными вирусами и бактериями.

В самой лаборатории должны быть выделены такие рабочие зоны:

• Зона приемки и сортировки проб.
• Зона подготовки проб. В этом помещении выделяются нуклеиновые кислоты из образцов материала.
• Зона проведения реакционных проб.
• Зона для учета результатов и расшифровки анализов.

Все помещения располагают последовательно. Допуск в эти зоны разрешен только работающим там сотрудникам, которые при входе соблюдают правила личной защиты от бактерий и вирусов.

Лучше, если есть возможность расположить лабораторию в отдельно стоящем здании с собственной системой вентиляции.

В лаборатории соблюдаются стерильные условия работы, чтобы избежать перекрестного загрязнения проб. Даже если один фрагмент чужеродной ДНК попадет в исследуемый материал, ПЦР его размножит, и анализ получится ложноположительным.

В каждой зоне лаборатории имеется свой набор оборудования и посуды для проведения исследований. Также имеются свои холодильники, которые не могут быть использованы в других целях, кроме хранения материала конкретной зоны исследований.

Использованные расходные материалы и остатки биологического материала уничтожаются специальными способами, в соответствии с инструкциями.

ПЦР-тест на туберкулез имеет множество плюсов, которые делают этот метод диагностики все более востребованным:

• Срок проведения. Несмотря на сложность проведения анализа, он готовится намного быстрее других лабораторных методов диагностики туберкулеза (около пяти часов). Это свойство анализа ПЦР становится особенно важным, когда анализ необходимо провести экстренно.
• Анализ ПЦР абсолютно безопасен и может проводиться беременным женщинам и детям.
• ПЦР-исследование можно сделать, когда по каким-то причинам нельзя выполнить другие методы диагностики.
• С помощью ПЦР-диагностики можно провести исследование любой биологической жидкости на выбор. В некоторых случаях это имеет большое значение.
• Позволяет обнаружить возбудителя на любой фазе заболевания. Даже после проведенного лечения, сохранившиеся остатки ДНК мертвых микобактерий будут обнаружены.
• Высочайшая чувствительность этого метода позволяет обнаруживать в биологическом материале даже единичные фрагменты ДНК микроорганизмов.
• Метод ПЦР позволяет не только обнаружить присутствие заболевания, но и может определить генотип возбудителя, отличив его от похожих микроорганизмов.
• ПЦР-исследование очень эффективно при рецидивирующем течении заболевания.
• Благодаря высочайшей чувствительности, анализ ПЦР может распознать микобактерии в организме человека, когда он только недавно инфицировался туберкулезом, задолго до появления клинических симптомов.

Казалось бы, метод ПЦР-диагностики содержит в себе только плюсы, но это не так.

Минусы этого метода исследования тоже существенны. При выборе метода исследования туберкулеза это также стоит учитывать:

• Это дорогостоящий метод исследования. Для проведения ПЦР-диагностики нужна специально-оборудованная лаборатория. Оборудование для таких исследований стоит очень дорого, и не во всякой лаборатории оно имеется. В крайнем случае, можно обратиться в платную лабораторию.
• Сразу же после проведенного лечения метод ПЦР применять не рекомендуется. В крови пациента некоторое время сохраняется небольшое количество живых и мертвых микобактерий. Если провести анализ в этот период, он покажет ложноположительный результат.
• При мутациях микобактерий, анализ будет недостоверным, так как нормальная ДНК не сможет синтезироваться.
• Для ПЦР-исследования имеет значение правильный выбор биологической жидкости на анализ.
• Сверхчувствительность. Это тот случай, когда достоинство метода становится его недостатком. Если при проведении анализа в биологический материал каким-то образом попадет даже единичный фрагмент чужеродного ДНК, то ПЦР его размножит, и будет получен ложный результат.

ПЦР-лаборатория имеется только в крупных противотуберкулезных диспансерах и диагностических центрах.

Объясняется это высокой стоимостью оборудования и высокими требованиями к содержанию лаборатории (реактивы, обработка).

Медицинские чиновники не сильно переживают из-за отсутствия ПЦР-лаборатории в каком-то конкретном населенном пункте, поскольку анализы на туберкулёз можно провести другими методами (культивирование микобактерий, микроскопическое исследование).

Если в населённом пункте нет бесплатной ПЦР-лаборатории, пациент по желанию может обратиться в платное учреждение.

В последнее время ПЦР-диагностика занимает все более прочные позиции в диагностике туберкулеза и других заболеваний, отодвигая на задний план другие методы диагностики.

источник

Инновационный метод выявления микроорганизмов, в конце прошлого столетия изобретенный ученым Кэри Муллисом – анализ ПЦР. Он получил за свои труды Нобелевскую премию. Полностью этот процесс имеет название полимеразой цепной реакции. Он заключается в восстановлении типа микроорганизма в предоставленном биоматериале по коротким фрагментам ДНК. Это позволяет выявить инфицирование на ранней стадии и сразу начать лечение, не доводя до появления серьезных симптомов и осложнений.

Диагностика методом ПЦР заключается в получении сегментов патогенной ДНК из биологического материала и выстраивание их в правильную цепочку. Это позволяет идентифицировать микроорганизм, которому принадлежат клетки.

Процедура проводится в три этапа:

1. Сбор биологического материала.
2. Выявление и выстраивание ДНК.
3. Распознавание инфекции.

Для этого исследования требуется специальное медицинское оборудование – амплификатор. Он оснащен камерой, где исследуемый материал взаимодействует с высокой температурой и химическими ферментами. На выходе лаборант имеет длинную цепочку ДНК возбудителя болезни, если таковой имеется в организме человека.

Анализ ПЦР – это сложный генно-инженерный процесс, требующий аккуратности и серьезного отношения, как от лаборантов, так и от пациентов. Большую роль в корректности результатов анализа играет подготовка к процедуре, то есть правильный сбор материала.

Основными источниками для получения информации о болезни являются:

Могут использоваться и другие варианты, жидкости при необходимости берутся на анализ из разных органов.

Для пациента предусмотрены определенные правила, которые нужно выполнять перед процедурой. Если предстоит анализ крови, то запрещается за 8 часов до сбора:

• употреблять пищу;
• курить;
• пить алкогольные напитки;
• принимать внутрь лекарственные средства.

Вечером перед сбором мокроты выпивается препарат для ее разжижения и облегчения отхаркивания. Утром собрать материал после тщательных гигиенических процедур полости рта.

Моча собирается в стерильную баночку утром натощак, после подмывания, до приема каких-либо медикаментов.

Если человек принимает антибиотики, то проведение анализа полимеразной цепной реакции следует отложить, иначе результат ПЦР не является достоверным. Сдавать мокроту или кровь следует спустя две недели после окончания курса лечения.

Если описать кратко, то процесс заключается в выделении части ДНК. Применение современных методов генной инженерии позволяет определить вид микроорганизма. Причем материала для анализа нужно небольшое количество.

Технически это очень сложная процедура, но она занимает меньше времени, чем классические бактериологические исследования. Возбудителей не нужно выделять из биоматериала, нет нужды растить их в течение нескольких недель. В день сдачи пациент уже может узнать результат своего анализа.

Весь процесс ПЦР протекает поэтапно:

1. Ведется работа с первичной формой ДНК, которая при высокой температуре, близкой к 100 градусам, делится на две цепочки.
2. Температура понижается, нити соединяются с фрагментами нуклеиновой кислоты – праймером.
3. Происходит элонгация – синтез молекулярной структуры.

Весь сеанс состоит примерно из тридцати таких процедур, повторяющихся циклом как цепная реакция. Это необходимо для создания того количества клеток, при котором полученные бактерии станут распознаваемы.

Описание результата ПЦР (полимеразной цепной реакции) дает фтизиатр, она бывает простой или развернутой. В первом случае описание будет содержать только информацию о наличии или отсутствии палочки Коха. Если расшифровка подробная, из нее можно узнать степень распространения болезни, ее очаг. По этим критериям можно определить наиболее подходящее лечение туберкулеза в каждом случае.

Анализ полимеразой цепной реакции не различает живых и мертвых возбудителей, а говорит только об их наличии. Поэтому имеет смысл сдавать повторный тест на туберкулез только через 3-4 недели после прохождения назначенной врачом терапии.

Если результат положительный, на заключении ставится надпись «Mycobacterium tuberculosis». При отрицательном результате, рядом с биологическим названием бактерии есть пометка «не обнаружены». Анализы могут оказаться ложноположительными. Такое происходит редко – при нарушении техники выполнения исследований ПЦР или при наличии нежизнеспособных микроорганизмов. Окончательный вывод о заболевании может сделать только врач-фтизиатр.

ПЦР-диагностика туберкулеза завоевала популярность по многим причинам. Она имеет массу достоинств, среди которых:

1. Точность исследования. При проведении анализа с соблюдением технологии удается выявить бактерии, даже если они присутствуют в малом количестве.
2. Быстрый результат. Весь процесс от сбора материала до готового заключения занимает около 5 часов. Если сравнить с посевом, его приходится ждать до нескольких недель.
3. Полная безопасность для человека, в отличие от флюорографии с ее облучением.
4. Используется любой жидкий биоматериал. Для осуществления ПЦР при туберкулезе легких наиболее точную информацию дает мокрота, при туберкулезном менингите берется образец из спинного мозга. Анализ крови помогает выявить местные очаги инфекции.
5. Проверяется чувствительность бактерий к антибиотикам. Это позволяет назначить правильное лечение.
6. Ранняя диагностика. Узнать о наличии заболевания можно до появления ее симптомов.

Кроме положительных моментов есть и недостатки. Главный из них – это цена. Анализ ПЦР не из дешевых, что связано с использованием дорогого оборудования. Еще один минус – необходимость выжидать время для проведения повторного теста после курса лечения от туберкулеза. Иногда результат проверки получается ложноположительным. Такое бывает из-за мутации бактерий.

ПЦР на туберкулез легких не имеет противопоказаний и абсолютно безопасен. Поэтому есть определенные ситуации и заболевания, когда это единственная возможность исследования.

• беременность;
• контакт с туберкулезным больным;
• трудности в определении диагноза при заболевании легких;
• обследование перед операцией;
• аллергическая реакция;
• ВИЧ-инфекция;
• малолетний возраст.

Воспользоваться методом ПЦР можно по направлению, которое выдается в фтизиатрии, а также педиатром, терапевтом или пульмонологом.

Другие виды обследования не изжили себя, а продолжают использоваться. Их применяют в тех случаях, когда нет возможности выполнить ПЦР на туберкулез. К тому же современный метод неидеален, иногда его показатели подвергаются сомнению и требуют перепроверки.

Определить наличие туберкулеза у человека помогают следующие способы:

• туберкулинодиагностика (Манту);
• флюорография;
• тестирование биологического материала на флору;
• рентген легких.

Эти исследования являются бесплатными и доступными для каждого. Но у них есть свои недостатки:

• Тест на туберкулез вызывает аллергию. Противопоказан при заболеваниях кожи.
• Рентгенологические исследования сопровождаются облучением, что неприменимо к детям, людям с иммунодефицитом и беременным женщинам.
• Бактериологические анализы занимают гораздо большее количество времени, результата можно ждать до месяца.

Альтернативные варианты не являются гарантией стопроцентно правильного заключения. Они чаще всего используются в профилактических целях. Диагностирование туберкулеза методом ПЦР дает наиболее достоверную информацию. Если есть возможность, то лучше воспользоваться именно им.

Ребенка следует особенно оберегать от заболевания – туберкулезная инфекция может нанести серьезный вред организму с еще не совсем сформировавшимся иммунитетом.

После попадания палочки Коха в детский организм развитие заболевания проходит такие стадии:

• Латентная. Продолжается до года, не выдавая себя никакими симптомами.
• Интоксикация. Сказывается на общем состоянии здоровья. Появляется слабость, апатия, отсутствие аппетита, сонливость и снижение работоспособности. Постоянно немного повышена температура.
• Первичная форма заболевания. Туберкулез локализуется, образуя очаг заболевания. У ребенка возникает кашель, одышка, головная боль, увеличение лимфоузлов.
• Туберкулезный бронхоаденит. Симптомами являются боль в лопатках, кашель с разной тональностью звука, хрипы.

Обычно для выявления инфекции под кожу ребенка вводится туберкулин. Если к этому виду обследования имеются противопоказания, то ПЦР на туберкулез – незаменимый вариант для диагностики. Дети обычно сдают анализ крови, но при необходимости собирается и мокрота. При малейшем подозрении на наличие туберкулез проводятся дополнительные исследования, чтобы убедиться в положительном результате и сразу начать лечение на ранней стадии, не допуская развития болезни.

Современные методы исследования всегда быстрее и надежнее. Жаль, что из-за дорого оборудования сделать такие анализы есть возможность не во всех медицинских учреждениях и населенных пунктах. Каким способом провести обследование обычно выбирает врач, но и у пациента есть право выбора. Если вам приходилось сдавать анализ ПЦР, расскажите об этом в комментариях. Если статья оказалась для вас полезной, поделитесь ей в соцсетях – возможно, она поможет вашим друзьям.

источник

Возбудителем туберкулеза является микобактерия под названием туберкулезная палочка или палочка Коха. Попадая в организм человека, она может длительное время себя никак не проявлять. Но со временем, как только возникнут благоприятные условия, бактерия может вызвать туберкулез легких или других органов.

Для успешной борьбы с этим заболеванием очень важно диагностировать его на ранних стадиях. Анализ крови на туберкулез методом ПЦР является самым эффективным и быстрым способом диагностики туберкулеза. На его проведение достаточно четыре часа. Он более удобен, чем другие методы, у него меньше противопоказаний и почти стопроцентная достоверность.

На сегодняшний день анализ ПЦР является одним из новейших методов диагностики различных заболеваний организма. Для выявления туберкулеза этот способ самый эффективный, по сравнению с другими способами, применяемыми до сих пор. Метод был открыт в 1983 году известным химиком К.Мюллисом, через десять лет получившим за него Нобелевскую премию.

В основе этого способа применяется полимеразная цепная реакция, позволяющая определить не только наличие возбудителя в крови, но и его вид. С этой целью при помощи ПЦР метода, выявляется часть ДНК возбудителя и проводится его идентификация. Даже если в крови находится несколько разных возбудителей, эта методика позволяет обнаружить их всех.

Анализ крови ПЦР на туберкулез назначают пациенту, когда есть подозрение на наличие туберкулезной палочки, но другими методами она не обнаруживается.

При желании каждый может сдать этот анализ самостоятельно, обратившись в клинику, где его проводят, например в ИНВИТРО. Это одна из крупнейших частных компаний, содержащих медицинские лаборатории во многих странах.

В настоящее время нет более точного анализа для выявления палочки Коха в организме пациента. Общий анализ крови эффективен, но позволяет получить положительный или отрицательный результат только спустя достаточно длительное время. Для этого делается посев исследуемого материала на питательную среду и лишь через несколько недель становится видно, идет ли размножение бактерии.

Метод ПЦР позволяет выявить ДНК бактерии за считанные часы, что является большим плюсом для диагностики. Кроме того, анализ позволяет точно идентифицировать бактерию, даже если ее в крови очень мало.

Данный метод исследования почти не имеет противопоказаний. Ввиду того, что используется кровь, состояние пациента не имеет значения. Наличие простудных заболеваний не влияет на результат анализа.

Не рекомендуется его проводить после прививки, а также после недавно проведенного лечения. Это объясняется тем, что организм еще не очистился, и остатки бактерий могут повлиять на результат.

Анализ крови ПЦР на туберкулез имеет ряд преимуществ перед другими методами исследования, такими как реакция Манту или рентген. Среди них можно выделить следующие качества:

1. Быстрота выполнения. По сравнению с другими анализами ПЦР делается в течение нескольких часов.
2. Для проведения процедуры можно использовать не только кровь, но и другие биологические выделения организма.
3. Процедура не имеет противопоказаний, ее можно проводить не только взрослым, но и детям. Также подходит беременным женщинам без вреда для их здоровья.
4. Метод позволяет выявить заражение крови бактериями на самых первых стадиях, когда еще нет внешних признаков заболевания.
5. Методика позволяет выявить возбудителя при самых малых количествах бактерий в материале.
6. Дает хороший эффект при исследовании больного, заразившегося повторно.
7. Анализ можно брать независимо от того, как себя чувствует пациент. Например, реакция Манту делается, если у больного нет простудных заболеваний и повышения температуры. В данном случае таких ограничений нет.

Как видно из предоставленного списка, этот метод диагностики гораздо предпочтительнее, чем другие. Он абсолютно безвреден для пациентов, страдающих аллергическими реакциями. Его можно успешно использовать взрослым и детям. Методика позволяет сэкономить время на диагностику и быстрее начать лечение.

Метод также удобен для людей из провинции, где нет соответствующих лабораторий. Им не приходится приезжать несколько раз в клинику, достаточно одного дня, чтобы получить результат анализов и назначение лечения от врача.

Кроме преимуществ у этого метода есть ряд недостатков, которые могут быть препятствием для проведения анализа ПЦР:

1. Относительная дороговизна процедуры. Для проведения такого анализа необходимо дорогостоящее оборудование и не каждая клиника может себе это позволить. Оно есть в крупных лабораториях частных компаний. Цены там, как правило, всегда высокие.
2. Анализ дает правильный результат лишь в том случае, если материал для исследования правильно подобран. К примеру, при туберкулезе мочеполовой системы, исследование крови наличие заболевания не покажет. В этом случае нужно собрать мочу или выделения из мочеполовых органов.
3. Метод не всегда дает точного результата у детей. Это объясняется влиянием прививок. Например, после прививки БЦЖ делать этот анализ не рекомендуется.
4. Есть вероятность получения ложноположительного или ложноотрицательного результата. Что это такое? Способ обладает очень высокой чувствительностью. При сборе материала должна соблюдаться повышенная стерильность. В случае если в материал попадет самое малое количество посторонних бактерий, анализ будет испорчен, результат исказится.

Несмотря на недостатки, метод достаточно широко используется. Например, в тех случаях, когда необходимо срочно определить заболевание у пациента. Его могут назначить беременным при подозрении на инфекцию, способную угрожать ребенку или матери. Иногда назначают детям перед принятием в детский сад. Но это по желанию родителей.

Перед взятием анализа пациенту необходимо провести подготовительные мероприятия. Они зависят от того, какой материал будет сдаваться:

1. Если необходимо сдать кровь, должна быть подготовлена стерильная пробирка. В нее добавляется антикоагулянт – специальный раствор, препятствующий свертыванию крови. В него помещается собранный материал и осторожно смешивается. Кровь собирают одноразовым шприцем из вены.
2. Процедура проводится утром натощак. Хранится кровь в холодильнике не более пяти часов. Если пренебречь этим правилом, результаты анализа могут быть неточными.
3. За неделю до сдачи биоматериала следует прекратить прием любых лекарств.
4. Нельзя сдавать кровь после приема алкогольных напитков.
5. При наличии хронических инфекционных или воспалительных заболеваний процедура переносится до тех пор, пока человек полностью не выздоровеет.

Обязательно во время процедуры необходимо соблюдать по возможности максимальную стерильность. Поэтому важно сдавать анализы только в проверенных клиниках под руководством опытного специалиста. Следует помнить, что минимальное попадание посторонних микроорганизмов может дать неправильный результат. Во избежание этого, доктор может назначить повторное исследование.

Чтобы сдать кровь на анализ, больной должен не принимать пищу более шести часов. Лучше всего проходить процедуру утром натощак. Кровь забирается из локтевой вены через одноразовую иглу сразу в стерильную пробирку. Туда же вводится антикоагулянт, чтобы кровь не свернулась. Смешивать содержимое пробирки следует осторожно, не допуская резких движений.

Если кровь была взята вне лаборатории, ее надо немедленно доставить лаборанту. Для проведения анализа на туберкулез она должна храниться не более пяти часов. По истечении этого времени результат может быть неточным. Взятие материала вне лаборатории допускается только в том случае, если пациент не может приехать в больницу по состоянию здоровья. Например, он лежачий, и нет возможности нанять соответствующий транспорт.

Результат ПЦР может быть либо положительным, либо отрицательным. Положительный означает присутствие бактерии в организме. Отрицательный свидетельствует о том, что она отсутствует. Хотя не всегда положительный результат говорит о туберкулезе. Он может быть ошибочным, поэтому для подтверждения диагноза требуется пройти дополнительные диагностические тесты.

Вся остальная информация сложна для восприятия больного, и ею занимается специалист. При положительном результате врач назначает необходимое лечение.

Цена процедуры может отличаться в зависимости от медицинского центра, где она проводится. Подробнее в нижерасположенной таблице.

Метод ПЦР для анализа на туберкулез сравнительно новый, и многие пациенты с ним еще не знакомы. В большинстве случаев больные предпочитают Манту и флюорографию. Но, как показывает практика, этот способ диагностики более эффективный и в конечном итоге полностью себя окупает.

Отсутствие противопоказаний и быстрота выполнения делает его привлекательным по сравнению с другими анализами. Медицина не стоит на месте и этот метод с каждым разом усовершенствуется и становится все более надежным.

источник

Специфическая туберкулезная инфекция многие годы присутствует в тканях и структурах человека, а при определенных обстоятельствах быстро распространяется по организму за 2-3 месяца. Порой оптимальный курс лечения выбрать очень тяжело по причине запоздалой диагностики и адаптации возбудителя ко многим медикаментам.

Новейшая ПЦР диагностика туберкулеза помогает обнаружить не только развившуюся болезнь, но и сам возбудитель, когда первые признаки заболевания еще не появились.

Диагностирование туберкулеза способом ПЦР появилось недавно. В 1983 году микробиолог из Америки Кэри Муллис изобрёл процедуру, при которой микроорганизмы стало возможно восстановить из биологического материала по короткому сегменту. Эта работа заслужила Нобелевскую премию.

ПЦР на туберкулез – это полимерный цепной процесс, при котором проходит диагностика и выявление вирусных возбудителей способом генной инженерии. Методика используется в иммунологических, микробиологических, вирусологических и биохимических лабораториях.

Универсальный метод помогает докторам при диагностике и выявляет инфекционный процесс даже после первых часов заражения, задолго до появления симптомов. Исследование возможно даже при маленьком количестве биоматериала.

• Несколько отрезков ДНК (праймеров), с них начинается биологический синтез;
• Нуклеотидные соединения, основа молекулы ДНК или же РНК;
• Фермент полимераза, которая ускоряет анализ ПЦР.

Сначала из биоматериала от заразившегося человека выделяется сегмент ДНК, при помощи генно-молекулярных способов биосинтеза дальше определяется тип микроорганизмов, которому принадлежит биофрагмент.

Эта сложная реакция занимает меньше времени, чем некоторые биометоды. ПЦР определяет возбудителя за несколько часов, при этом не существует надобности выделять его из биологической жидкости (мокроты, спинномозговой или кровяной среды), не нужно долго растить его на питательной среде. Достаточно, чтобы исследуемый материал содержал нить ДНК инфекционного возбудителя.

При проведении анализа крови ПЦР на туберкулез в пробирке искусственны путем создается синтез рибонуклеиновых кислот туберкулезной микобактерии.

Молекулярная реакция способом ПЦР – это несложная манипуляция, занимающая мало времени. Берется необходимый биоматериал: для определения tbc используется кровь, мокрота, промывная жидкость бронхов.

1. Сначала разрушается первичная форма ДНК, разъединяются 2 цепочки при высокой температуре (максимум 98ОС не больше 2 минут);
2. Затем производится отжиг, первичная температура понижается на несколько делений, возникает связь нити ДНК с праймером;
3. Следующая стадия называется элонгация, при этом происходит биосинтез необходимых молекулярных структур.

Для получения нужного количества копий ДНК должно пройти от 25 до 30 таких циклов, при этом получившееся количество микобактерий легко распознаётся.

Непосредственно всем пациентам с подозрением на ТВЦ проведение цепной диагностики не делается, так как процедура требует использования дорогого оборудования. Не все лечебные государственные учреждения позволяют его приобрести, тем более, что привычные методики диагностирования на микобактерии туберкулеза тоже информативны.

• Тщательное собирание анамнеза, опрашивание больного;
• Внешний осмотр;
• Туберкулиновая проба Манту;
• Рентгенографическое либо флюорографическое обследование;
• По надобности компьютерное диагностирование;
• Микроскопическое или бактериологическое исследование маска с мокротой.

ПЦР на туберкулез делается исключительно тогда, когда не имеется возможности сделать другой инструментальный анализ либо в сложных для диагностики обстоятельствах.

Несмотря на то, что изобрели великое множество методов диагностирования, количество больных туберкулезом продолжает расти. Кроме того заболеваемость приобрела некоторые особенности : нередко наблюдается тяжелая форма недуга, увеличивается число летальных исходов, возбудитель приобретает устойчивость имеющимся химиопрепаратам.

Многие люди не желают каждый год проходить профилактический осмотр, отказываются от вакцинации, что ведет к увеличению заболеваемости. Такие обстоятельства требуют эффективных и информативных способов исследования, доступных для взрослых и детей с диагнозом tbc. ПЦР имеет преимущества перед другими диагностическими методиками.

Это новейшее исследование отлично себя зарекомендовало. Если по ряду причин сложно поставить диагноз или в некоторых спорных случаях, ПЦР легче обнаруживает туберкулезную палочку в биологическом материале, чем другие методы.

• Это быстрое исследование, небольшой отрезок молекулы дает возможность поставить точный диагноз за короткое время приблизительно за 5 часов, это применяется в экстренных случаях, например перед неотложным оперативным вмешательством;
• Исследование крови на туберкулез возможно, когда другие методики недоступны или противопоказаны – иногда для обнаружения возбудителя tbc приходится делать множество Rg -снимков, облучающая доза при этом слишком большая;
• Используя полимеразную реакцию можно исследовать любые биологические жидкости на присутствие микобактерии. К примеру, можно проводить изучение спинномозговой жидкости при туберкулезном менингите или мочи при мочеполовом туберкулезе;
• Метод безопасен, диагностика туберкулеза у детей при помощи ПЦР не вызывает сложности;
• Способ полимерной реакции выявляет туберкулезную палочку при любых формах и стадиях недуга;
• Наличие в биоматериале всего нескольких бактерий позволяет увидеть присутствие микроорганизмов, так как это чувствительная реакция;
• ПЦР легко диагностирует рецидив болезни.

Несмотря на огромное количество плюсов, всем больным с подозрением на tbc исследование не делается, так как существуют и минусы, их так же учитывают.

Видео — ранняя диагностика

Этот метод диагностики является скорее исключительным, чем закономерным, для этого имеются причины. В первую очередь во внимание берётся дороговизна метода. Оборудование дорого стоит, государственные поликлиники не имеют возможности его приобрести из-за высокой цены, но большинство платных лабораторий оборудование имеют, анализ в них делается.

• Метод обнаруживает убитые бактерии, которые погибли после лечения, при этом ПЦР показывает положительный результат. Сразу после химиотерапии проводить исследование нет смысла, так как результат будет недостоверным;
• Туберкулезные микобактерии подвержены мутации, что приводит к неэффективности способа, при этом нить ДНК не может последовательно синтезироваться.

Среда для исследования должна тщательно выбираться, взятие крови или мочи происходит только в том случае, если есть подозрение на заражение. Нельзя взять мокроту для исследования, если подозревается туберкулез костей. В этой ситуации диагностика будет неверной.

Кровь и моча больного туберкулезом для изучения на ПЦР берется редко, выявление болезни таким способом сомнительно. В этих биосредах возбудитель определяется только при сепсисе, либо в случае диссеминированного туберкулеза. Локальные формы встречаются наиболее часто, при них кровь и моча могут оставаться без изменений. Чаще всего для изучения берется мокрота.

Большинство больных направляются на ПЦР диагностику в спорных и сложных случаях туберкулеза. Когда медицинские работники выдают направление на исследование?

1. Если произошел контакт с человеком, у которого достоверно поставлен диагноз туберкулёза, но обычными способами диагностику сложно провести;
2. При тех обстоятельствах, если больного предоставить в поликлинику невозможно для рентгенографии или других исследований. В такой ситуации его проще обследовать при помощи полимерного метода. Анализ мокроты просто доставляется в лабораторию в специальной таре, а результат становится известен спустя несколько часов;
3. Перед операцией бывает необходимо срочно определить болен ли пациент туберкулезом, в этом случае показано проведение ПЦР;
4. Из-за безопасности способа, можно проводить обследование беременной женщины или ребёнка, при этом не создается дополнительная рентген-нагрузка;
5. Сомнительные результаты теста Манту.

Каждый желающий может пройти обследование платно, если туберкулез не подтвердился при помощи бактериологии и рентгеноскопии. Так случается, если очаг в лёгочной ткани невидим на Rg- снимке в прямой проекции, а пациент не смог собрать мокроту правильно, но признаки туберкулеза человека беспокоят.

Современная ПЦ реакция для диагностики – это залог успешного лечения, в результате которого распространенность заболевания снижается. Традиционные способы определения недугов не всегда дают желаемый эффект.

Так ПЦР анализ на сегодняшний день стал одним из достоверных и безопасных методов диагностирования на ранних сроках развития болезни.

источник

Туберкулез – одно из самых опасных заболеваний, от которого человечество страдает уже сотни лет. Даже несмотря на то, что ученым удалось определить возбудителя и изобрести антибиотики для его ликвидации, лечение не всегда проходит успешно. Основная причина — большой период латентной или скрытой формы болезни, который может длиться несколько лет. Несвоевременная диагностика значительно уменьшает шансы больного на выздоровление и полноценную жизнь.

Для обнаружения микобактерий туберкулеза в организме уже более ста лет успешно применяется проба Манту. Хорошо себя зарекомендовали и другие методы: бактериологический посев в искусственной среде, микроскопия мазка, ИФА. Однако большое количество осложнений и ложноположительных результатов, а также длительность некоторых способов потребовало внедрения новых технологий в методику диагностики. Огромным прорывом в области микробиологии стало появление анализа ПЦР на туберкулез. Вот уже несколько десятилетий он показывает свою эффективность и широко применяется для дифференциальной диагностики различных форм туберкулеза.

ПЦР анализ на туберкулез или полимеразная цепная реакция – это метод обнаружения ДНК бактерий или их фрагментов, в основе которого лежит увеличение молекул нуклеиновой кислоты под действием фермента ДНК-полимеразы. Для положительного результата достаточно всего одной молекулы болезнетворной ДНК, поэтому этот метод считается высокочувствительным. Диагностика ПРЦ при туберкулезе более эффективна, чем посев микобактерий в искусственной среде, так как в отличие от культурального метода позволяет различить дикие и вакцинные штаммы, привитые БЦЖ. Это позволяет избежать ложноположитеьного результата и сделать диагноз более точным.

ПЦР диагностика на туберкулез позволяет обнаружить палочку Коха в любой биологической среде организма с определением их количественного состава даже на начальной стадии заболевания, когда микобактерии пребывают в «спячке». Диагностика болезни в латентной фазе позволяет вовремя начать профилактическое лечение, предотвратить развитие очагов воспаления в легких и появление осложнений в других органах и системах. Кроме этого ПЦР тест на туберкулез имеет ряд преимуществ:

• высокая специфичность – 90-100%;
• высокая скорость – от 4 часов до 2 суток;
• высокая чувствительность, особенно при иммунодефиците;
• дифференциальная диагностика.

Главное достоинство метода в том, что ПРЦ диагностика туберкулеза у детей дает возможность различить диссеминированную форму заболевания от ограниченной очаговой, даже при отрицательных результатах других анализов. Дифференциальная проверка позволяет выбрать правильную схему лечения и повысить эффективность терапии.

Высокая специфичность анализа достигается исключением перекрестных реакций с другими молекулами нуклеиновой кислоты, а высокая чувствительность дает возможность обнаружить микобактерии даже в малом объеме собранного материала. Метод ПЦР мокроты на туберкулез имеет наибольшую достоверность, его специфичность достигает 100% по сравнению с исследованием других биологических материалов.

Особый механизм ПЦР дает широкие возможности для выявления палочки Коха у пациентов с иммунодефицитом. По методике анализа реакция обнаруживает антигены, поэтому совсем неважно вырабатывает организм антитела к возбудителю, или нет. Таким образом, можно диагностировать внелегочные формы заболевания и запущенные случаи у больных с погрешностями в иммунной системе, что невозможно при использовании других методов.

Несмотря на множество преимуществ и высокую чувствительность анализа, ПЦР на туберкулез может давать ложноотрицательный результат. Поскольку для диагностики берется очень небольшой объем биоматериала, не исключен тот факт, что возбудитель «прячется» в клетке или воспалительном очаге и не выделяется наружу.

Чувствительность данного метода у детей составляет 25-80%. Так, например, при рандомных исследованиях у группы больных с клинически доказанным диагнозом, анализ крови ПЦР на туберкулез дал положительный результат только у 50% пациентов. В связи с этим при проверке ребенка на патогенные микобактерии нельзя заменять один метод диагностики другим. Для того чтобы полностью удостовериться в отсутствии заражения нужно провести комплексное исследование сразу несколькими способами.

Главным условием достоверности ПЦР диагностики является соблюдение правил сбора биологических жидкостей на анализ. Загрязненный или неправильно собранный материал может стать причиной неправильного результата. Наиболее распространенными являются анализ мокроты, крови и мочи, но для более глубокой дифференциальной диагностики можно брать пробы из содержимого желудка, синовиальной жидкости, спинномозговой жидкости, смывной жидкости бронхов, спермы, секрета простаты.

ПЦР мочи на туберкулез сдают утром после гигиены наружных половых органов путем мочеиспускания в стерильный контейнер. Во время процедуры важно не касаться внутренних стенок емкости, чтобы не допустить попадания сторонних микроорганизмов. Женщинам, которые живут регулярной половой жизнью обязательно нужно поставить тампон во влагалище, чтобы избежать попадания сторонних выделений.

Анализ крови сдают утром натощак, а ПЦР мокроты на туберкулез может быть сделан в любое время суток с обязательной предварительной гигиеной полости рта. Это нужно чтобы удалить остатки пищи, которые могут попасть в контейнер. При отхаркивании мокроты важно не допустить попадания слюны и слизи из носоглотки в емкость, это может исказить данные анализа.

Исследование содержимого желудка проводят в условиях стационара рано утром, пока мокрота, проглоченная за ночь, находится в желудке. Для обнаружения микобактерий туберкулеза таким методом делают трехкратный посев, который с большой вероятностью позволяет выделить палочку Коха.

Качественный анализ ПЦР дает 2 вида результатов «обнаружено» или «не обнаружено». Они означают положительный и отрицательный вердикт соответственно. Ответ «обнаружено» означает, что в исследуемом образце присутствует ДНК инфекционного агента, и с вероятностью 97% организм заражен туберкулезом. Отрицательный результат свидетельствует об отсутствии ДНК палочки Коха во взятой пробе биологического материала, и дает 97% вероятность, что в теле нет большого количества микобактерий, и 60%, что человек не заражен.

Наибольшую специфичность для диагностики туберкулеза имеют анализ крови и мокроты. При положительном результате они указывают на инфицирование организма, которое требует проведения срочных терапевтических мероприятий. Исследования других биоматериалов могут указывать не на течение заболевания, а всего лишь на присутствие чужеродных бактерий. Это происходит, когда человек является носителем болезни, но не распространяет инфекцию в окружающую среду и не заражает здоровых людей.

Количественный анализ ПЦР проводят реже, и расшифровкой его результатов занимается лечащий врач. Показатели исследования используют для определения активности заболевания и степени поражения организма. Опираясь на полученные данные, специалист может определить эффективность лечения, и при необходимости скорректировать терапевтическую схему.

Туберкулез всегда был и остается одной из самых серьезных проблем для здоровья всего человечества. Современные методы диагностики позволяют обнаружить заболевание на ранней стадии, чтобы вовремя начать лечение. Туберкулиновая проба, микроскопия мазка, посев бактерий на искусственные питательные среды хорошо зарекомендовали себя в сфере лабораторной диагностики туберкулеза. Однако длительное ожидание результатов и повышенная частота ложноположительных показаний сделало их устарелыми и вывело на первый план более современные технологии. ПЦР анализ является высокоспецифичным и высокоэффективным методом диагностики туберкулеза. Его результаты наиболее достоверны среди всех предложенных лабораторных методик обнаружения палочки Коха. Он позволяет не только вынести окончательный вердикт, но и провести необходимую дифференциальную диагностику.

источник