Пцр на туберкулез легких моча

При подозрении на внелегочную форму заражения человека Mycobacterium tuberculosis обязательно назначается анализ мочи на туберкулез. Выявление микобактерий позволяет уточнить локализацию инфекции, на основании чего подбирается наиболее эффективная схема терапия болезни. Анализ мочи на определение бацилл Коха проводится разными методами. При возможности больному назначается каждый метод.

При заражении человека микобактериями туберкулеза чаще всего страдает дыхательная система. Но бывает очаг инфекции локализуется в костной системе, тканях головного мозга, костях и мочеполовых органах. Во время проведения диагностики важно определить очаг поражения. Поэтому помимо стандартных методов исследования, таких как флюорография, анализы крови и мокроты пациенту назначается и ряд дополнительных.

Анализ мочи на туберкулез в первую очередь необходим при подозрении на поражения бактериями мочевыделительной системы. Обязательно он должен назначаться больным:

• При продолжительном и при этом неэффективном лечении воспалительных заболеваний органов мочевыделения – пиелонефрита, цистита, пиелита, простатита, эпидидимита;
• С нарушением мочеотделения, проявляющимся задержкой мочи, появлением примесей гноя в урине, с гематурией;
• При длительных необъяснимых болях в области пояснице.

Анализ на туберкулез почек необходим и пациентам уже с установленным поражением бациллами Коха легочной ткани и других внутренних органов. Его своевременное назначение позволит вовремя обнаружить все очаги инфекции и значит, лечение будет наиболее эффективным.

Почечная локализация бактерий туберкулеза характерна для людей трудоспособного возраста. Чаще всего такая форма заболевания определяется у пациентов от 20 до 40 лет. Очень часто туберкулез почек на ранней стадии развития не проявляется явными симптомами. Поэтому нередко диагностируется уже на запущенной стадии. Исключить подобное помогает вовремя назначенный анализ мочи на микобактерии туберкулеза.

Микобактерии туберкулеза при многократном увеличении выглядят как небольшие прямые или слегка изогнутые палочки, их длина доходит только до одной сотой миллиметра. В организме человека они присутствуют там, где происходит их развитие и размножение. Поэтому при туберкулезе почек бациллы будут активно выделяться вместе с мочой. Обнаружить их в анализе можно тремя способами:

• Бактериоскопическим;
• Бактериологическим;
• Биологическим.

Врач может назначить один из перечисленных методов исследования или все сразу. В дополнение к ним обязательно нужно сдать общий анализ мочи. Так как на заболевание указывает не только присутствие бацилл Коха в пробе, но и косвенные признаки.

При проведении специфических анализов мочи на туберкулез нужно учитывать, что положительный результат всегда свидетельствует о поражении микобактериями тканей системы мочевыделения. Тогда как отрицательный результат не всегда может быть достоверным, что может быть связано с неправильным сбором урины и с другими факторами. Поэтому обычно назначается пересдача анализа и дополнительные методы диагностики.

Проведение общего анализа мочи позволяет выявить косвенные признаки болезни, такие как:

• Появление гвоздевидных лейкоцитов;
• Стойкая кислая реакция урины (практически в половине случаев заражения микобактериями);
• Появление в моче белка (протеинурия);
• Эритроцитоурия – присутствие крови в моче;
• Пиурия – гной в урине.

Если результат анализа соответствует вышеперечисленным признакам, пациента обязательно нужно отправить на дополнительное обследование, стандартное при подозрении на туберкулез.

Бактериоскопический анализ мочи иначе называется исследованием по Цилю-Нельсону. В его основе лежит устойчивость микобактерий туберкулеза по отношению к кислой среде урины. Взятый образец обрабатывается в лабораторных условиях определенными реактивами:

1. Сернокислыми растворами или солянокислым спиртом. Они обесцвечивают неустойчивые к кислой среде бактерии. Тогда как кислотоустойчивые микобактерии туберкулеза оказываются окрашенными, что можно увидеть в микроскоп.
2. Раствором метиленового синего хлорида. Под его воздействием палочки Коха приобретают насыщенный красно-малиновый оттенок.

Бактериоскопический посев мочи на туберкулез является наиболее быстрым. Используют его не только для обнаружения палочек Коха, но и для выявления других, устойчивых к кислым средам бактерий. Туберкулезные микобактерии при проведении анализа имеют характерный цвет и форму изогнутых или ровных палочек.

На достоверность анализа по методу окраски Циля-нельсона влияет правильный забор мочи. Поэтому все рекомендации врача по отбору пробы нужно неукоснительно соблюдать.

Бактериологическое исследование мочи является наиболее точным методом диагностики туберкулеза почек, но делается такой анализ на протяжении от 2-х до 6 недель. Вначале необходимо на протяжении трех дней подряд сдать анализ мочи, осадок урины помещается в чашку Петри с особой питательной средой, это может кровяная среда или картофельные образцы.

В питательной среде происходит рост болезнетворных микроорганизмов, после чего выявленный возбудитель идентифицируется. В кровяной среде микобактерии туберкулеза начинают расти примерно через семь дней, в картофельной для этого может потребоваться месяц и больше.

По результатам бактериологического анализа принимается решение о проведении дополнительных методов диагностики и назначается специфическое лечение.

Стопроцентно достоверный результат показывает анализ мочи при подозрении на туберкулез почек в виде биологической пробы. Ее проведение заключается во введении осадка мочи в брюшную полость или под кожу подопытному животному со склонностью к заражению болезнью. В лабораторных условиях чаще всего с этой целью используют морских свинок, крыс.

В течение месяца за условно инфицированным животным наблюдают. Если в моче пациента имелись палочки Коха то, как правило, за это время грызун погибает и подвергается исследованию с обязательным определением в организме очагов инфекции. Выявить результат биологической пробы можно и раньше, для этого у животного берут кровь на туберкулин или проводят пункцию лимфоузлов с определением наличия воспалительного процесса.

Биологическая проба назначается пациентам редко, так как не во всех лабораториях возможно ее проведение.

Проведение исследования мочи по Нечипоренко по сравнению с общим анализом является более достоверным. Данное исследование дает полную картину о содержании эритроцитов и лейкоцитов в образце урины, определяет количество белковых клеток. Отклонение от нормы не всегда свидетельствует об инфицировании туберкулезом, но точно указывает на инфекционно-воспалительный процесс в мочевыделительной системе. Чтобы определить причину выявленных изменений и установить заболевание пациенту назначаются другие лабораторные методы исследования и инструментальная диагностика.

Моча при туберкулезе покажет присутствие палочек Коха только в том случае, если проба будет взята правильно. Обязательно требуется подготовка, она заключается:

• В отказе от употребления за 1-2 дня до забора биологической жидкости продуктов, окрашивающих урину. Это свекла, морковка, черника;
• В исключении использования ряда медикаментов для лечения сопутствующих болезней – диуретиков, жаропонижающих средств, витаминов группы В.

Если лечение ранее диагностированной болезни не предполагает перерыв в приеме медикаментов, нужно сообщить об этом врачу. Также нельзя накануне пить спиртные напитки, желательно воздержаться и от курения. Для выявления микобактерий необходим чистый образец урины, поэтому женщины в период менструаций сдавать анализ не должны.

Чтобы точно установить заболевание с поражением почек необходима утренняя порция мочи. Собирают ее, следя нескольким правилам:

• Заранее нужно подготовить емкость с крышкой — специальные баночки для проб продаются в аптеках;
• Область половых органов тщательно подмыть и лучше делать это без мыла;
• Собрать среднюю порцию мочи. То есть мочеиспускание начать в унитаз, затем струю направить в баночку и затем вновь в унитаз. Для исследования достаточно 50 мл урины;
• Емкость сразу закрыть завинчивающейся крышкой и поставить в прохладное место.

В большинстве случаев образец мочи на микобактерии туберкулеза собирается дома. Но его необходимо как можно раньше увести в лабораторию. В «свежей» урине палочки Коха определяются легче и поэтому результат таких анализов редко бывает ложноотрицательным.

Туберкулез – заболевание, трудно поддающееся диагностики на ранней стадии. В России повсеместно распространена проба Манту, ее начинают проводить с раннего возраста. Но она не всегда дает точные результаты, поэтому необходимы и другие анализы. На начальном этапе диагностики назначают флюорографию и анализ крови. Если при их проведении возникает подозрение на туберкулез, пациента отправляют на расширенное обследование, в него входит:

• Рентгенография;
• Туберкулиновые пробы;
• МРТ;
• Анализ крови по методу ПЦР и ИФА;
• Анализ мокроты.

Практически со стопроцентной точностью болезнь устанавливает анализ ПЦР, но он дорогой и проводится не во всех лабораториях.

Флюорография, исследование мокроты являются достоверными, если очаг поражения локализуется в бронхолегочной системе. При внелегочных формах заболевания их результаты не точны, поэтому диагноз выставляется только после расширенного обследования, включающего и проведения анализа мочи.

Диагностические исследования, направленные на выявление туберкулеза, повсеместно распространены. Но к сожалению в большинстве государственных учреждений используются только устаревшие методы, которые не всегда определяют микобактерии при их присутствии в организме. Чтобы получить точные результаты можно обратиться в современные медцентры. Анализы в них в зависимости от их вида проводятся как платно, так и бесплатно.

Если вам известно что-либо новое об исследовании на туберкулез, напишите пожалуйста в комментариях, это может пригодиться многим людям. Желательно поделиться статьей и в соцсетях, так как не все знают, что существуют другие способы обследования, помимо стандартной флюорографии.

источник

Анализ мочи – один из способов выявления микобактерий туберкулеза в организме человека. Он применяется наряду с туберкулиновыми пробами, аппаратными методами диагностики, анализами крови и мокроты.

Исследование используется для выявления внелегочных форм заболевания: туберкулеза почек, мочевыводящих путей, половой системы.

Как проводится анализ мочи для выявления возбудителей заболевания, какие правила нужно соблюдать, чтобы получить точный результат?

Туберкулез почек и мочеполовой системы встречается реже, чем легочная форма заболевания, но из-за отсутствия выраженных симптомов и осложненной диагностики часто вызывает серьезные последствия.

Фото 1. Изображение почек, видоизмененных туберкулезной инфекцией.

Основное показание к проведению анализа мочи — подозрение на внелегочную форму туберкулеза. Данное исследование назначается людям, которые на протяжении долгого времени безуспешно лечатся от таких патологий, как цистит, воспаление предстательной железы и придатков, почек, мочекаменная болезнь. Отсутствие результатов лечения мочеполовых заболеваний может говорить о том, что их причиной являются микобактерии туберкулеза.

При подтвержденном диагнозе это исследование проводится для того, чтобы определить вид микобактерий и подобрать правильную схему лечения, а в запущенных случаях — для оценки состояния мочевыводящей системы.

Справка. При легочной форме заболевания общий анализ мочи практически неинформативен, так как патологический процесс не вызывает ярких изменений в ее составе.

При поражении организма туберкулезом микобактерии выделяются со всеми биологическими жидкостями, в том числе и с мочой. Наиболее точные методы диагностики заболевания — бактериоскопия или посев образца биоматериала на питательные среды. Для выявления микроорганизмов используется утренняя порция мочи, причем исследование рекомендуется повторить 2-3 раза, так как определить заражение с помощью первой порции мочи удается далеко не всегда.

Важно! Внелегочные формы туберкулеза зачастую протекают бессимптомно (иногда больные ощущают небольшой дискомфорт в области поясницы), поэтому анализ мочи играет важную роль в своевременной диагностике и терапии заболевания.

Для получения достоверного результата пациенту рекомендуется следовать нескольким правилам:

• за сутки не употреблять продукты, которые могут изменить цвет жидкости (свекла, черника, морковь и т.д.);
• отказаться от приема некоторых медикаментов: диуретиков, витаминов группы В, аспирина;
• женщинам сбор материала лучше осуществлять до или после менструального кровотечения.

Перед сбором мочи рекомендуется тщательно помыть половые органы, после чего собрать «среднюю» мочу в стерильную емкость. Чтобы избежать загрязнения и попадания бактерий в биоматериал, емкость необходимо сразу же плотно закрыть. Перед сдачей образца в лабораторию его следует хранить в прохладном месте.

Внимание! Загрязнение биоматериала может привести к угнетению роста микобактерий и получению ложноотрицательного результата.

Микобактерии туберкулеза относятся к низшим грибам и представляют собой палочки длиной не более одной сотой миллиметра. В анализе мочи их можно выявить тремя способами: бактериоскопическим, бактериологическим, с помощью биологической пробы.

Бактериоскопический (по Цилю-Нильсену). Суть метода заключается в том, что микобактерии не способны жить в кислотной среде, поэтому для их выявления используются специальные реактивы, которые окрашивают все неустойчивые структуры. Сначала их обесцвечивают с помощью серной кислоты, после чего вводят раствор метиленового синего. Благодаря этому все структуры и клетки приобретают ярко-синий цвет, за исключением микобактерии, которая становится малиново-красной.

Минус данного способа заключается в том, что мочу достаточно сложно очистить от посторонних примесей, из-за чего точность исследования снижается (для повышения диагностической ценности исследования мочу берут с помощью катетера).

Бактериологический. Еще один способ выявления возбудителей туберкулеза в анализе мочи — бактериологический. Для выполнения берется осадок мочи, после чего его культивируют на питательной среде.

Минус метода — достаточно долгое ожидание результата. Точные сроки варьируются в зависимости от вида среды, которая применяется для культивации биоматериала. При использовании кровяной среды результат придется ждать около 7 дней, картофельной — 30-45 дней.

Фото 2. Результат бактериологического теста: в чашке Петри выращены бактерии, которые находились в осадке мочи пациента.

Биологическая проба. Наиболее чувствительный метод выявления микобактерий, который часто используется вместо реакции Манту.

Для проведения исследования морской свинке вводят образец мочи, через несколько месяцев животное можно использовать для точной диагностики. Чтобы поставить диагноз раньше, можно взять у свинки туберкулиновую пробу.

Точность бактериоскопического и бактериологического анализа составляет около 80%, точность биологической пробы — 100%.

Для выявления туберкулеза мочеполовой системы используется не только бактериологический, но и общий анализ мочи. Показателями заболевания являются не только микобактерии, но и характерные гвоздевидные лейкоциты, белок (протеинурия), неспецифические бактерии, повышение концентрации эритроцитов. Кислая реакция образца биоматериала наблюдается примерно в 60% случаев, поэтому не может считаться точным критерием диагностики.

Справка. Наиболее информативным показателем туберкулеза, по мнению большинства специалистов, является классическая триада: пиурия (наличие гноя в образце), альбуминурия (или следы белка), а также кислая реакция.

источник

Если Манту дала плохой результат прибегают к дополнительным методам диагностики. Главное выявить заболевание, а вопрос о том, сколько диагностическое обследование стоит, отходит на задний план. К одному из самых точных и разрешенных в любом возрасте относится ПЦР. Анализ мочи на туберкулез данным способом выявляет МКБ сразу же после их попадания в организм. Что собой представляет методика и в чем ее преимущества?

Полимеразная цепная реакция руководствуется принципом молекулярной биологии. Чтобы исследовать урину (или другой биоматериал) используют специальные ферменты. Они могут копировать ДНК микроорганизмов. Специалисты сравнивают материал с имеющейся базой и определяют, есть ли заражение. В случае положительного ответа выясняется степень инфицирования и тип возбудителя.

Тут важна точность, поэтому работники лаборатории должны иметь соответствующие знания и навыки.

Кроме туберкулеза с помощью ПЦР диагностируют и другие инфекционные болезни (гепатит, ИППП, ВИЧ, кандидоз, боррелиоз и др.).

Некоторые родители уверены, что такой метод можно использовать вместо Манту, но это не так. Даже его высокоэффективность не может заменить пробу, которая является утвержденной и обязательной во всех дошкольных и школьных учреждениях. Предоставления в детский сад или школу результата ПЦР может быть недостаточно для допуска ребенка в детский коллектив.

ПЦР мочи на туберкулез эффективный способ выявления патологии, но иногда бывают ложные результаты по отношению к маленьким детям. В этом случае наблюдаются неточности, так как в урине много примесей. Иногда для достоверности и подтверждения диагноза проводятся дополнительные обследования.

Насколько подходящий этот метод в конкретном случае подскажет фтизиатр. Именно у этого специалиста предварительно нужно пройти консультацию.

Какие-либо противопоказания отсутствуют. Делать анализ разрешено:

• у детей;
• при ОРЗ, ОРВИ, ГРИПпе, кори и пр.;
• во время аллергий и др.

Нецелесообразно проводить возрастной категории от 0 до 3-ех лет из-за получения недостоверных результатов.

Данный метод обследования выбирают чаще других из-за отсутствия в нем противопоказаний и высокого процента получения достоверных результатов.

Практика показывает, что метод оправдывает свою стоимость. Плюсы ПЦР мочи:

• чтобы вынести «вердикт» не нужно вводить в организм никакие препараты, так как анализ производят в пробирке в условиях лаборатории;
• безболезненный;
• для получения результатов не нужно ждать несколько дней, достаточно считанных часов, максимум одного дня (чего нельзя ожидать, если делать посев мочи);
• выявляет возбудитель даже тогда, когда другие методы не принесли результата;
• обнаружить болезнь можно на ранней стадии;
• анализ высокочувствителен, поэтому пропустить туберкулез сложно;
• ложные результаты наблюдаются редко (обычно вина некомпетентности медработника или неправильный сбор урины самим пациентом);
• инфекционный агент выявляется, даже если биоматериала содержится минимальное количество.

к содержанию ↑

• высокая цена (но она колеблется в зависимости от курса доллара и других факторов);
• бывают ложные результаты (около 10%).

Ложные ответы появляются по разным причинам.

1. Если сбор урины осуществлялся неверно, были нарушены рекомендации.
2. Когда работник лаборатории не имеет нужных знаний для проведения анализа или им была нарушена техника исследования материала.
3. Если в собранную порцию мочи не попали микобактерии.
4. В моче много сторонних примесей, которые искажают результат (обычно у малышей).

Все вышеперечисленное – повод использовать дополнительные диагностические мероприятия.

Как сдавать мочу? Чтобы урина не стала причиной неверного ответа, нужно осуществить правильный ее сбор. Немаловажна подготовка.

1. Если анализ планируется взрослому человеку, то за 1-2 суток до него нужно забыть о половых контактах.
2. Важно сказать врачу об антибактериальной терапии (если таковая была за последние недели). Нужно выждать не менее месяца и только потом приступать к обследованию. Любые медикаментозные препараты повлияют на результат анализа.
3. Лучшее время для сбора – утро. Предварительно не допускается употребление пищи и каких-либо напитков.
4. Половые органы предварительно не обмываются.
5. Важно приобрести специальный вакуумный набор, в который будет собираться моча. Поместить ее в обычную баночку, а потом перелить не выйдет. Вследствие этого в урину попадут бактерии или вирусы из внешней среды, которые помешают получить достоверный результат. Контакта с внешней средой нужно избегать. Специальный набор состоит из стерильной баночки с крышкой, пробирки и трубки.
6. В баночку человек опорожняет мочеиспускательный пузырь. Важно собрать первую порцию урины.
7. После контейнер закрывается и вставляется пробирка. Она наполнится содержимым самостоятельно. Повлияет на это отрицательное давление.
8. После наполнения пробирки контейнер и трубка утилизируются.
9. Полученный биоматериал отвозится в лабораторию, где проведут сам анализ. Доставляется только пробирка с имеющейся в ней мочой.

Если обследуемый по каким-то причинам не в состоянии сам собрать мочу, ему придет на помощь специалист из клиники. Специально обученные люди приедут со всем необходимым и сделают все без ошибок.

Проведение ПЦР при туберкулезе проводится в несколько этапов. Рассмотрим каждый детально.

1. Сначала молекулы ДНК делятся на компплементарные нити путем нагревания до высоких температур.
2. Потом в полученный материал вводят праймеры. Один их тип комплементарен ДНК 1-ой цепи (ее началу), второй ДНК 2-ой (ее концу). Тут же добавляют состав из четырех типов DDNTP. Далее происходит соединение всех компонентов.
3. Состав нагревается и в него вводится термостабильная полимераза ДНК. После исследуемые пробы охлаждаются. Все это происходит в термостатах (термальных циклерах).
4. В конце специалист оценивает полученные результаты. Это делается с использованием специального геля при светящихся лучах ультрафиолета. Электрофореграмму, которую получают, анализируют и результат фиксируют.

Оборудование, с помощью которого проводится анализ дорогостоящее и присутствует не везде.

Расшифровать результат сможет только квалифицированный специалист. При этом учитывается возраст пациента. Ответ основывается на количестве имеющихся в пробе патогенных микроорганизмов.

Положительный значит, что в моче имеются МБК. Это повод либо пройти дополнительную диагностику (при необходимости), либо начинать лечение туберкулеза. У детей обычно бывают ложные результаты, поэтому назначают иные методы обследования, которые подтвердят диагноз.

При получении отрицательного ответа можно быть спокойным, инфицирования нет. При наличии симптоматики, которая говорит об обратном, обследование не заканчивается.

После того, как работник лаборатории расшифровал результат, бумага, на которой указывается ответ, направляется узкому специалисту, тому, кто давал направление на анализ. Фтизиатр изучает данный документ, на основе которого решает, что дальше делать.

Ниже можно ознакомиться с информацией о том, какие приблизительные цены на ПЦР мочи в медицинских лабораториях. Для сравнения представляем три популярных учреждения.

Из вышеописанного можно сделать вывод, что стоимость на анализ не превышает 400 рублей. Такая сумма не может остановить больного при необходимости подтверждения диагноза.

Имейте в виду! Иногда в клиниках присутствуют акции и скидки. Следить за ними можно на сайтах лабораторий, узнать в телефонном режиме или не ресепшене в самом офисе.

Анализ мочи на ПЦР – методика, которую можно применять всем без исключения. Она не рекомендована малышам, так как результат может быть ложным. Важно правильно подготовиться к анализу и собрать материал. Сбор осуществляется в домашних условиях самостоятельно, допускается помощь специалиста и забор в условиях клиники (при необходимости). Нельзя помещать урину в контейнеры, непредназначенные для анализа. Тут приобретается специальный набор. Проводят саму диагностику квалифицированные работники лаборатории, придерживаясь всех правил. Без наличия дорогостоящего оборудования исследовать урину на ПЦР будет невозможно.

Методика эффективна и способна выявить туберкулез даже тогда, когда количество микобактерий в организме минимально. Но, несмотря на это пробу Манту им заменить нельзя. Подобным способом целесообразно подтверждать диагноз или контролировать, нет ли рецидива.

источник

Полимеразная цепная реакция (далее ПЦР) — это высокоточный метод молекулярно-генетического исследования материла, который позволяет выявить у человека различные инфекционные заболевания и установить генотип возбудителя.

ПЦР для выявления различных заболеваний стала применяться в самом конце прошлого века. Первооткрывателем этого метода исследования является американский биохимик Кэри Муллис. Свое открытие он сделал в 1983 году. Но еще несколько лет понадобилось, чтобы доработать метод.

С помощью ПЦР-диагностики можно обнаружить фрагменты чужеродного ДНК в любой жидкой среде организма. На анализ могут быть взяты такие жидкости:

• Кровь.
• Слюна.
• Мокрота.
• Выделения из половых органов.
• Смывная жидкость бронхов.
• Желудочный сок.

Лечащий врач сам определяет, какую биологическую жидкость лучше взять на анализ при конкретном заболевании.

ПЦР-диагностика позволяет не только обнаружить микрофрагменты чужеродной ДНК, но и определить к какому конкретному виду она относится. То есть с помощью ПЦР можно не только точно установить возбудителя заболевания, но и выяснить к какому виду он принадлежит.

Процесс анализа ПЦР — очень сложный. Он состоит из нескольких этапов:

1. Сначала нужно обнаружить фрагменты вредоносной ДНК в предоставленном образце.
2. Копирование фрагмента ДНК. Маленького участка ДНК для анализа недостаточно, поэтому его копируют. Нуклеиновая кислота может копироваться в пробирке с помощью фермента полимеразы (вне живого организма). В пробирке образуется множество клонов, то есть происходит цепная реакция. Весь процесс происходит в три этапа под воздействием различных температур.
3. Когда генетического материала становится достаточно для исследования, тогда возбудитель определяется обычными методами.

Метод ПЦР очень точен и может выявить наличие любого возбудителя по небольшому фрагменту ДНК или РНК.

ПЦР-анализ на туберкулез является самым информативным методом диагностирования этого заболевания. Относительно туберкулеза этот метод позволяет не только установить наличие микобактерий в организме, но и определить к какому виду они принадлежат.

Результат ПЦР диагностики может быть простой и расширенный. В простом результате указывается только наличие/отсутствие микобактерии. Расширенный результат дает представление о дополнительных параметрах протекания заболевания. Правильно понять, что написано в результате анализа ПЦР может только фтизиатр.

ПЦР-диагностика туберкулеза не проводится всем без исключения. Это объясняется дороговизной реактивов и недоступностью проведения исследования в некоторых отдалённых районах (в таких местах пользуются другими методами диагностики).

Показаниями для проведения ПЦР-исследования являются:

• Длительный контакт с больным туберкулезом.
• Беременность. ПЦР крови на туберкулез является самым быстрым и безопасным методом для беременной женщины.
• Экстренная ситуация. Например, необходимость срочного оперативного вмешательства, при котором нужно точно установить наличие/отсутствие туберкулеза в организме.
• Аллергическая реакция на туберкулиновые пробы.
• ВИЧ-инфекция.
• Невозможность диагностирования заболевания другими способами, при наличии явных признаков туберкулеза.
• Неоднозначные симптомы, которые не позволяют создать четкую клиническую картину заболевания (болезни верхних дыхательных путей, сопровождающиеся большим количеством мокроты, кровохарканьем и пр.).

Метод ПЦР, при всей своей сложности и дороговизне, проводится и расшифровывается в течение нескольких часов. Что делает этот метод золотым стандартом при диагностике туберкулезной инфекции.

Забор материала — это первый этап при выполнении ПЦР-исследования. Для того, чтобы выполнить качественный анализ, нужно соблюдать определенные правила по сбору материла:

• Для ПЦР мокроты на туберкулез нужно тщательно провести туалет полости рта. Делать это нужно вечером и утром перед анализом. Все это время не есть. Вечером выпить муколитическое средство для лучшего отхождения мокроты.
• Перед сдачей крови на ПЦР нужно не употреблять пищу в течение 8 часов. Лучше всего производить забор крови утором натощак. Курить перед забором крови также нельзя. Кровь берется из вены на локтевом сгибе руки в стерильную пробирку. В эту же емкость добавляется антикоагулянт, чтобы кровь оставалась жидкой. Смешивать антикоагулянт с кровью нужно очень аккуратно, не делая резких движений. Если кровь была взята не в лабораторных условиях, то она должна быть предоставлена лаборанту до истечения пятичасового срока. Иначе результат может быть не точным.
• Моча собирается в стерильную емкость утром, до приема пищи. Перед сбором мочи необходим тщательный туалет промежности.
• Остальные виды жидкостей (смывы с бронхов, спинномозговая жидкость) может собрать только специалист в условиях стационара.
• Перед забором жидкостей на ПЦР-исследование запрещено принимать некоторые препараты (например, прием некоторых антибиотиков нужно прекратить за две недели до забора материала).
• Требования к лаборатории, в которой проводится забор анализов на ПЦР очень строгие. Лаборатория должна быть стерильна, чтобы не произошло перекрестное загрязнение материала. В этом случае результаты могут быть ложноположительными.

ПЦР-тест на туберкулез — высокоточный информативный анализ. И требования к его проведению крайне строгие. Чтобы анализ получился, нужно соблюдать регламент.

Для работы в ПЦР-лаборатории приглашаются специально обученные врачи: бактериологи, вирусологи, микробиологи. Все они прошли дополнительное обучение для работы на сложном оборудовании.

Лаборатория должна иметь лицензию на выполнение работ связанных с бактериологически-опасными вирусами и бактериями.

В самой лаборатории должны быть выделены такие рабочие зоны:

• Зона приемки и сортировки проб.
• Зона подготовки проб. В этом помещении выделяются нуклеиновые кислоты из образцов материала.
• Зона проведения реакционных проб.
• Зона для учета результатов и расшифровки анализов.

Все помещения располагают последовательно. Допуск в эти зоны разрешен только работающим там сотрудникам, которые при входе соблюдают правила личной защиты от бактерий и вирусов.

Лучше, если есть возможность расположить лабораторию в отдельно стоящем здании с собственной системой вентиляции.

В лаборатории соблюдаются стерильные условия работы, чтобы избежать перекрестного загрязнения проб. Даже если один фрагмент чужеродной ДНК попадет в исследуемый материал, ПЦР его размножит, и анализ получится ложноположительным.

В каждой зоне лаборатории имеется свой набор оборудования и посуды для проведения исследований. Также имеются свои холодильники, которые не могут быть использованы в других целях, кроме хранения материала конкретной зоны исследований.

Использованные расходные материалы и остатки биологического материала уничтожаются специальными способами, в соответствии с инструкциями.

ПЦР-тест на туберкулез имеет множество плюсов, которые делают этот метод диагностики все более востребованным:

• Срок проведения. Несмотря на сложность проведения анализа, он готовится намного быстрее других лабораторных методов диагностики туберкулеза (около пяти часов). Это свойство анализа ПЦР становится особенно важным, когда анализ необходимо провести экстренно.
• Анализ ПЦР абсолютно безопасен и может проводиться беременным женщинам и детям.
• ПЦР-исследование можно сделать, когда по каким-то причинам нельзя выполнить другие методы диагностики.
• С помощью ПЦР-диагностики можно провести исследование любой биологической жидкости на выбор. В некоторых случаях это имеет большое значение.
• Позволяет обнаружить возбудителя на любой фазе заболевания. Даже после проведенного лечения, сохранившиеся остатки ДНК мертвых микобактерий будут обнаружены.
• Высочайшая чувствительность этого метода позволяет обнаруживать в биологическом материале даже единичные фрагменты ДНК микроорганизмов.
• Метод ПЦР позволяет не только обнаружить присутствие заболевания, но и может определить генотип возбудителя, отличив его от похожих микроорганизмов.
• ПЦР-исследование очень эффективно при рецидивирующем течении заболевания.
• Благодаря высочайшей чувствительности, анализ ПЦР может распознать микобактерии в организме человека, когда он только недавно инфицировался туберкулезом, задолго до появления клинических симптомов.

Казалось бы, метод ПЦР-диагностики содержит в себе только плюсы, но это не так.

Минусы этого метода исследования тоже существенны. При выборе метода исследования туберкулеза это также стоит учитывать:

• Это дорогостоящий метод исследования. Для проведения ПЦР-диагностики нужна специально-оборудованная лаборатория. Оборудование для таких исследований стоит очень дорого, и не во всякой лаборатории оно имеется. В крайнем случае, можно обратиться в платную лабораторию.
• Сразу же после проведенного лечения метод ПЦР применять не рекомендуется. В крови пациента некоторое время сохраняется небольшое количество живых и мертвых микобактерий. Если провести анализ в этот период, он покажет ложноположительный результат.
• При мутациях микобактерий, анализ будет недостоверным, так как нормальная ДНК не сможет синтезироваться.
• Для ПЦР-исследования имеет значение правильный выбор биологической жидкости на анализ.
• Сверхчувствительность. Это тот случай, когда достоинство метода становится его недостатком. Если при проведении анализа в биологический материал каким-то образом попадет даже единичный фрагмент чужеродного ДНК, то ПЦР его размножит, и будет получен ложный результат.

ПЦР-лаборатория имеется только в крупных противотуберкулезных диспансерах и диагностических центрах.

Объясняется это высокой стоимостью оборудования и высокими требованиями к содержанию лаборатории (реактивы, обработка).

Медицинские чиновники не сильно переживают из-за отсутствия ПЦР-лаборатории в каком-то конкретном населенном пункте, поскольку анализы на туберкулёз можно провести другими методами (культивирование микобактерий, микроскопическое исследование).

Если в населённом пункте нет бесплатной ПЦР-лаборатории, пациент по желанию может обратиться в платное учреждение.

В последнее время ПЦР-диагностика занимает все более прочные позиции в диагностике туберкулеза и других заболеваний, отодвигая на задний план другие методы диагностики.

источник

На данный момент существует достаточное количество лабораторных способов определения бактерий Коха. У каждого имеются определенные преимущества и недочеты, например, требуется наличие определенной концентрации клеток в пробе или достаточное время для культивирования.

На данный момент более приемлемым анализом считается ПЦР на туберкулез, который характеризуется высокой результативностью (100%) даже при наличии небольшого количества фрагментов генетического аппарата микобактерий Mycobacterium tuberculosis. Полимеразная цепная реакция дает возможность выявлять ограниченные и диссеминированные формы патогенеза, что важно при обследовании детей, когда микробиологическая диагностика не дала результата.

Туберкулез – инфекционное заболевание, вызываемое микобактерией – палочка Коха. Чаще поражаются легкие, но очаги могут быть и в других тканях. Передается респираторно, а также со слюной, кровью, при совместном использовании бытовых приборов и тесном контакте в быту.

Заболевание протекает в двух формах:

1. Закрытая стадия. Больной при контакте не опасен для окружающих. В мокроте анализы не выявляются признаки возбудителей, ложной будет и ПЦР диагностика на туберкулез. При отсутствии лечения патогенез усугубляется.
2. Открытая стадия. Палочка Коха присутствует в биологических жидкостях человека, легко диагностируется лабораторными методиками. В таком состоянии человек является опасным для окружающих.

Обратите внимание. Поскольку начало туберкулеза легких протекает латентно, то проводится скрининг. Взрослые люди должны раз в год или два (зависит от региона проживания) проходить флюорографию, которая показывает наличие инфильтрата в тканях. Это дешёвый и быстрый способ диагностики.

На данный момент для выявления опасных микобактерий проводят ряд анализов:

• методы рентгенографии;
• КТ или МРТ;
• туберкулиновые пробы (реакция Манту).

Однако именно анализ крови на ПЦР на туберкулез дает наиболее достоверный результат, причем определяет наличие инфекции вне зависимости от локации очага.

Врач фтизиатр, пульмонолог или терапевт может направить больного на прохождение диагностики при наличии подозрений.

Кроме этого, тест ПЦР на туберкулез требуется, если:

• возможны внелегочные очаги;
• наличие признаков бактериемии на фоне туберкулезной инфекции (субфебрилитет, потливость и прочие);
• при регулярном контакте с инфицированным человеком;
• при ВИЧ-инфекции;
• ПЦР диагностика туберкулеза у детей показана при ненормальной реакции на пробу Манту;
• сильные увеличения лимфоузлов при заболевании нижних дыхательных путей (прикорневые воспаления легких, бронхиты);
• кровохарканье при этом человек слаб и быстро утомляется;
• длительный кашель после острых бронхитов и пневмоний.

Полимеразная цепная реакция основана на узнавании целых цепочек бактериальной ДНК и РНК или их фрагментов, находящихся в крови пациента или других биологических жидкостях:

• мокрота;
• легочные и бронхиальные смывы;
• моча.

Обратите внимание. Высокая результативность данной методики основана на принципе работы фермента полимеразы (основная функция сборка нуклеиновых молекул). Она может узнавать даже самые мелкие фрагменты генного материала возбудителя. Поэтому результат будет положительный или отрицательный.

Преимущества анализа ПЦР на микобактерии туберкулеза:

• выявление специфических последовательностей ДНК микобактерий;
• точность – 98%;
• чувствительность анализа не менее 100 ДНК-копий в 5 мкл пробе, прошедшей особую обработку;
• срочный анализ дает возможность получить результат в течение 4 ч., после забора крови.

Использование полимеразной цепной реакции существенно облегчило определение многих заболеваний (не только туберкулеза). Причем метод позволяет регистрировать наличие патогена на самых начальных стадиях патогенеза, когда нет еще никаких признаков. Гарантированность результата обеспечивается благодаря тому, что полимераза среди тысяч клеток может находить по определенному маркеру комплементарные (подходящие) только ей последовательности бактериальных генов или даже их фрагменты.

Помимо этого, ПЦР при туберкулезе помогает выяснить уровень резистентности к назначенной терапии и скорректировать лечение, что в разы повышает его эффективность. Длительность такого анализа три, максимум четыре дня, но при этом врач получает данные, существенно меняющие качество противотуберкулезной терапии. Более подробно обо всех нюансах полимеразной цепной реакции изложено на видео в этой статье.

Инструкция проведения анализа на данный момент не представляет особой сложности: сначала проводится отбор исследуемого материала, после чего выделяется ДНК и проводится его классификация по типу патогенной бактерии. Основные моменты указаны в таблице.

Таблица. Как проводится анализ ПЦР на туберкулез:

Полученный материал должен быть на несколько минут нагрет до высоких температур (97º С). Такая мера нужна для расщепления парных молекул нуклеиновых кислот на отдельные цепи (разрыв спирали). Это нужно для того, чтобы полимераза начала работу. При понижении температуры особая молекулярная структура праймер, ассоциируется с одной из свободных цепей ДНК, что позволит в дальнейшем инициировать сборку новой спирали. Если полимераза нашла нужные бактериальные последовательности и начала сборку, то результат положительный, в противном случае отрицательный.