Пцр плевральной жидкости на туберкулез

Полимеразная цепная реакция (далее ПЦР) — это высокоточный метод молекулярно-генетического исследования материла, который позволяет выявить у человека различные инфекционные заболевания и установить генотип возбудителя.

ПЦР для выявления различных заболеваний стала применяться в самом конце прошлого века. Первооткрывателем этого метода исследования является американский биохимик Кэри Муллис. Свое открытие он сделал в 1983 году. Но еще несколько лет понадобилось, чтобы доработать метод.

С помощью ПЦР-диагностики можно обнаружить фрагменты чужеродного ДНК в любой жидкой среде организма. На анализ могут быть взяты такие жидкости:

• Кровь.
• Слюна.
• Мокрота.
• Выделения из половых органов.
• Смывная жидкость бронхов.
• Желудочный сок.

Лечащий врач сам определяет, какую биологическую жидкость лучше взять на анализ при конкретном заболевании.

ПЦР-диагностика позволяет не только обнаружить микрофрагменты чужеродной ДНК, но и определить к какому конкретному виду она относится. То есть с помощью ПЦР можно не только точно установить возбудителя заболевания, но и выяснить к какому виду он принадлежит.

Процесс анализа ПЦР — очень сложный. Он состоит из нескольких этапов:

1. Сначала нужно обнаружить фрагменты вредоносной ДНК в предоставленном образце.
2. Копирование фрагмента ДНК. Маленького участка ДНК для анализа недостаточно, поэтому его копируют. Нуклеиновая кислота может копироваться в пробирке с помощью фермента полимеразы (вне живого организма). В пробирке образуется множество клонов, то есть происходит цепная реакция. Весь процесс происходит в три этапа под воздействием различных температур.
3. Когда генетического материала становится достаточно для исследования, тогда возбудитель определяется обычными методами.

Метод ПЦР очень точен и может выявить наличие любого возбудителя по небольшому фрагменту ДНК или РНК.

ПЦР-анализ на туберкулез является самым информативным методом диагностирования этого заболевания. Относительно туберкулеза этот метод позволяет не только установить наличие микобактерий в организме, но и определить к какому виду они принадлежат.

Результат ПЦР диагностики может быть простой и расширенный. В простом результате указывается только наличие/отсутствие микобактерии. Расширенный результат дает представление о дополнительных параметрах протекания заболевания. Правильно понять, что написано в результате анализа ПЦР может только фтизиатр.

ПЦР-диагностика туберкулеза не проводится всем без исключения. Это объясняется дороговизной реактивов и недоступностью проведения исследования в некоторых отдалённых районах (в таких местах пользуются другими методами диагностики).

Показаниями для проведения ПЦР-исследования являются:

• Длительный контакт с больным туберкулезом.
• Беременность. ПЦР крови на туберкулез является самым быстрым и безопасным методом для беременной женщины.
• Экстренная ситуация. Например, необходимость срочного оперативного вмешательства, при котором нужно точно установить наличие/отсутствие туберкулеза в организме.
• Аллергическая реакция на туберкулиновые пробы.
• ВИЧ-инфекция.
• Невозможность диагностирования заболевания другими способами, при наличии явных признаков туберкулеза.
• Неоднозначные симптомы, которые не позволяют создать четкую клиническую картину заболевания (болезни верхних дыхательных путей, сопровождающиеся большим количеством мокроты, кровохарканьем и пр.).

Метод ПЦР, при всей своей сложности и дороговизне, проводится и расшифровывается в течение нескольких часов. Что делает этот метод золотым стандартом при диагностике туберкулезной инфекции.

Забор материала — это первый этап при выполнении ПЦР-исследования. Для того, чтобы выполнить качественный анализ, нужно соблюдать определенные правила по сбору материла:

• Для ПЦР мокроты на туберкулез нужно тщательно провести туалет полости рта. Делать это нужно вечером и утром перед анализом. Все это время не есть. Вечером выпить муколитическое средство для лучшего отхождения мокроты.
• Перед сдачей крови на ПЦР нужно не употреблять пищу в течение 8 часов. Лучше всего производить забор крови утором натощак. Курить перед забором крови также нельзя. Кровь берется из вены на локтевом сгибе руки в стерильную пробирку. В эту же емкость добавляется антикоагулянт, чтобы кровь оставалась жидкой. Смешивать антикоагулянт с кровью нужно очень аккуратно, не делая резких движений. Если кровь была взята не в лабораторных условиях, то она должна быть предоставлена лаборанту до истечения пятичасового срока. Иначе результат может быть не точным.
• Моча собирается в стерильную емкость утром, до приема пищи. Перед сбором мочи необходим тщательный туалет промежности.
• Остальные виды жидкостей (смывы с бронхов, спинномозговая жидкость) может собрать только специалист в условиях стационара.
• Перед забором жидкостей на ПЦР-исследование запрещено принимать некоторые препараты (например, прием некоторых антибиотиков нужно прекратить за две недели до забора материала).
• Требования к лаборатории, в которой проводится забор анализов на ПЦР очень строгие. Лаборатория должна быть стерильна, чтобы не произошло перекрестное загрязнение материала. В этом случае результаты могут быть ложноположительными.

ПЦР-тест на туберкулез — высокоточный информативный анализ. И требования к его проведению крайне строгие. Чтобы анализ получился, нужно соблюдать регламент.

Для работы в ПЦР-лаборатории приглашаются специально обученные врачи: бактериологи, вирусологи, микробиологи. Все они прошли дополнительное обучение для работы на сложном оборудовании.

Лаборатория должна иметь лицензию на выполнение работ связанных с бактериологически-опасными вирусами и бактериями.

В самой лаборатории должны быть выделены такие рабочие зоны:

• Зона приемки и сортировки проб.
• Зона подготовки проб. В этом помещении выделяются нуклеиновые кислоты из образцов материала.
• Зона проведения реакционных проб.
• Зона для учета результатов и расшифровки анализов.

Все помещения располагают последовательно. Допуск в эти зоны разрешен только работающим там сотрудникам, которые при входе соблюдают правила личной защиты от бактерий и вирусов.

Лучше, если есть возможность расположить лабораторию в отдельно стоящем здании с собственной системой вентиляции.

В лаборатории соблюдаются стерильные условия работы, чтобы избежать перекрестного загрязнения проб. Даже если один фрагмент чужеродной ДНК попадет в исследуемый материал, ПЦР его размножит, и анализ получится ложноположительным.

В каждой зоне лаборатории имеется свой набор оборудования и посуды для проведения исследований. Также имеются свои холодильники, которые не могут быть использованы в других целях, кроме хранения материала конкретной зоны исследований.

Использованные расходные материалы и остатки биологического материала уничтожаются специальными способами, в соответствии с инструкциями.

ПЦР-тест на туберкулез имеет множество плюсов, которые делают этот метод диагностики все более востребованным:

• Срок проведения. Несмотря на сложность проведения анализа, он готовится намного быстрее других лабораторных методов диагностики туберкулеза (около пяти часов). Это свойство анализа ПЦР становится особенно важным, когда анализ необходимо провести экстренно.
• Анализ ПЦР абсолютно безопасен и может проводиться беременным женщинам и детям.
• ПЦР-исследование можно сделать, когда по каким-то причинам нельзя выполнить другие методы диагностики.
• С помощью ПЦР-диагностики можно провести исследование любой биологической жидкости на выбор. В некоторых случаях это имеет большое значение.
• Позволяет обнаружить возбудителя на любой фазе заболевания. Даже после проведенного лечения, сохранившиеся остатки ДНК мертвых микобактерий будут обнаружены.
• Высочайшая чувствительность этого метода позволяет обнаруживать в биологическом материале даже единичные фрагменты ДНК микроорганизмов.
• Метод ПЦР позволяет не только обнаружить присутствие заболевания, но и может определить генотип возбудителя, отличив его от похожих микроорганизмов.
• ПЦР-исследование очень эффективно при рецидивирующем течении заболевания.
• Благодаря высочайшей чувствительности, анализ ПЦР может распознать микобактерии в организме человека, когда он только недавно инфицировался туберкулезом, задолго до появления клинических симптомов.

Казалось бы, метод ПЦР-диагностики содержит в себе только плюсы, но это не так.

Минусы этого метода исследования тоже существенны. При выборе метода исследования туберкулеза это также стоит учитывать:

• Это дорогостоящий метод исследования. Для проведения ПЦР-диагностики нужна специально-оборудованная лаборатория. Оборудование для таких исследований стоит очень дорого, и не во всякой лаборатории оно имеется. В крайнем случае, можно обратиться в платную лабораторию.
• Сразу же после проведенного лечения метод ПЦР применять не рекомендуется. В крови пациента некоторое время сохраняется небольшое количество живых и мертвых микобактерий. Если провести анализ в этот период, он покажет ложноположительный результат.
• При мутациях микобактерий, анализ будет недостоверным, так как нормальная ДНК не сможет синтезироваться.
• Для ПЦР-исследования имеет значение правильный выбор биологической жидкости на анализ.
• Сверхчувствительность. Это тот случай, когда достоинство метода становится его недостатком. Если при проведении анализа в биологический материал каким-то образом попадет даже единичный фрагмент чужеродного ДНК, то ПЦР его размножит, и будет получен ложный результат.

ПЦР-лаборатория имеется только в крупных противотуберкулезных диспансерах и диагностических центрах.

Объясняется это высокой стоимостью оборудования и высокими требованиями к содержанию лаборатории (реактивы, обработка).

Медицинские чиновники не сильно переживают из-за отсутствия ПЦР-лаборатории в каком-то конкретном населенном пункте, поскольку анализы на туберкулёз можно провести другими методами (культивирование микобактерий, микроскопическое исследование).

Если в населённом пункте нет бесплатной ПЦР-лаборатории, пациент по желанию может обратиться в платное учреждение.

В последнее время ПЦР-диагностика занимает все более прочные позиции в диагностике туберкулеза и других заболеваний, отодвигая на задний план другие методы диагностики.

источник

Оценка анализа N-ПЦР при диагностике плеврального туберкулеза: обнаружение M.tuberculosis в плевральной жидкости и мокроте, собранной в тандеме

Задуманные и разработанные эксперименты: ПК HKP. Выполнены эксперименты: ПК DSC VMK. Проанализированы данные: ПК MKS DSC VMK HKP. Используемые реагенты / материалы / инструменты анализа: MKS DSC VMK SS HKP. Написал бумагу: ПК HKP.

Неспецифическое клиническое проявление и paucibacillary характер туберкулезного плеврита остается проблемой для диагностики. Диагностика туберкулезного плеврального выпота зависит от проявления наличия туберкулезных бацилл в мокроте, плевральной жидкости или плевральной биопсии или демонстрации гранулемы в плевре путем гистологического исследования. Мы изучили клиническую полезность диагностики плеврального туберкулеза с использованием анализа N-ПЦР в домашних условиях, микроскопии мазка и культивирования АФБ. Помимо плевральной жидкости было изучено включение мокроты в эффективность диагностики плеврального туберкулеза.

Образцы плевральной жидкости и мокроты из 58 туберкулезных и 42 негрубистых пациентов с плевральным выпотом были обработаны для микроскопии мазка AFB, культуры и анализа N-ПЦР. Микобактерии были обнаружены исключительно в туберкулезных образцах плевральной эффузии. Ни один из образцов, не являющихся туберкулезными плевральными выпотами, был положительным для микобактерий. Сравнительный анализ показал, что анализ Н-ПЦР имел наивысшую чувствительность. Включение мокроты вместе с плевральной жидкостью увеличило чувствительность N-ПЦР от 51,7 до 70,6% (p 3 г / дл) и плевральной жидкости: соотношение сывороточного белка (> 0,5); и (4) реакция пациентов на противотуберкулезное лечение. Туберкулезный плевральный выпот был диагностирован, если был определен окончательный критерий или все наводящие критерии. Исходя из этих критериев, 58 пациентов были классифицированы как пациенты с туберкулезным плевральным выпотом. Слюна, а также плевральная жидкость были собраны у всех из них и исследованы [6] — [7].

Критерии, используемые для злокачественного плеврального выпота (контроль), были: (i) клиническая история, указывающая на быстрое наполнение плеврального выпота; с очаговым злокачественным поражением или без него в другом месте тела. (ii) Плевральная жидкость является экссудативной, обычно геморрагической и (iii) на цитологическом исследовании положительным для злокачественных клеток. Исходя из этих критериев, 42 пациента были классифицированы как не туберкулезные плевральные выпоты (N-TPE). В двенадцати из этих пациентов мокрота была собрана в дополнение к плевральной жидкости.

Все клинические образцы были обработаны в установке Biosafty level 3 (BSL-3). После сбора образцы транспортировали при 4-8 ° С и выдерживали при этой температуре в установке до тех пор, пока они не были обработаны для выделения и экстракции ДНК. Все образцы обрабатывали в течение 24 часов после сбора свежеприготовленными реагентами. Только 2-3 клинических образца обрабатывались одновременно, чтобы свести к минимуму перекрестное загрязнение образцов обученным персоналом.

100 образцов плевральной жидкости были обработаны методом NALC-NaOH [12]. Короче говоря, плевральную жидкость центрифугировали при 4500 g в течение 15 мин. Осадок обрабатывали равным объемом N-ацетил-L-цистеина-NaOH (конечная концентрация NALC-NaOH, NaOH, 2%) в течение 15 мин при комнатной температуре и нейтрализовали стерильным фосфатным буфером (0,067 М, рН 6,8). После центрифугирования при 4500 г в течение 15 мин осадок ресуспендировали в 1 мл стерильной дистиллированной воды [13]. Суспензия была разделена на две части. Одна часть была использована для микроскопии мазка AFB и в качестве инокулятов для выделения AFB культурой на средах Lowenstein Jensen и 7H9 или в трубах MGIT (система BD BACTEC MGIT 960). Вторая часть была использована для экстракции ДНК. Слишком обработана мокрота, собранная у 70 пациентов.

Быстрое окрашивание кислоты Ziehl-Neelsen использовалось для подтверждения присутствия AFB.

Как описано, обработанные клинические образцы (плевральная жидкость и мокрота), полученные из 69 пациентов с плевральным выпотом, инокулировали на средах LJ и жидкой средой 7H9 и инкубировали при 37 ° C в течение 8 недель. LJ-уклоны проверяли два раза в неделю на видимые колонии и подвергали скринингу на AFB окрашиванием ZN. Жидкую среду исследовали в одинаковые моменты времени для роста. Трубы, демонстрирующие видимый рост, подвергали скринингу для AFB окрашиванием ZN. Положительные жидкие культуры были субкультивированы на средах LJ для выделения микобактерий. После доступа к автоматизированной системе концентрированные клинические образцы (0,5 мл), полученные от 31 пациента с плевральным выпотом, инокулировали в среду MGIT, содержащую смесь антибиотиков PANTA в соответствии с рекомендациями производителей и постоянно контролируемую в системе MGIT 960 (BD BACTEC ™ MGIT ™ 960 система для тестирования микобактерий, США).

Идентификация уровня изолятов проводилась стандартными биохимическими испытаниями (производство ниацина, восстановление нитратов, активность каталазы и арилсульфатазы, гидролиз Твин, чувствительность гидразида тиопена-2-карбоновой кислоты и т. Д.), Как рекомендовано Центрами по контролю и профилактике заболеваний (CDC), Атланта, штат Джорджия, с соответствующими контролями [14]. Для этой части исследования использовались микобактериальные колонии, полученные из среды LJ.

Колонии Mtb H37Rv & Mbo AN5, суспендированные в 100 мкл 0,1% тритона Х-100, кипятили в сухом бане (90 ° С в течение 40 минут), центрифугировали (10000 г, в течение 10 мин) и супернатант аликвотировали и хранили при -20oC. Супернатант использовали в качестве ДНК-мишени в ПЦР-анализе. Mtb H37Rv & Mbo AN5 штаммы были получены от Национального института JALMA для лечения проказы и других микобактериальных заболеваний (ICMR), Агра, Индия. Кроме того, в качестве контроля использовались также культуры Mtb. ДНК Mycobacterium tuberculosis H37Rv, полученная из «Материалов исследования туберкулеза и тестирования вакцин».

Шаблон ДНК из клинических образцов :. Вторую порцию суспензии, полученной из обработанных клинических образцов, центрифугировали. Осадок суспендировали в 100 мкл 0,1% тритона Х-100 и кипятили в сухом бане (90 ° С в течение 40 минут). Суспензию центрифугировали и обрабатывали, как описано для экстракции ДНК для ДНК контрольного шаблона.

Детали анализа были описаны ранее [10]. Праймеры N (5′-GAGGGTTGGGATGAACAAAGCAG-3 ‘) и S (5′-TATCCGTGTGTCTTGACCTATTTG-3′) использовали для амплификации гена hupB. Усиленный продукт ПЦР N-S использовали в качестве матрицы для N-ПЦР. Использовалась пара праймеров для N-PCR F (5’-CCAAGAAGGCGACAAAGG-3 ‘) и R (5′-GACAGCTTTCTTGGCGGG-3’). Продукты N-ПЦР подвергали электрофорезу на 10% полиакриламидном геле и окрашивали бромидом этидия. Размер ампликона для Mtb и Mbo составлял

116 bp и 89 bp соответственно [15]. Для анализа N-ПЦР обычно включали следующие элементы контроля: отрицательный контроль (с отсутствующей матричной ДНК) был включен в анализ, чтобы исключить появление ложных срабатываний. Для исключения случаев ложноотрицательных результатов в исследовании было включено ограничение на шипы из-за наличия ПЦР-ингибиторов в ДНК-экстрактах образцов. Помимо этих двух контролей положительный контроль с ДНК-мишенью был включен в каждый анализ [10].

Все статистические анализы проводились с использованием программного обеспечения STATA версии 9.2 (StataCorp, College Station, TX). Для всех анализов считалось, что значения p менее 0,05 указывают на статистическую значимость.

Распределение по полу и возрасту 100 пациентов с плевральным выпотом было следующим: 35 женщин и 65 мужчин со средним возрастом 42 ± 8,8 и 40 ± 4,3 соответственно. На основании клинических критериев описано, что 58 пациентов были классифицированы как TPE, а остальные — как N-TPE. AFB был обнаружен микроскопией мазка и / или культурой в 16 образцах (мокрота / плевральная жидкость), полученных от пациентов с ТПЭ. Эти индивидуумы считались окончательными / подтвержденными случаями плеврального туберкулеза (16/58, 27,5%). Оставшиеся 42 в категории TPE рассматривались как вероятные случаи плеврального туберкулеза (42/58, 72,4%). Результаты N-ПЦР сравнивали с: (i) клиническим диагнозом; (ii) улучшение обнаружения микобактерий в образцах мокроты, кроме плевральной жидкости; (iii) пациенты, выделенные как положительные AFB (подтвержденные ТБ плевры) Vs AFB отрицательный (вероятный туберкулез плевры); и (iv) биохимическая характеристика изолятов AFB.

N-ПЦР, культуральная и микроскопическая мазка микроскопии AFB сравнивались и были показаны в таблице 1. В 31 образце микобактерии были обнаружены либо с помощью микроскопии мазка N-PCR / культура / AFB. Эти 31 образец были получены из 58 клинически диагностированных туберкулезных пациентов с плевральным выпотом (TPE). Напротив, никаких микобактерий не было обнаружено в 42 образцах, полученных от пациентов, не являющихся туберкулезными плевральными выпотами (N-TPE, контрольные образцы).

ЗАМЕТКА. Клинический диагноз, Классификация пациентов и контроль, как описано в методах; PPV, положительное прогностическое значение; NPV, отрицательная прогностическая ценность; Чувствительность, TP / (TP + FN) x 100, где T истинно, F ложно, P положительно, а N отрицательно; Специфичность TN / (TN + FP) x 100; N-ПЦР, 116 bp-ампликона, генерируемого методом Nested-PCR, специфичным для Mycobacterium tuberculosis; Культура, AFB Рост обнаружен на LJ, 7H9 и / MGIT; AFB, кислотные быстрые бациллы.

По данным N-ПЦР 51,7% (30/58) образцов плевральной жидкости, полученных из ТПЭ, были положительными для Mtb по сравнению с 10,3% (6/58) культивированием и 3,4% (2/58) методом микроскопии мазка AFB. В образце плевральной жидкости отрицательным методом N-PCR AFB, выделенный из образца, впоследствии был идентифицирован как Mycobacterium fortuitum (образец № SPF-8). Были получены шесть изолятов, по два по каждой из труб LJ, 7H9 и MGIT соответственно. Все анализы показали идентичную специфичность и положительное прогностическое значение (PPV), но отличались своей чувствительностью и отрицательным прогностическим значением (NPV). Анализ N-ПЦР показал самую высокую чувствительность (51,7%) по сравнению с культурой (10,3%) и микроскопией мазка AFB (3,4%, таблица 1).

Основываясь на критериях, описанных в методах, распределение 70 образцов мокроты, собранных у пациентов с плевральным выпотом, показано в таблице 2. Пятьдесят восемь образцов мокроты были получены у пациентов с туберкулезным выпотом плевры, а 12 — с не туберкулезным плевральным выпотом. Идентичные методы были использованы для обнаружения Mtb в этих образцах мокроты, как описано ранее. Из 70 проанализированных образцов в 33 образцах Mycobacteria была обнаружена либо с помощью микроскопии мазка N-PCR / Culture / AFB. Все 33 положительных образца были получены из TPE. Двенадцать образцов, собранных из N-TPE, были отрицательными.

ЗАМЕТКА. Клинический диагноз, Классификация пациентов и контроль, как описано в методах; PPV, положительное прогностическое значение; NPV, отрицательная прогностическая ценность; Чувствительность, TP / (TP + FN) x 100, где T истинно, F ложно, P положительно, а N отрицательно; Специфичность TN / (TN + FP) x 100; N-ПЦР, 116 bp-ампликона, генерируемого методом Nested-PCR, специфичным для Mycobacterium tuberculosis; Культура, AFB Рост обнаружен на LJ, 7H9 и / MGIT; AFB, кислотные быстрые бациллы.

Используя N-ПЦР-анализ, 53,4% (31/58) образцов мокроты были положительными для микобактерий по сравнению с 12,1% (7/58) культивированием и 6,9% (4/58) с помощью микроскопии мазка AFB. Семь изолятов были получены, по два от LJ, 7H9 и три из труб MGIT соответственно. Из 33 образцов, в которых были обнаружены микобактерии, два образца были отрицательными с помощью анализа N-ПЦР. В одном образце выделенный AFB был идентифицирован как Mycobacterium chelonae (образец № SPF-80). Второй образец был положительным AFB, но культурой и отрицательным N-ПЦР (образец № SPF-18). Как было замечено ранее, три метода, используемые для обнаружения микобактерий в образцах мокроты, показали сходный диапазон специфичности, PPV и чувствительность. Все три метода показали 100% специфичность и PPV, и их чувствительность составляла 53,4% по анализу N-ПЦР, 12,1% по культуре и 6,9% с помощью микроскопии мазка AFB.

источник

Анализ плевральной жидкости на микобактерии туберкулеза

(информация для специалистов)

Анализ плевральной жидкости на микобактерии назначается в случае любого определенного физикально и подтвержденного рентгенологически скопления жидкости между листками плевры. Целью этого исследования является обнаружение кислотоустойчивой микобактерии туберкулеза.

Туберкулезный плеврит представляет собой воспалительную реакцию плевры, вызванную микобактерией туберкулеза, попавшей туда лимфогенным или гематогенным путем. Часто возникает у молодых людей и присоединяется к туберкулезу легких.

Выделяют 3 варианта течения туберкулезного плеврита:

— аллергический (возникает рано при свежем заражении или хроническом течении),

— перифокальный (часто сочетается с туберкулезом легких, имеет скудную симптоматику),

— туберкулез плевры (может быть как самостоятельным заболеванием, так и сочетаться с туберкулезом других органов).

Туберкулез является инфекционным заболеванием, которое вызывается Mycobacterium tuberculosis .

Заражение в основном происходит воздушно-капельным путем от больного человека (возможны также алиментарный, контактный и трансплацентарный пути, но они встречаются значительно реже).

В ответ на попадание возбудителя в организме начинает формироваться иммунный ответ. При снижении иммунитета проявляются признаки заболевания. Формируется очаг в легких, поражаются лимфатические узлы, микобактерии попадают в венозное русло и распространяются по организму.

Кроме того, распространению заболевания способствуют:

— проведение иммуносупрессивной терапии, прием глюкокортикостероидов

— наличие заболеваний, снижающих иммунитет, в том числе ВИЧ

— отказ от проведения вакцинации БЦЖ

— алкоголь, курение, употребление наркотиков и несоблюдение социально-гигиенических норм.

Туберкулез является социальным заболеванием, то есть его распространение на определенной территории зависит от социально-экономического развития (чем оно ниже, тем выше заболеваемость). В настоящее время в России определяется очень высокий уровень заражения туберкулезом, в том числе и детей. В связи с высокой устойчивостью возбудителя к антибиотикам, несвоевременным выявлением заболевших, а также повышением уровня недообследованных граждан из других стран повысился процент заболеваний социально-благополучных граждан. Этому также способствуют стрессы, переутомление, наличие хронических заболеваний.

Для профилактики заболевания обязательно ежегодное проведение флюорографического обследования взрослого населения, а кроме того рекомендовано проведение пробы Манту детям 1 раз в год.

Анализ плевральной жидкости на микобактерии туберкулеза производится с помощью бактериоскопического метода при окрашивании мазков по Цилю-Нильсену.

Суть метода основана на кислотоустойчивости микобактерий туберкулеза. При окрашивании выделяют несколько этапов. Сначала происходит проникновение карболового фуксина в клетку через мембрану. Затем все некислотоустойчивые структуры клетки обесцвечиваются серной кислотой и докрашиваются раствором метиленового синего. Таким образом, все клетки и структуры приобретают синий цвет, исключение составляет лишь кислотоустойчивая микобактерия туберкулеза, окрашенная в малиново-красный цвет.

Показания для проведения исследования:

— При положительной туберкулиновой пробе.

— При контакте с больным туберкулезом.

— При выявлении экссудата после общеклинического исследования плевральной жидкости для уточнения этиологии.

Подготовка пациента к проведению исследования :

Специализированная подготовка пациента не требуется.

В норме микобактерии туберкулеза в плевральной жидкости не обнаруживаются.

Обнаружение микобактерий достоверно говорит о туберкулезном поражении плевры. Однако определяются они в плевральной жидкости редко.

Анализ результатов может проводить только врач, принимая во внимание жалобы больного, клиническую картину заболевания, а также данные других лабораторных и инструментальных исследований.

источник

Молекулярно-генетические методы обследования в дифференциальной диагностике туберкулезного экссудативного плеврита

Дата публикации: 18.01.2017 2017-01-18

Статья просмотрена: 196 раз

Иноятов А. Т., Акбарова М. С., Жумаев О. А. Молекулярно-генетические методы обследования в дифференциальной диагностике туберкулезного экссудативного плеврита // Молодой ученый. — 2017. — №2. — С. 262-264. — URL https://moluch.ru/archive/136/38090/ (дата обращения: 13.07.2019).

Актуальность: Выявление туберкулеза в биологических жидкостях (плевры, перикарда) до сих пор распространенной клинической проблемой и чаще всего основывается на результатах бактериологического и гистологического исследований. При туберкулёзном плеврите, по данным литературы, микобактерии туберкулёза (МБТ) в посевах экссудата обнаруживают у 10–15 % больных, а с использованием биопсии плевры диагноз туберкулёза устанавливают только в 60–75 % случаев [1,c.210]. Как показывает клиническая практика, диагностика туберкулёзного плеврита представляет определённые трудности, и для верификации диагноза необходим комплексный подход с использованием биохимического, цитологического, бактериологического, гистологического и иммунологического методов исследования. До настоящего времени при экссудативном плеврите в большинстве стационаров чаще всего выполняют плевральную пункцию с эвакуацией жидкости, проводят пробу Ривольта и цитологическое исследование экссудата [2, c.75]. Туберкулёзная этиология плеврита, как правило, устанавливается на основе лимфоцитарного характера экссудата, что может привести к диагностическим ошибкам.

GeneXpert считается генетическим экспресс методом, идентифицируют МТБК и делают возможным параллельную молекулярно-биологическую оценку по чувствительности к рифампицину. Xpert MTB/RIF высокочувствительный и специфичный тест определяющий одновременно МТБ комплекс и резистентность к рифампицину в течение 2 часов. Xpert MTB/RIF имея высокую скорость и чувствительность очень прост при выполнении [3, c.98].

Цель работы — определение диагностической эффективности молекулярно-генетического метода Xpert MTB/RIF в дифференциальной диагностике экссудативных плевритов.

Материалы иметоды: В отделении диагностики РСНПМЦ ФиП с 01.01.16г. по 26.12.16г. обследованы 89 больных экссудативными плевритами не уточнённой этиологии, направленных различными туберкулёзными и соматическими стационарами города Ташкента и других областей, у которых при первичном обследовании природа плеврита не установлена.

Комплексное обследование больных включало: рентгенографию и компьютерную томографию (КТ) лёгких, бактериологическое исследование мокроты или промывных вод бронхов на МБТ, фибробронхоскопию, плевральные пункции. Полученный при первой пункции плевральный экссудат исследовали на общий белок, атипичные клетки. Параллельно экссудат направляли на цитологическое исследование, выполняли бактериоскопию и посев на МБТ.

Результаты иих обсуждение: Среди всех обследованных преобладали мужчины (65 случаев 73 %), а женщины составили 27 % (24 случая). Среди мужчин преобладала возрастная категория 21–30 лет, а среди женщин 51 год и старше (Табл.1). Городских жителей было 33 (37 %), а сельских 56 (63 %). Первоначальное исследование (новые случаи) проводилось 94,4 % больным (84 случая) и повторное 5,4 % (5 случаев).

Распределение больных по возрастной категории

источник

Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC) — группа аэробных неподвижных бактерий из семейства Mycobacteriaceae, которые вызывают туберкулез. Наиболее распространенные виды Mycobacterium tuberculosis complex относятся Mycobacterium tuberculosis и Mycobacterium Bovis (штамм вакцины БЦЖ). Кроме того, известны еще 6 видов микобактерий.

Обычно микобактерии поражают легкие, но возможно развитие патологического процесса в любых органах — мочеполовой системе, центральной нервной системе, костях и/или суставах, лимфатических узлах. Путь передачи Mycobacterium tuberculosis complex — воздушно-капельный, при контакте с больным активной формой инфекции.

На фоне иммуносупрессии (снижения иммунитета) вероятность инфицирования значительно увеличивается. К категориям повышенного риска относятся ВИЧ-положительные лица, больные сахарным диабетом, заболеваниями почек, беременные и пожилые люди. Состояния после пересадки органов, прием иммунодепрессантов (препаратов, снижающих иммунитет) также увеличивают вероятность заражения Mycobacterium tuberculosis complex. Несбалансированное питание, тяжелый физический труд, алкоголизм, курение — факторы, благоприятствующие инфицированию Mycobacterium tuberculosis complex.

Часто заболевание протекает асимптоматически или латентно (так называемая тубинфицированность), но примерно в 10% случаев инфекция прогрессирует в активную форму. Смертность от прогрессирующего активного процесса при отсутствии медикаментозной терапии составляет 50%.

При туберкулезном поражении центральной нервной системы и мозговых оболочек может развивается туберкулезный менингит — воспаление мягкой оболочки головного мозга. При распространении патологического процесса и на вещество головного мозга развивается туберкулезный менингоэнцефалит. Одно из проявлений туберкулеза ЦНС — туберкулема мозга. Стоит отметить, что все эти заболевания очень опасны и требуют немедленного лечения.

Предполагается, что около трети мировой популяции инфицировано Mycobacterium tuberculosis complex, причем каждый год заражается как минимум еще 1%.

Данный анализ позволяет обнаружить микобактерии туберкулеза Mycobacterium tuberculosis complex в плевральной жидкости. Анализ помогает диагностировать туберкулез легких.

Метод ПЦР – полимеразная цепная реакция, позволяющая идентифицировать наличие в биологическом материале искомый участок генетического материала.
Подробнее о методе ПЦР — его разновидностях, преимуществах и области применения в медицинской диагностике.

Референсные значения — норма
(Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC, туберкулез), ДНК (ПЦР), качественный, плевральная жидкость)

Информация, касающаяся референсных значений показателей, а также сам состав входящих в анализ показателей может несколько отличаться в зависимости от лаборатории!

источник

Туберкулёз — специфическая инфекция, его очаг может находиться в тканях человека годами, а после чего распространиться в течение нескольких месяцев. Это хроническое заболевание, оптимальные схемы лечения которого сложно подобрать. Одна из причин этого — запоздавшая диагностика, когда микобактерии, находясь в организме человека, уже адаптировались ко многим препаратам.

Какие современные методы постановки диагноза существуют? ПЦР диагностика — что это такое? Как проводится это исследование? В каких случаях туберкулёз диагностируется этим методом и в чём его суть?

Это один из самых современных методов диагностики не только заболеваний, но и обнаружения биологического материала. ПЦР диагностика была изобретена относительно недавно. Около 30 лет назад в 1983 году американский биохимик Кэри Бэнкс Муллис предложил сложную схему восстановления биологического материала микроорганизмов по одному краткому сегменту. Благодаря своему открытию учёный был удостоен наивысшей награды — Нобелевской премии.

Что это такое — ПЦР диагностика инфекций? Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — это диагностика выявления вирусных заболеваний, основанная на методах генной инженерии. Она широко применяется в медицинской микробиологии, иммунологии и вирусологии. Метод универсальный и помогает поставить диагноз при малом количестве материала. Выявить инфекцию можно буквально в первые часы заражения ею, задолго до того, как проявятся первые симптомы заболевания.

Суть метода заключается в получении из материала от больного человека не самого возбудителя, а фрагментов генома (частиц ДНК), его биосинтезе с последующим определением к какому классу микроорганизмов принадлежит полученный генетический материал с помощью молекулярно-генетических методов.

Несмотря на то что это сложный процесс, он занимает намного меньше времени, чем многие биологические способы обнаружения возбудителей инфекций. В течение всего нескольких часов с помощью ПЦР удаётся обнаружить микроорганизм. Для этого нет необходимости выделять его из среды (крови, спинномозговой жидкости, мокроты) и долго выращивать на искусственных питательных средах. Достаточно чтобы в исследуемом материале присутствовал небольшой фрагмент нити ДНК возбудителя инфекции.

В основе реакции лежит возможность в искусственных условиях (в пробирке) создать синтез молекул нуклеиновых кислот возбудителя инфекции.

Что необходимо для проведения ПЦР?

1. Праймеры — участки ДНК, с которых и начинается биосинтез или создание.
2. Нуклеотиды или сложные соединения, которые являются основой молекулы ДНК либо РНК.
3. Полимеразная цепная реакция невозможна без присутствия полимеразы, которая представляет собой фермент ускоряющий ход ПЦР.

Как проводится молекулярная диагностика методом ПЦР? Процедура несложная и занимает короткий промежуток времени с учётом сбора материала.

1. Перед началом исследования берут необходимый биологический материал — это промывные воды бронхов, кровь, желудочное содержимое, мокрота. Тип биологического материала зависит от предполагаемого возбудителя.
2. Денатурация или разрушение первичной структуры ДНК, которая состоит из двух цепочек. Суть этого этапа — разъединить две цепи под воздействием высокой температуры (максимальная — 98 ºC, которая действует не более двух минут).
3. На следующей стадии ПЦР, под названием — отжиг, температуру снижают на несколько градусов, чтобы праймер связался с нитью ДНК.
4. Элонгация, в процессе которой происходит непосредственно синтез нужных молекул.

В результате всего 25–30 таких циклов получают нужное количество копий ДНК микроорганизмов, которые легко распознать.

Нет возможности абсолютно всем людям с подозрением на туберкулёз проводить ПЦР, так как метод требует наличия дорогостоящего оборудования. Не все государственные поликлиники могут себе позволить купить его. Кроме этого, так сложилось, что привычные методы диагностики инфекции в большинстве случаев тоже себя оправдывают.

• опрос пациента, сбор анамнеза;
• полноценный осмотр человека;
• исследование с помощью туберкулиновой пробы Манту;
• рентгенография или флюорография;
• компьютерная диагностика при необходимости;
• микробиологические методы исследования: микроскопия мазка и бактериологическое исследование мокроты.

ПЦР на туберкулёз проводится в особых случаях, когда сложно поставить диагноз или нет возможности провести другие инструментальные методы.

Несмотря на изобилие способов диагностики заболеваемость туберкулёзом продолжает расти. В настоящее время отмечается не только её рост, но и другие особенности:

• болезнь часто протекает в тяжёлой форме;
• повышается количество летальных случаев;
• всё чаще диагностируются устойчивые к современным химиопрепаратам формы заболевания.

Нежелание самих людей ежегодно проходить обычные профосмотры, отказ от вакцинации приводит к распространению туберкулёза. В таких условиях нужны быстрые, информативные и эффективные методы исследования, которые должны быть доступны для детей и взрослых. Все вышеперечисленные методы диагностики во многом уступают ПЦР.

Это исследование хоть и новое, но хорошо себя зарекомендовало, особенно в спорных случаях, когда диагноз поставить невозможно по ряду причин.

Благодаря ПЦР намного легче обнаружить в исследуемом материале ДНК возбудителя туберкулёза.

Преимущества ПЦР диагностики в следующем.

1. Это быстрый анализ. По небольшому фрагменту молекулы ДНК можно установить диагноз всего за несколько часов (около пяти), что успешно используется в экстренных ситуациях, когда, например, перед операцией нужно установить не болен ли человек туберкулёзом.
2. Анализ ПЦР допускается в случае, когда другие методы недоступны или запрещены (для обнаружения туберкулёза лёгких иногда приходится сделать несколько рентгенографических снимков, что составит большую дозу облучения).
3. С помощью ПЦР проводится исследование любой биологической среды на присутствие в ней возбудителя. К примеру, можно провести исследование спинномозговой жидкости, если есть подозрение на туберкулёзный менингит.
4. Разрешена ПЦР диагностика инфекционных заболеваний в детском возрасте, так как метод безопасен.
5. Позволяет выявить возбудителя на любой стадии развития болезни.
6. Высокая чувствительность ПЦР позволяет обнаружить микобактерии туберкулёза, даже если в биологическом материале всего несколько микроорганизмов.
7. Хорошо его проводить для диагностики рецидива заболевания.

После всего прочитанного ПЦР кажется практически идеальным методом диагностики, который должны делать всем с подозрением на туберкулёз. Но и здесь есть свои минусы, их необходимо учитывать.

В наше время такая диагностика скорее редкость, чем закономерность. И для этого есть основания.

1. Это дорогой метод исследования. Во многих поликлиниках оборудование для проведения ПЦР отсутствует из-за высокой его стоимости, но в платных лабораториях анализ всё-таки можно сделать.
2. Сразу после проведённого лечения мёртвые микобактерии или живые в незначительном количестве могут ещё присутствовать в организме человека (при проведении ПЦР диагностики результат будет положительным), поэтому в это время метод будет недостоверным, проводить его нет смысла.
3. Мутации микобактерий приводят к неэффективности ПЦР — не может синтезироваться нормальная последовательность нити ДНК.
4. Нужно правильно выбирать среду для исследования, кровь берут только при подозрении на её заражение (сепсис), нет необходимости брать мокроту если под вопросом стоит туберкулёз органов нервной системы. В таком случае ПЦР не сможет обнаружить возбудителя и диагностика будет неинформативной.

ПЦР диагностика туберкулёза проводится чаще всего в спорных случаях. Когда врачи направляют на это исследование?

1. Если сложно поставить диагноз обычными доступными методами, но был контакт с больным туберкулёзом.
2. В случае, когда человека невозможно доставить на исследование в поликлинику для прохождения рутинных привычных исследований на туберкулёз, его легче обследовать с помощью ПЦР, так как мокроту для исследования можно доставить в баночке, а диагноз подтверждается в течение нескольких часов.
3. Если человеку предстоит экстренная операция и нужно срочно выяснить болен ли он туберкулёзом.
4. При необходимости беременную женщину тоже лучше обследовать на туберкулёз с помощью ПЦР, так как метод безопасен.
5. На платной основе диагностику может пройти каждый, у кого туберкулёз не был подтверждён с помощью бактериологических методов и рентгеноскопии. Такое бывает, когда очаг в лёгких незаметен на прямом снимке, а человек при сдаче мокроты на исследование не смог соблюсти рекомендации по правильному забору материала. При этом человека беспокоят все симптомы, характерные для туберкулёза лёгких.
6. Когда есть сомнения в результатах пробы Манту.
7. Предпочтительнее делать ПЦР диагностику туберкулёза у детей. Процедура безопасна, не создаёт дополнительную лучевую нагрузку, эффективна в отношении обнаружения сложных для диагностики форм заболевания.

Своевременная диагностика туберкулёза — это залог правильно назначенного лечения и снижения распространения заболевания. Часто знакомые методы выявления болезни не всегда эффективны. Поэтому ПЦР на сегодня является одним из самых достоверных и безопасных способов обнаружения инфекции на ранних этапах её развития.

источник

ПЦР диагностика туберкулеза легких — методика, доказавшая свою высокую информативность и специфичность. Она предполагает клонирование и последующую идентификацию участков ДНК, характерных только для конкретного возбудителя.

Высокая чувствительность метода означает, что даже единичные клетки микобактерий будут за 4-5 часов выявлены в мокроте, плевральной жидкости или крови пациента.

Благодаря быстрому размножению необходимой последовательности генов, полимеразная цепная реакция (пцр) имеет особенное значение в ранней диагностике туберкулеза. Она позволяет получить достоверные результаты значительно быстрее, чем традиционное бактериологическое исследование, так как в естественных условиях микобактерии туберкулеза размножаются медленно и рост культуры на питательной среде занимает до 90 дней.

ПЦР диагностика позволяет оценить ситуацию не только качественно (то есть решить, есть или нет конкретное заболевание), но и подсчитать количество возбудителей болезни в организме. Чем их больше, тем больше опасность распространения заболевания носителем инфекции. Напротив, в ходе успешного лечения концентрация бактерий в организме должна уменьшаться.

Анализ методом пцр при необходимости точной диагностики никогда не является единственным, потому что может давать и ложноположительные, и ложноотрицательные результаты. Но он применим в ходе профилактического обследования, а также подтверждает качество излечения от туберкулеза.

Обследование детей на туберкулез требуется при поступлении в детские дошкольные учреждения и в школы, причем образовательные учреждения настаивают на регулярном обновлении данных.

Детские поликлиники обычно используют для профилактических обследований туберкулиновую пробу (Манту). То есть вводят под кожу ребенка препарат, созданный из микобактерий туберкулеза, а затем оценивают иммунный ответа.

Но у данной пробы есть ряд недостатков:

1. Она не устанавливает факт заболевания, но лишь подтверждает наличие или отсутствие прививочного иммунитета либо бактерионосительство;
2. Может давать недостоверные результаты при повышенной аллергической чувствительности организма и даже усиливать аллергию на другие вещества;
3. Многие родители сомневаются в точной интерпретации результатов теста.

В противовес этому пцр диагностика туберкулеза легких у детей не вызывает аллергических реакций (при заборе материала в организм ничего не вводится), результаты анализа оцениваются по объективным показателям. Сам анализ выявляет именно болезнь, а не указывает на косвенные по отношению к ней обстоятельства.

Поэтому спрос на данный метод профилактического исследования растет год от года и сдерживается только экономическими факторами. Ведь в большинстве случаев анализ делается за счет родителей пациента.

Как и в случае исследования здоровья детей, пцр диагностика туберкулеза легких у взрослых может быть частью профилактического обследования и использоваться вместо данных флюорографии.

В отличие от флюорографии, анализ не создает лучевой нагрузки на организм и является более специфичным. Ведь изменения в легких, которые покажет рентген, могут быть характерны для целого ряда заболеваний, а не только для туберкулеза.

Кроме того, отрицательный результат анализа пцр дает основание утверждать, что пациент не выделяет бактерий во внешнюю среду, то есть безопасен для окружающих. Поэтому особенно важен этот тип исследования при контроле состояния здоровья людей, лечившихся от туберкулеза.

Иногда при отсутствии клинических проявлений пациент продолжает быть носителем туберкулеза, что говорит о потенциальной возможности заражения тех, с кем он контактирует, а также обещает рецидивы у самого носителя.

Золотым стандартом исследования анализ пцр является для диагностики так называемых ограниченных форм туберкулеза.

• — туберкулемы;
• — туберкулез внутригрудных лимфоузлов;
• — очаговые инфильтраты.
• к

Кровь – не лучший материал для пцр диагностики туберкулеза легких: чувствительность анализа образцов крови, по разным данным, составляет от 17, 2 до 42, 8%.

Наибольший процент точных результатов дает анализ мокроты (до 80%), на втором месте – анализ мочи. Это объясняется тем, что далеко не каждая форма туберкулеза предполагает попадание микобактерий в кровь пациента: при туберкулезе легких специфическая ДНК в крови будет обнаружена, только если процесс распространенный и идет очень давно.

Однако сам процесс забора крови привычен для пациентов и персонала, не вызывает дискомфорта. Поэтому пцр диагностика туберкулеза по крови проводится чаще, чем анализ других биологических материалов. Особенно в случаях, когда клинических симптомов нет, а есть только потребность получить справку о состоянии здоровья.

источник

Специфическая туберкулезная инфекция многие годы присутствует в тканях и структурах человека, а при определенных обстоятельствах быстро распространяется по организму за 2-3 месяца. Порой оптимальный курс лечения выбрать очень тяжело по причине запоздалой диагностики и адаптации возбудителя ко многим медикаментам.

Новейшая ПЦР диагностика туберкулеза помогает обнаружить не только развившуюся болезнь, но и сам возбудитель, когда первые признаки заболевания еще не появились.

Диагностирование туберкулеза способом ПЦР появилось недавно. В 1983 году микробиолог из Америки Кэри Муллис изобрёл процедуру, при которой микроорганизмы стало возможно восстановить из биологического материала по короткому сегменту. Эта работа заслужила Нобелевскую премию.

ПЦР на туберкулез – это полимерный цепной процесс, при котором проходит диагностика и выявление вирусных возбудителей способом генной инженерии. Методика используется в иммунологических, микробиологических, вирусологических и биохимических лабораториях.

Универсальный метод помогает докторам при диагностике и выявляет инфекционный процесс даже после первых часов заражения, задолго до появления симптомов. Исследование возможно даже при маленьком количестве биоматериала.

• Несколько отрезков ДНК (праймеров), с них начинается биологический синтез;
• Нуклеотидные соединения, основа молекулы ДНК или же РНК;
• Фермент полимераза, которая ускоряет анализ ПЦР.

Сначала из биоматериала от заразившегося человека выделяется сегмент ДНК, при помощи генно-молекулярных способов биосинтеза дальше определяется тип микроорганизмов, которому принадлежит биофрагмент.

Эта сложная реакция занимает меньше времени, чем некоторые биометоды. ПЦР определяет возбудителя за несколько часов, при этом не существует надобности выделять его из биологической жидкости (мокроты, спинномозговой или кровяной среды), не нужно долго растить его на питательной среде. Достаточно, чтобы исследуемый материал содержал нить ДНК инфекционного возбудителя.

При проведении анализа крови ПЦР на туберкулез в пробирке искусственны путем создается синтез рибонуклеиновых кислот туберкулезной микобактерии.

Молекулярная реакция способом ПЦР – это несложная манипуляция, занимающая мало времени. Берется необходимый биоматериал: для определения tbc используется кровь, мокрота, промывная жидкость бронхов.

1. Сначала разрушается первичная форма ДНК, разъединяются 2 цепочки при высокой температуре (максимум 98ОС не больше 2 минут);
2. Затем производится отжиг, первичная температура понижается на несколько делений, возникает связь нити ДНК с праймером;
3. Следующая стадия называется элонгация, при этом происходит биосинтез необходимых молекулярных структур.

Для получения нужного количества копий ДНК должно пройти от 25 до 30 таких циклов, при этом получившееся количество микобактерий легко распознаётся.

Непосредственно всем пациентам с подозрением на ТВЦ проведение цепной диагностики не делается, так как процедура требует использования дорогого оборудования. Не все лечебные государственные учреждения позволяют его приобрести, тем более, что привычные методики диагностирования на микобактерии туберкулеза тоже информативны.

• Тщательное собирание анамнеза, опрашивание больного;
• Внешний осмотр;
• Туберкулиновая проба Манту;
• Рентгенографическое либо флюорографическое обследование;
• По надобности компьютерное диагностирование;
• Микроскопическое или бактериологическое исследование маска с мокротой.

ПЦР на туберкулез делается исключительно тогда, когда не имеется возможности сделать другой инструментальный анализ либо в сложных для диагностики обстоятельствах.

Несмотря на то, что изобрели великое множество методов диагностирования, количество больных туберкулезом продолжает расти. Кроме того заболеваемость приобрела некоторые особенности : нередко наблюдается тяжелая форма недуга, увеличивается число летальных исходов, возбудитель приобретает устойчивость имеющимся химиопрепаратам.

Многие люди не желают каждый год проходить профилактический осмотр, отказываются от вакцинации, что ведет к увеличению заболеваемости. Такие обстоятельства требуют эффективных и информативных способов исследования, доступных для взрослых и детей с диагнозом tbc. ПЦР имеет преимущества перед другими диагностическими методиками.

Это новейшее исследование отлично себя зарекомендовало. Если по ряду причин сложно поставить диагноз или в некоторых спорных случаях, ПЦР легче обнаруживает туберкулезную палочку в биологическом материале, чем другие методы.

• Это быстрое исследование, небольшой отрезок молекулы дает возможность поставить точный диагноз за короткое время приблизительно за 5 часов, это применяется в экстренных случаях, например перед неотложным оперативным вмешательством;
• Исследование крови на туберкулез возможно, когда другие методики недоступны или противопоказаны – иногда для обнаружения возбудителя tbc приходится делать множество Rg -снимков, облучающая доза при этом слишком большая;
• Используя полимеразную реакцию можно исследовать любые биологические жидкости на присутствие микобактерии. К примеру, можно проводить изучение спинномозговой жидкости при туберкулезном менингите или мочи при мочеполовом туберкулезе;
• Метод безопасен, диагностика туберкулеза у детей при помощи ПЦР не вызывает сложности;
• Способ полимерной реакции выявляет туберкулезную палочку при любых формах и стадиях недуга;
• Наличие в биоматериале всего нескольких бактерий позволяет увидеть присутствие микроорганизмов, так как это чувствительная реакция;
• ПЦР легко диагностирует рецидив болезни.

Несмотря на огромное количество плюсов, всем больным с подозрением на tbc исследование не делается, так как существуют и минусы, их так же учитывают.

Видео — ранняя диагностика

Этот метод диагностики является скорее исключительным, чем закономерным, для этого имеются причины. В первую очередь во внимание берётся дороговизна метода. Оборудование дорого стоит, государственные поликлиники не имеют возможности его приобрести из-за высокой цены, но большинство платных лабораторий оборудование имеют, анализ в них делается.

• Метод обнаруживает убитые бактерии, которые погибли после лечения, при этом ПЦР показывает положительный результат. Сразу после химиотерапии проводить исследование нет смысла, так как результат будет недостоверным;
• Туберкулезные микобактерии подвержены мутации, что приводит к неэффективности способа, при этом нить ДНК не может последовательно синтезироваться.

Среда для исследования должна тщательно выбираться, взятие крови или мочи происходит только в том случае, если есть подозрение на заражение. Нельзя взять мокроту для исследования, если подозревается туберкулез костей. В этой ситуации диагностика будет неверной.

Кровь и моча больного туберкулезом для изучения на ПЦР берется редко, выявление болезни таким способом сомнительно. В этих биосредах возбудитель определяется только при сепсисе, либо в случае диссеминированного туберкулеза. Локальные формы встречаются наиболее часто, при них кровь и моча могут оставаться без изменений. Чаще всего для изучения берется мокрота.

Большинство больных направляются на ПЦР диагностику в спорных и сложных случаях туберкулеза. Когда медицинские работники выдают направление на исследование?

1. Если произошел контакт с человеком, у которого достоверно поставлен диагноз туберкулёза, но обычными способами диагностику сложно провести;
2. При тех обстоятельствах, если больного предоставить в поликлинику невозможно для рентгенографии или других исследований. В такой ситуации его проще обследовать при помощи полимерного метода. Анализ мокроты просто доставляется в лабораторию в специальной таре, а результат становится известен спустя несколько часов;
3. Перед операцией бывает необходимо срочно определить болен ли пациент туберкулезом, в этом случае показано проведение ПЦР;
4. Из-за безопасности способа, можно проводить обследование беременной женщины или ребёнка, при этом не создается дополнительная рентген-нагрузка;
5. Сомнительные результаты теста Манту.

Каждый желающий может пройти обследование платно, если туберкулез не подтвердился при помощи бактериологии и рентгеноскопии. Так случается, если очаг в лёгочной ткани невидим на Rg- снимке в прямой проекции, а пациент не смог собрать мокроту правильно, но признаки туберкулеза человека беспокоят.

Современная ПЦ реакция для диагностики – это залог успешного лечения, в результате которого распространенность заболевания снижается. Традиционные способы определения недугов не всегда дают желаемый эффект.

Так ПЦР анализ на сегодняшний день стал одним из достоверных и безопасных методов диагностирования на ранних сроках развития болезни.

источник