Меню Рубрики

Тест на активность бактерий туберкулеза

Туберкулез является одним из самых распространенных инфекционных заболеваний органов дыхания, которое трудно диагностируется, но именно выявление патологии на ранней стадии поможет предупредить дальнейшее развитие недуга и его тяжелых осложнений. Традиционные методики обнаружения микобактерий – проба Манту, Пирке и рентгенологическое обследование – не всегда возможны и требуют времени, поэтому сегодня их часто заменят новыми – Диаскинтестом и тестом Т-SPOT на туберкулез.

Последние представляют собой ту же внутрикожную пробу, однако имеют более точные результаты диагностирования, являются альтернативными технологиями для выявления палочек Коха у детей, беременных и лиц старшего возраста. Данный материал подробно рассматривает все виды тестов.

Наиболее прогрессивными методами диагностирования в настоящее время считаются Диаскинтест, иммуноферментный квантифероновый тест, ПЦР – метод полимеразной цепной реакции и Т-СПОТ.

Новые технологии отличаются скоростью обследования, точностью результатов, но, тем не менее, пациенты относятся к ним с некоторым опасением. Чтобы отсечь сомнения в эффективности новых фтизиатрических обследований, ниже приводятся характеристики наиболее распространенных способов диагностики.

С целью выявления туберкулеза используются следующие методы:

    Самой распространенной методикой является проба Манту. Выполняется подкожным ведением вытяжки из разрушенных бактерий, которая провоцирует реакцию организма. Через трое суток после вакцинации необходимо измерить линейкой размер покраснения, возникшего вследствие укола. Увеличенный размер воспалившейся папулы говорит о большой вероятности развития недуга.

  • Проба Пирке является накожным вариантом теста Манту. В данном случае пациенту делается небольшой разрез на предплечье, куда затем наносится концентрированный раствор микобактерий. Контроль разрастания покраснения также проводится линейкой.
  • Т-спот определяет количество поверхностных белковых комплексов Т-лимфоцитов, которые распознают чужеродное вещество, в данном случае палочки Коха.
  • Экспресс-анализ проводится на основе капли крови. Тест можно проводить в домашних условиях, приобретя в аптеке необходимый медицинский набор. Точность анализа достигает 80%.
  • Разумеется, каждый метод диагностики имеет не только свои преимущества, но и недостатки. Поэтому однозначного предпочтения быть не может.

    Рассматривая каждую методику можно сделать следующие выводы:

      Наиболее точным считается Диаскинтест. Он исключает ненадежные – ложноположительные результаты после уже введенной вакцины против туберкулеза. Однако побочных действий в виде головной боли, повышения температуры тела, общей слабости не избежать. Противопоказаниями являются личная непереносимость, аллергия, неврологические и некоторые хронические заболевания.

  • Точность метода полимеразной цепной реакции практически ничем не отличается от предыдущего. Используется при наличии противопоказаний к проведению Диаскинтеста и Манту. Его результаты также не искажаются проведенными ранее вакцинациями.
  • T-SPOT.TB наделен аналогичными качествами вышеприведенных методик. Может служить к ним дополнением в случае обнаружения ложноположительных результатов других подкожных и накожных проб диагностики. Основным преимуществом его является безопасность и точность. Вполне подойдет маленьким детям, лицам преклонного возраста и страдающим недугами аутоиммунной системы.
  • Данная проба разрешена Министерством здравоохранения России и рекомендована для выявления и диагностики микобактерий у детей как самая передовая и безопасная методика. Позволяет определить не только явную форму болезни, но и скрытую. Тест-спот на туберкулез у детей был создан как альтернатива реакции Манту для выявления патологии в раннем детском возрасте, дополнение при получении ненадежных результатов при других видах диагностики.

    Данное фтизиатрическое обследование характеризуется высокой клинической эффективностью, а именно:

    • не восприимчив к ранее проведенным вакцинациям и патогенным микроорганизмам, что повышает точность исследования,
    • имеет низкий уровень ненадежных результатов, чувствительность достигает 95%;
    • не существует ограничений для проведения обследований у младенцев, детей всех возрастных групп, беременных, лиц старшего возраста, проходящих внепочечное очищение крови.

    Не последнюю роль играет и отсутствие необходимости повторения теста. Обследование потребует для проведения теста у детей 2-4 мл крови, взрослых – 6.

    Данная диагностика определяет количество Т-лимфоцитов, вырабатывающих гликопротеиды, которые сигнализируют организму о появлении чужеродных возбудителей. В лимфоидной ткани активизируется процесс деления защитных клеток, вызывая тем сам повышение иммунитета. Тест способствует быстрому обнаружению скрытой формы туберкулеза, при которой латентная фаза может перейти в открытую вследствие снижения иммунитета.

    Одними из плюсов Т-СПОТа является быстрый результат диагностики и отсутствие реакции на предыдущие вакцинации, что не представляется возможным в пробе Манту. В отличие от последней пробы, а также Диаскинтеста, T-spot — иммунологический, происходит без введения под кожу возбудителей инфекции, что характеризуется практическим отсутствием противопоказаний.

    Диагностика подходит для всех возрастных групп, включая грудных детей, беременных, лиц с аллергическими заболеваниями, но с предварительной консультацией с лечащим врачом.

    Болезнетворные бактерии упоминаемой патологии представлены туберкулезными бациллами. Основной признак микобактерий выражен их патогенностью, т. е. способностью делиться в ткани живого организма, вызывая при этом туберкулез.

    Диаскинтест является дополнительной методикой для обнаружения присутствия или отсутствия микобактерий туберкулеза в организме. Компоненты диагностики содержат специальные белки, провоцирующие иммунный ответ организма. Положительным свойством является реакция только на бациллы, вызывающие заражение туберкулезом.

    Процесс выполняется путем введения 0,1 мл средства, содержащего туберкулезные аллергены без присутствия возбудителей инфекции. Ответом служит образовавшийся на коже бугорок размером до 1 см.

    Реакция организма после введения вакцины говорит о присутствии или отсутствии данной патологии:

    • отрицательным является отклик при отсутствии явного покраснения и опухлости;
    • сомнительной называется проба с приливом крови, но без опухоли;
    • положительной – наличие воспалившегося бугорка с примесью крови, лимфы.

    Результат проведенного анализа оценивается только через трое суток путем замера образовавшегося вздутия. Его размер и степень покраснения свидетельствуют о присутствии инфекции либо наличии патологии в активной фазе.

    Диаскинтест не имеет противопоказаний, поэтому рекомендуется для выявления заболеваний у детей младшего возраста, беременных, кормящих грудью матерей, лиц преклонного возраста. Перед проведением анализа необходимо посетить кабинет врача.

    Экспресс-анализ также явлется точным дополнительным методом, если основные процедуры показывают некоторое расхождение. Подобную диагностику следует проводить только при целостном кожном покрове, отсутствии неврологических заболеваний, выраженных судорогами, потерей сознания, иных нежелательных реакций организма.

    Экспресс-проба позволяет обнаружить присутствие специальных веществ – антител, которые образуются после попадания в организм чужеродных бактерий.

    Медицинский набор теста содержит следующие компоненты:

    1. Тест-полоски на туберкулез.
    2. Тестовый прибор.
    3. Скарификатор.
    4. Прединъекционная одноразовая салфетка.
    5. Одноразовая пипетка для крови.
    6. Руководство пользователя.

    Приобретать медицинский набор следует только в аптеке, при этом обратив внимание на герметичность упаковки. Прибор позволяет выявить не только заболевание, но и степень его развития.

    Диагностика в домашних условиях проводится по следующему алгоритму:

    1. Тщательно вымыть руки с мылом и горячей водой.
    2. Проколоть скарификатором палец.
    3. Первую каплю крови стереть салфеткой.
    4. Следующие капли — собрать пипеткой.
    5. Поместить отобранный образец в окошко «S» прибора.
    6. Через 15 минут обратить внимание на количество полосок.

    Важно! Для получения достоверных выводов следует строго придерживаться приведенной инструкции. Прибор позволяет выявить присутствие антител, вырабатывающихся после попадания в организм туберкулезных палочек.

    Тест показателен двумя результатами:

    • появление одной полоски говорит об отрицательном результате – отсутствии антител;
    • две полоски – результат положительный.

    Разумеется, положительный результат не должен быть причиной для паники, ведь даже самая точная диагностика не дает 100% результата. Однако появление двух полосок должно сопровождаться последующим визитом к врачу.

    Выявление заболевания туберкулезом является ответственным мероприятием, для которого предусмотрено несколько методик. Наряду с устоявшимися туберкулиновыми пробами существуют и иммунологические — T-spot, иммуноферментный квантифероновый тест, Диаскинтест. Последние обладают не только точностью обследования и безопасностью, но и отсутствием противопоказаний.

    источник

    Раньше, когда заходила речь об анализе на туберкулез, было проще: поголовно проводилась проба Манту и население не задумывалось об иных вариантах. По мере развития медицины, а также интернет-СМИ, информированность граждан значительно выросла. И сегодня на слуху названия самых разных тестов и проб на выявление микобактерий, но мало кто в состоянии внятно объяснить, чем же они отличаются друг от друга. MedAboutMe разбирает особенности разных проб и тестов на туберкулез.

    История диагностики туберкулеза начинается в 1890 г., когда Роберт Кох получил туберкулин: вырастил в пробирке культуру туберкулезных бактерий, убил ее нагреванием и тщательно профильтровал. Современная версия туберкулина дополнительно очищена от компонентов культуральной среды и в конечном итоге состоит из белков микобатерий (туберкулопротеины), полисахаридов, липидов и нуклеиновой кислоты, то есть включает в себя не целые микроорганизмы, а их отдельные компоненты, совершенно не опасные в инфекционном смысле.

    Важно понимать: туберкулопротеины — это гаптены, низкомолекулярные белки, которые не иммуногенны. То есть, они не способны спровоцировать реакцию сенсибилизации и выработки антител к туберкулину. А значит, не могут стать причиной аллергии — даже у людей, имеющих к ней склонность. Но в организме, уже сенсибилизированном к туберкулезной палочке (то есть, имевшем с ней контакт в виде вакцины БЦЖ или живых микобактерий), туберкулин провоцирует иммунологический ответ. В этом и заключается смысл проведения пробы — в оценке масштабов этого ответа.

    Нередко встречаются сообщения об аллергии на туберкулин. О чем идет речь? В состав туберкулина, помимо белков, входят и другие вещества. А в составе туберкулинового препарата, который вводится человеку, имеются различные химические компоненты. И они, не являясь собственно аллергенами, могут провоцировать развитие аллергической реакции косвенным путем. На практике такие случаи встречаются крайне редко.

    А вот покраснение или опухание места укола является так называемой местной кожной реакцией, которая имеет диагностическое значение. При развитии общей реакции организма — повышение температуры, ухудшение самочувствия — речь идет уже о гиперэргической реакции организма, что говорит о необходимости проведения дополнительных обследований.

    Введение туберкулина лежит в основе тестов Пирке, Манту и Коха — они входят в группу методов туберкулинодиагностики, применяемых в России. Методом массовой диагностики является проба Манту (потому что дешевая и достаточно информативная на первом этапе обследования). Но если возникает необходимость индивидуального обследования, то возможно использование проб Пирке и Коха, а также их различных вариаций.

    За исключением новорожденных младенцев, остальным людям перед вакцинацией БЦЖ обязательно проводится туберкулиновая проба. Если реакция положительная — вакцинация не проводится. В народе ошибочно считается, что это потому, что «уже есть иммунитет». На самом деле — из-за повышенного риска осложнений в виде воспаления и образования рубцов.

    Проба Коха была предложена первооткрывателем туберкулезной палочки и человеком, впервые получившим туберкулин — Робертом Кохом.

    Схема проведения: туберкулин вводится подкожно. На место введения подозрительного соединения немедленно направляются «бойцы» иммунной системы: макрофаги и Т-лимфоциты. При этом вырабатываются вещества, запускающие развитие местного воспаления. Через 2-3 суток врач оценивает три типа реакций: общую (всего организма), местную (на месте инъекции) и очаговую (в очаге поражения микобактериями, если таковой имеется). Для этого проводится анализ крови и мокроты, измеряется температура.

    Австрийский врач Клеменс Пирке разработал новую схему введения туберкулина в 1907 г.

    Схема проведения: внутреннюю поверхность предплечья обрабатывают раствором карболовой кислоты (вместо спирта, который может привести к осаждению белков), и на кожу капают туберкулин. После этого проводят скарификацию, то есть наносят легкую царапину длиной 5 мм. Проба является накожной, важно, чтобы при этом не было крови, которая затрудняет всасывание туберкулина. Через 48-72 часа оценивается размер области гиперемии (покраснения).

    Эта проба существует также в таком варианте, как градуированная проба Гринчара и Карпиловского (ГКП), когда одновременно проверяется реакция на растворы с разной концентрацией туберкулина, нанесенные на кожу.

    Проба Манту была разработана в 1908 г. немцем Феликсом Менделем и французом Шарлем Манту, чье имя она и получила. Это, по сути, более продвинутая версия пробы Пирке.

    Схема проведения: туберкулин вводится внутрь кожи все там же, на предплечье. Место укола краснеет, может образовываться инфильтрат. Через 3 суток определяется размер инфильтрата, а если его нет, то диаметр покрасневшего участка. Врач учитывает наличие и диаметр инфильтрата, а также его изменение относительно результатов предыдущих обследований.

    Если человек был вакцинирован БЦЖ, то возможна ложноположительная реакция на пробу Манту. Но масштабы реакции все равно позволяют отличить вакцинированного человека от больного туберкулезом.

    Положительные туберкулиновые пробы указывают на контакт организма с микобактериями вообще. Поэтому они также дают положительную реакцию у людей, вакцинированных БЦЖ. Тут стоит уточнить один момент. Вакцина БЦЖ готовится на основе штамма живой, но ослабленной бактерии, вызывающей туберкулез у коров — Mycobacterium bovis BCG. Несмотря на видовые нюансы, антитела, которые организм учится вырабатывать к бычьему туберкулезу, эффективно защищают его и от человеческой разновидности — Mycobacterium tuberculosis.

    Одним из существенных достижений в области диагностики туберкулеза последних лет является открытие белков, которые есть у человеческой микобактерии, но нет у микобактерий, вызывающих бычий туберкулез. Эти белки ESAT-6 и CFP-10 являются для организма человека антигенами и поэтому на их основе были разработаны принципиально новые тесты. Если человек уже встречался с микобактериями, то клетки его крови бурно реагируют на введение данных белков. По силе реакции проводится оценка «степени знакомства» организма с туберкулезной палочкой, причем именно человеческой.

    В список распространенных на территории России тестов на основе антигенов ESAT-6 и CFP-10 входят: Диаскинтест, Тубинферон и Квантиферон. Несомненное преимущество Диаскинтеста и Квантиферона заключается в том, что на них никак не влияет, был человек вакцинирован БЦЖ или нет.

    Кроме того, в составе тестов нет даже разобранных на запчасти микобактерий — только белки и вспомогательные компоненты. Но, в отличие от туберкулина, на эти белки в принципе может возникнуть аллергия. Вероятность этого крайне низка, но если у человека, которому надо пройти тест, имеется к ней склонность, обследование проводят на фоне десенсибилизирующей терапии на протяжении 5 дней до этого и 2 дней после.

    Это отечественная разработка, пользующаяся сегодня повышенной популярностью среди населения, особенно среди родителей, которым не нравятся туберкулиновые пробы. Интерес к этой группе тестов объясняется просто: в представлении граждан пара отдельных белков безобиднее разобранной на детали микобактерии.

    Схема проведения: как и в случае пробы Манту, препарат вводится внутрикожно. Результат оценивается через 72 часа.

    Тоже российский тест, но не столь широко распространенный, как Диаскинтест. Тубинферон интересен тем, что сочетает в себе тест на основе антигенов и туберкулиновую пробу. В его состав, помимо белков ESAT-6 и CFP-10, входит еще и очищенный туберкулин.

    Основное преимущество Тубинферона в том, что он, благодаря туберкулину, позволяет заодно оценить масштабы поствакцинальной реакции. Данное свойство важно, когда требуется определить, идет ли речь о туберкулезе или генерализованной БЦЖ-инфекции, например, у ребенка, зараженного ВИЧ. Но для массовой диагностики этот параметр не важен.

    Схема проведения — как и в случае Диаскинтеста.

    Тест QuantiFERON, QFT (производитель Cellestis, Австралия) отличается от всех вышеописанных методов диагностики тем, что он не требует введения препарата в организм человека. Проба крови добавляется в пробирку с белками-антигенами. Если Т-лимфоциты, находящиеся в крови, распознают белки, как уже известные им (то есть, организм ранее встречался с микобактериями), то они начинают активно вырабатывать гамма-интерферон. По его количеству и определяется степень «знакомства» с инфекцией.

    Спор о том, какой тест наиболее эффективен, идет среди ученых, врачей и особенно среди родителей давно. Однако до сих пор однозначного ответа на этот вопрос нет.

    Диаскинтест и Квантиферон считаются более чувствительным, чем туберкулиновые тесты. При этом проба Манту эффективнее Диаскинтеста у детей, не вакцинированных БЦЖ.

    С другой стороны, даже тесты, демонстрирующие равную эффективность, могут в разных ситуациях давать неодинаковый результат. Например, согласно данным исследования, проведенного российскими учеными из Санкт-Петербургского государственного педиатрического медицинского университета в 2014 году, при выявлении латентной (скрытой, спящей) туберкулезной инфекции Тубинферон оказывается более чувствительным, чем Диаскинтест и Квантиферон. Но при уже имеющемся туберкулезе ситуация будет обратная: на первое место по чувствительности выходит Квантиферон, за которым следуют Диаскинтест и Тубинферон.

    Важно также понимать, что у массовой и индивидуальной диагностики — разные цели и задачи. И может так случиться, что по результатам пробы Манту человек будет направлен на дополнительное обследование при помощи другого теста на туберкулез. Так, бывает, что после пробы Манту следует уточняющее обследование при помощи Диаскинтеста. А в некоторых ситуациях их ставят одновременно на разные руки.

    Итак, идеального теста на туберкулез нет. Каждый из них в чем-то лучше других, а в чем-то им уступает. Поэтому самым правильным решением будет следовать рекомендациям врачей: применение метода массовой диагностики (проба Манту) и, при необходимости, дополнительное, уточняющее обследование при помощи теста, который порекомендует врач, или других диагностических методов.

    источник

    Туберкулёз преследует человечество на протяжении всей его истории. К известным ранее факторам, способствующим возникновению этого заболевания (бедность, скученность, неполноценное питание), сейчас добавились новые: распространение СПИДа, стресс, загрязнение окружающей среды. За последние 5–6 лет заболеваемость туберкулёзом резко возросла не только в странах третьего мира, но и в развитых государствах. По данным ВОЗ, в 1995 году число больных туберкулёзом составило более 20 млн. человек, из которых умерло более 3 млн. (больше, чем от любой другой инфекционной болезни). В 1996 году туберкулёзом на земном шаре заболело около 8 млн. человек, в России в 1997 году — 81100 человек.

    Туберкулёз более известен как заболевание легких, хотя он может поражать практически любой орган или систему органов. В последнее время получили распространение ранее довольно редкие формы: мелкоочаговый туберкулёз, туберкулёз периферических лимфатических узлов и туберкулёз половых органов. Все чаще туберкулёз встречается в составе сочетанных инфекций.

    Возбудитель туберкулёза Mycobacterium tuberculosis распространяется, в основном, в виде аэрозолей при кашле и чихании, а также при контакте слизистых оболочек. При определенных условиях возбудителями туберкулёза могут быть также Mycobacterium bovis и Mycobacterium africanum. Причем заразными, по некоторым данным, могут быть не только люди, но и больные животные. Несмотря на контагиозность возбудителя (особенно M. tuberculosis) подавляющая часть инфицированных им людей не заболевает, и туберкулёз у них протекает в неактивной форме. Вероятность возникновения активного туберкулёзного процесса у таких людей в течении жизни составляет обычно не более 10%. Однако воздействие факторов риска может привести к ра збалансировке защитных механизмов организма и “пробою” иммунитета. В таких случаях вероятность развития активной формы туберкулёза значительно возрастает. Например, среди ВИЧ-положительных пациентов риск заболевания туберкулёзом возрастает на 10% за каждый год сочетанной инфекции.

    По данным ВОЗ, для туберкулёза при отсутствии медицинской помощи характерна высокая смертность (55%). Эффективность современной терапии туберкулёза, достаточно высокая на ранних стадиях заболевания, резко снижается на более поздних стадиях. Поэтому смертность даже среди леченных больных в целом достигает 15 %. В этой связи ранняя диагностика туберкулёза может иметь решающее значение, при условии быстрого фармакологического вмешательства она способна существенно сократить заболеваемость и смертность от туберкулёза.

    Определяющими требованиями к методам диагностики являются специфичность и чувствительность. Если метод имеет недостаточную специфичность, то при его использовании будет получено большое число ложноположительных результатов среди здоровых людей или среди нетуберкулёзных больных. Недостаточно чувствительный метод будет “пропускать” слишком много действительно больных активным туберкулёзом, а слишком чувствительный — может давать положительный результат при тестировании здоровых людей с неактивной формой туберкулёза или пациентов, относительно недавно вакцинированных БЦЖ. При выборе метода диагностики немаловажную роль также играют: время анализа, его стоимость, воспроизводимость результатов, а также возможность объективного инструментального учета результатов.

    Среди классических методов диагностики туберкулёза лёгких, по-видимому, наибольшей специфичностью обладает метод идентификации культуры возбудителя в посеве мокроты пациента. Широко применяется также цитологическое (микроскопическое) определение микобактерий в мазках мокроты и плеврального экссудата больных после окраски прочным синим (АFВ-метод). Однако оба этих метода оказываются непригодными при небациллярных формах туберкулёза, когда микобактерии отсутствуют в биологических жидкостях. Поскольку такие формы туберкулёза встречаются в 2–3 раза чаще бациллярных, общая эффективность выявления больных при использовании данных методов невысока. Кроме того, культивирование микобактерий, из-за их медленного роста, достаточно длительная (около 1 месяца) и дорогая процедура, а цитологическая идентификация не обладает достаточной чувствительностью, чревата ошибками и слишком сильно зависит от квалификации персонала (при использовани и теста в лабораториях развивающихся стран выявляется 20–40% больных туберкулёзом, в развитых странах

    При небациллярной форме туберкулёза лёгких и при туберкулёзе других органов определенное значение может иметь обследование вышеописанными методами биоптатов пораженной ткани. Однако на практике это, как правило, проводится лишь на достаточно поздних стадиях заболевания.

    Диагностика легочного туберкулёза, основанная на рентгеноскопии грудной клетки, может давать неадекватные результаты из-за возникших под действием самых разнообразных факторов неспецифических изменений в лёгких. Кроме того, при различных сочетанных инфекциях, например, туберкулёз+ВИЧ, картина рентгеноскопии вообще может сильно отличаться от классической (характерной для активного процесса в лёгких).

    В целом, три описанных выше метода диагностики туберкулёза (идентификация культуры, АFВ-метод и рентгеноскопия) малопригодны для массового скрининга населения, осуществимы только в специализированных лабораториях и требуют серьёзного финансирования. Практически всегда они используются лишь для подтверждения диагноза “активный туберкулёз”, а не для его обнаружения. В результате, ранняя диагностика туберкулёза зачастую основывается лишь на клинической картине и совокупности косвенных признаков. А принимаемые по этому поводу решения полностью зависят от квалификации и опыта врача.

    Говоря о современных методах диагностики туберкулёза, нельзя не упомянуть о методе полимеразной цепной реакции (ПЦР или PCR). Это высокоспецифичный и чрезвычайно чувствительный тест, с помощью которого принципиально возможно идентифицировать в анализируемой пробе наличие даже одной-единственной молекулы ДНК возбудителя. На метод ПЦР возлагали большие надежды, он постоянно совершенствуется и в настоящее время, в принципе, уже нашел свою нишу в диагностике туберкулёза. Недостатками его являются высокая цена, сложность, дорогое инструментальное и приборное обеспечение. Кроме того, из-за своей сверхвысокой чувствительности этот тест часто определяет неактивную форму туберкулёза и очень зависим от уровня квалификации персонала и соблюдения особых требований к лабораторным помещениям, в которых проводится анализ. Минимальное загрязнение анализируемых образцов, инструментария и воздуха в помещении нуклеиновой кислотой микобактерий может дать ложноположительный результат. Поэтому применение этого метода в практике лабораторной диагностики пока довольно ограничено.

    Разнообразие форм туберкулёза, быстрое распространение в последнее время внелёгочных форм со “стертой” картиной процесса заболевания, а также весьма индивидуальная реакция на него организма пациентов, представляют собой серьёзную проблему для диагностики туберкулёза вообще и для ранней его диагностики, в частности.

    Относительно широкие возможности для скрининга туберкулёза предоставляют методы серодиагностики, среди которых наиболее распространены тесты, основанные на определении антител к антигенам микобактерий. Результаты серологических тестов в гораздо меньшей степени зависят от того, в какой форме — бациллярной или абациллярной — проявляется туберкулёз. Благодаря своей относительно невысокой стоимости, скорости, достаточно высокой чувствительности и специфичности, они незаменимы при массовых обследованиях. Казалось бы, что с серологическими методами конкурирует недорогой и простой в исполнении кожный туберкулиновый тест (реакция Манту), являющийся показателем напряженности клеточного иммунитета. Однако, из-за низкой специфичности и, по сути, неспособности дифференцировать активные и неактивные формы туберкулёза его применение в большинстве случаев вряд ли оправдано. Напротив, гуморальный иммунный ответ весьма характерен именно для активного процесса, поэтому серологические тесты, в которых провод ится определение специфичных к M. tuberculosis антител, намного достовернее кожных тестов.

    Серологические методы отличаются большим разнообразием. Традиционные тесты, основанные на реакциях гемагглютинации, торможении гемагглютинации, фиксации комплемента и некоторые другие, относительно просты в постановке, недороги, имеют небольшое время проведения анализа (от 1 часа до суток), нуждаются в минимуме оборудования. Однако они в настоящее время морально устарели и, кроме того, эффективная диагностика туберкулёза с их помощью возможна только при комбинированном совместном использовании сразу нескольких тестов, например, РНГА+РПК+РПГ.

    Результаты анализа при постановке традиционных серологических методов довольно плохо поддаются инструментальному учету. Поэтому к их недостаткам можно добавить известный субъективизм визуальной оценки и, следовательно, не слишком хорошую воспроизводимость результатов теста в “серой зоне” при невысоких титрах антител к антигенам микобактерий.

    К современным методам серодиагостики туберкулёза, получившим в последнее время достаточно широкое применение, относятся иммунохроматография и дот-блоттинг. Тест-системы, в которых используются эти принципы, приспособлены для простого в исполнении экспресс-анализа с визуальной оценкой результата.

    К иммунохроматографическим диагностикумам относится выпускаемый в Австрии набор “ТВ-Check-1”. Постановка анализа в данной тест-системе не вызывает особых затруднений у лаборанта и позволяет получить результат тестирования за 25–35 минут. К недостаткам теста можно отнести высокую стоимость анализа и серьёзную зависимость оценки результата от оператора при невысоком титре специфичных антител (т.е. в “серой зоне”).

    Примером тест-системы, в которой используется дот-блоттинг, может служить набор “МycoDot”, выпускаемый фирмой “DynaGene”. Постановка анализа с применением данного набора сложнее, чем тестирование образцов в тест-системе “ТВ-Check-1”. Однако при его использовании за счет положительных и отрицательных контролей достигается большая точность визуальной оценки результата, а стоимость анализа несколько меньше, чем в тест-системе “ТВ-Check-1”.

    Среди современных методов серодиагностики туберкулёза наибольшее распространение в России получили иммуноферментный и радиоиммуный анализы (ИФА и РИА). При их использовании, как правило, применяется инструментальный учёт и автоматическая (компьютерная) обработка результатов анализа, что позволяет исключить субъективную оценку. Для тест-систем, в которых используются принципы ИФА и РИА, характерны высокие технический уровень, степень стандартизации и воспроизводимость результатов анализа. Они удобны в работе и позволяют проводить одновременное тестирование большого количества проб, т.е. проводить скрининг.

    Интенсивное развитие метода ИФА в последние 10–15 лет привело к тому, что иммуноферментные тест-системы по своим характеристикам, и в первую очередь по чувствительности, стали сравнимыми с радиоиммунными тестами. Проведение ИФА, в отличие от РИА, не требует оборудованных для работы с радиоактивностью помещений, высокой квалификации персонала и дорогостоящего оборудования, кроме того, стоимость анализа значительно ниже. Поэтому в большинстве лабораторий иммуноферментные тест-системы вытеснили радиоиммунные.

    При использовании современных иммуноферментных диагностикумов на туберкулёз проблемы, связанные с недостаточной специфичностью, возникают достаточно редко. Однако их чувствительность, как правило, не удовлетворяет практических врачей. Дело в том, что антитела к микобактериям в том или ином количестве присутствуют в крови не только больных, но и здоровых инфицированных людей. В сыворотке крови больных титры антител могут иногда достигать очень больших величин, однако этот показатель слишком неявно (неопределенно) связан с давностью инфицирования или тяжестью заболевания. В большей степени он опосредуется особенностями течения болезни и состоянием иммунной системы пациента. Титры антител у людей с неактивным туберкулёзом обычно всё-таки существенно ниже, чем у больных, и это дает возможность при соблюдении определенных правил вывести некий дискриминационный уровень, при преодолении которого можно говорить о высокой вероятности активного туберкулеза.

    Методы серодиагностики туберкулёза постоянно совершенствуются и развиваются, вместе с тем, ряд проблем не получил полного разрешения. Учитывая специфику заболевания (наличие неактивного и активного вариантов туберкулёза, многообразную локализацию процесса, индивидуальность реакций иммунной системы), достичь 100% чувствительности, вероятно, невозможно. Однако к этой отметке можно попытаться максимально приблизиться.

    При разработке новой тест-системы для иммуноферментной серодиагностики туберкулёза сотрудники фирмы “Вектор-Бест” выделили два ключевых момента:

    Во-первых, поскольку у каждого больного при возникновении активной формы туберкулёза вырабатывается свой собственный, индивидуальный спектр антител, при конструировании тест-системы было решено использовать не один-два, а комплекс наиболее иммуногенных антигенов в расчете на более универсальную чувствительность по отношению к различным формам туберкулёза.

    Во-вторых, тест-система должна выявлять специфичные антитела, принадлежащие ко всем классам иммуноглобулинов. Большинство тест-систем рассчитано на определение только иммуноглобулинов класса G, поскольку считается, что IgM-антитела присутствуют в крови только в начале заболевания и, в основном, при неактивном туберкулёзе, а при развитии активного процесса уже исчезают. Однако это касается главным образом взрослых. У детей же IgM к возбудителю туберкулёза нередко присутствуют в крови в течение 2-х лет после начала заболевания, причем их уровень значителен даже при относительно низких титрах IgG.

    Антитела класса IgA могут определяться при туберкулёзе как в крови (сывороточный IgA), так и в секретах, моче, мокроте (секреторный IgA). Часто в диагностической практике происходит недооценка этого факта. Установлено, что уровень специфических IgA при туберкулёзе подвержен значительным колебаниям, однако это относится в основном к секреторному IgA. В ряде опубликованных в последнее время работ сообщалось о увеличении чувствительности серологического анализа на туберкулёз (на 10–20%) при одновременном определении IgG и сывороточных IgA. По предварительным данным, полученным сотрудниками фирмы “Вектор-Бест”, дополнительное к IgG определение специфичных антител IgA и IgM у детей 7–13 лет увеличивает чувствительность ИФА-теста в среднем на 40 % без снижения специфичности.

    При проведении исследований по разработке новой иммуноферментной тест-системы, названной “АТ-ТУБ-Бест”, полученные результаты сравнивали с данными анализа в тест-системах “Акватуб-АТ-1” (производства фирмы “Аквапаст”, Санкт-Петербург) и “МycoDot” (“DynaGen”, США). В табл. 2 приведены сравнительные характеристики чувствительности указанных тест-систем на двух выборках сывороток крови больных из Казахстана и г. Новосибирска и на здоровых донорах (СПК г. Новосибирска).

    В результате проведенных предварительных исследований найден оптимальный вариант конструкции тест-системы, обеспечивающий ей более высокую чувствительность (при сохранении специфичности) по сравнению с тест системой “Акватуб-АТ-1” Это достигается за счет использования для иммобилизации на подложку очищенного комплекса антигенов микобактерий, а также применения сбалансированного пероксидазного конъюгата антивидовых антител к иммуноглобулинам трёх основных классов — G, M, и A.

    Комплектация тест-системы готовыми к работе планшетами с сорбированным и стабилизированным в лунках антигеном позволяет упростить анализ и сократить его время. В набор тест-системы “АТ-ТУБ-Бест” входят все необходимые для проведения анализа реактивы и материалы. Дополнительное оборудование при визуальном учёте результата: флаконы, автоматические пипетки; при инструментальном — флаконы, автоматические пипетки, фотометр (с детекцией при 492 нм).

    Идеальных тест-систем не существует. Диагностика туберкулёза очень сложна, и ни один тест не может быть самодостаточен. Только учтя все клинические симптомы и результаты анализов, можно сделать более-менее правильные выводы. Скрининговые обследования — это только начальный этап в диагностике туберкулёза. Обнаружение специфических антител в крови ещё не может служить достаточным основанием для постановки диагноза. Иногда высокие уровни антител могут быть и у здоровых людей, когда-то болевших туберкулёзом. Положительный результат может служить основанием лишь для немедленного углубленного обследования пациента, которое должно включать контроль характерных для активного туберкулёза симптомов (персистирующий кашель и субфебрильная температура, ночное потоотделение, боли в грудной клетке, общее недомогание, изменение в суставах и т.д.), анализ крови (лейкоцитоз), рентгеноскопию грудной клетки и обследование других органов, со стороны которых есть определенная симптоматика.

    источник