Точность анализа пцр крови на туберкулез

Полимеразная цепная реакция (далее ПЦР) — это высокоточный метод молекулярно-генетического исследования материла, который позволяет выявить у человека различные инфекционные заболевания и установить генотип возбудителя.

ПЦР для выявления различных заболеваний стала применяться в самом конце прошлого века. Первооткрывателем этого метода исследования является американский биохимик Кэри Муллис. Свое открытие он сделал в 1983 году. Но еще несколько лет понадобилось, чтобы доработать метод.

С помощью ПЦР-диагностики можно обнаружить фрагменты чужеродного ДНК в любой жидкой среде организма. На анализ могут быть взяты такие жидкости:

• Кровь.
• Слюна.
• Мокрота.
• Выделения из половых органов.
• Смывная жидкость бронхов.
• Желудочный сок.

Лечащий врач сам определяет, какую биологическую жидкость лучше взять на анализ при конкретном заболевании.

ПЦР-диагностика позволяет не только обнаружить микрофрагменты чужеродной ДНК, но и определить к какому конкретному виду она относится. То есть с помощью ПЦР можно не только точно установить возбудителя заболевания, но и выяснить к какому виду он принадлежит.

Процесс анализа ПЦР — очень сложный. Он состоит из нескольких этапов:

1. Сначала нужно обнаружить фрагменты вредоносной ДНК в предоставленном образце.
2. Копирование фрагмента ДНК. Маленького участка ДНК для анализа недостаточно, поэтому его копируют. Нуклеиновая кислота может копироваться в пробирке с помощью фермента полимеразы (вне живого организма). В пробирке образуется множество клонов, то есть происходит цепная реакция. Весь процесс происходит в три этапа под воздействием различных температур.
3. Когда генетического материала становится достаточно для исследования, тогда возбудитель определяется обычными методами.

Метод ПЦР очень точен и может выявить наличие любого возбудителя по небольшому фрагменту ДНК или РНК.

ПЦР-анализ на туберкулез является самым информативным методом диагностирования этого заболевания. Относительно туберкулеза этот метод позволяет не только установить наличие микобактерий в организме, но и определить к какому виду они принадлежат.

Результат ПЦР диагностики может быть простой и расширенный. В простом результате указывается только наличие/отсутствие микобактерии. Расширенный результат дает представление о дополнительных параметрах протекания заболевания. Правильно понять, что написано в результате анализа ПЦР может только фтизиатр.

ПЦР-диагностика туберкулеза не проводится всем без исключения. Это объясняется дороговизной реактивов и недоступностью проведения исследования в некоторых отдалённых районах (в таких местах пользуются другими методами диагностики).

Показаниями для проведения ПЦР-исследования являются:

• Длительный контакт с больным туберкулезом.
• Беременность. ПЦР крови на туберкулез является самым быстрым и безопасным методом для беременной женщины.
• Экстренная ситуация. Например, необходимость срочного оперативного вмешательства, при котором нужно точно установить наличие/отсутствие туберкулеза в организме.
• Аллергическая реакция на туберкулиновые пробы.
• ВИЧ-инфекция.
• Невозможность диагностирования заболевания другими способами, при наличии явных признаков туберкулеза.
• Неоднозначные симптомы, которые не позволяют создать четкую клиническую картину заболевания (болезни верхних дыхательных путей, сопровождающиеся большим количеством мокроты, кровохарканьем и пр.).

Метод ПЦР, при всей своей сложности и дороговизне, проводится и расшифровывается в течение нескольких часов. Что делает этот метод золотым стандартом при диагностике туберкулезной инфекции.

Забор материала — это первый этап при выполнении ПЦР-исследования. Для того, чтобы выполнить качественный анализ, нужно соблюдать определенные правила по сбору материла:

• Для ПЦР мокроты на туберкулез нужно тщательно провести туалет полости рта. Делать это нужно вечером и утром перед анализом. Все это время не есть. Вечером выпить муколитическое средство для лучшего отхождения мокроты.
• Перед сдачей крови на ПЦР нужно не употреблять пищу в течение 8 часов. Лучше всего производить забор крови утором натощак. Курить перед забором крови также нельзя. Кровь берется из вены на локтевом сгибе руки в стерильную пробирку. В эту же емкость добавляется антикоагулянт, чтобы кровь оставалась жидкой. Смешивать антикоагулянт с кровью нужно очень аккуратно, не делая резких движений. Если кровь была взята не в лабораторных условиях, то она должна быть предоставлена лаборанту до истечения пятичасового срока. Иначе результат может быть не точным.
• Моча собирается в стерильную емкость утром, до приема пищи. Перед сбором мочи необходим тщательный туалет промежности.
• Остальные виды жидкостей (смывы с бронхов, спинномозговая жидкость) может собрать только специалист в условиях стационара.
• Перед забором жидкостей на ПЦР-исследование запрещено принимать некоторые препараты (например, прием некоторых антибиотиков нужно прекратить за две недели до забора материала).
• Требования к лаборатории, в которой проводится забор анализов на ПЦР очень строгие. Лаборатория должна быть стерильна, чтобы не произошло перекрестное загрязнение материала. В этом случае результаты могут быть ложноположительными.

ПЦР-тест на туберкулез — высокоточный информативный анализ. И требования к его проведению крайне строгие. Чтобы анализ получился, нужно соблюдать регламент.

Для работы в ПЦР-лаборатории приглашаются специально обученные врачи: бактериологи, вирусологи, микробиологи. Все они прошли дополнительное обучение для работы на сложном оборудовании.

Лаборатория должна иметь лицензию на выполнение работ связанных с бактериологически-опасными вирусами и бактериями.

В самой лаборатории должны быть выделены такие рабочие зоны:

• Зона приемки и сортировки проб.
• Зона подготовки проб. В этом помещении выделяются нуклеиновые кислоты из образцов материала.
• Зона проведения реакционных проб.
• Зона для учета результатов и расшифровки анализов.

Все помещения располагают последовательно. Допуск в эти зоны разрешен только работающим там сотрудникам, которые при входе соблюдают правила личной защиты от бактерий и вирусов.

Лучше, если есть возможность расположить лабораторию в отдельно стоящем здании с собственной системой вентиляции.

В лаборатории соблюдаются стерильные условия работы, чтобы избежать перекрестного загрязнения проб. Даже если один фрагмент чужеродной ДНК попадет в исследуемый материал, ПЦР его размножит, и анализ получится ложноположительным.

В каждой зоне лаборатории имеется свой набор оборудования и посуды для проведения исследований. Также имеются свои холодильники, которые не могут быть использованы в других целях, кроме хранения материала конкретной зоны исследований.

Использованные расходные материалы и остатки биологического материала уничтожаются специальными способами, в соответствии с инструкциями.

ПЦР-тест на туберкулез имеет множество плюсов, которые делают этот метод диагностики все более востребованным:

• Срок проведения. Несмотря на сложность проведения анализа, он готовится намного быстрее других лабораторных методов диагностики туберкулеза (около пяти часов). Это свойство анализа ПЦР становится особенно важным, когда анализ необходимо провести экстренно.
• Анализ ПЦР абсолютно безопасен и может проводиться беременным женщинам и детям.
• ПЦР-исследование можно сделать, когда по каким-то причинам нельзя выполнить другие методы диагностики.
• С помощью ПЦР-диагностики можно провести исследование любой биологической жидкости на выбор. В некоторых случаях это имеет большое значение.
• Позволяет обнаружить возбудителя на любой фазе заболевания. Даже после проведенного лечения, сохранившиеся остатки ДНК мертвых микобактерий будут обнаружены.
• Высочайшая чувствительность этого метода позволяет обнаруживать в биологическом материале даже единичные фрагменты ДНК микроорганизмов.
• Метод ПЦР позволяет не только обнаружить присутствие заболевания, но и может определить генотип возбудителя, отличив его от похожих микроорганизмов.
• ПЦР-исследование очень эффективно при рецидивирующем течении заболевания.
• Благодаря высочайшей чувствительности, анализ ПЦР может распознать микобактерии в организме человека, когда он только недавно инфицировался туберкулезом, задолго до появления клинических симптомов.

Казалось бы, метод ПЦР-диагностики содержит в себе только плюсы, но это не так.

Минусы этого метода исследования тоже существенны. При выборе метода исследования туберкулеза это также стоит учитывать:

• Это дорогостоящий метод исследования. Для проведения ПЦР-диагностики нужна специально-оборудованная лаборатория. Оборудование для таких исследований стоит очень дорого, и не во всякой лаборатории оно имеется. В крайнем случае, можно обратиться в платную лабораторию.
• Сразу же после проведенного лечения метод ПЦР применять не рекомендуется. В крови пациента некоторое время сохраняется небольшое количество живых и мертвых микобактерий. Если провести анализ в этот период, он покажет ложноположительный результат.
• При мутациях микобактерий, анализ будет недостоверным, так как нормальная ДНК не сможет синтезироваться.
• Для ПЦР-исследования имеет значение правильный выбор биологической жидкости на анализ.
• Сверхчувствительность. Это тот случай, когда достоинство метода становится его недостатком. Если при проведении анализа в биологический материал каким-то образом попадет даже единичный фрагмент чужеродного ДНК, то ПЦР его размножит, и будет получен ложный результат.

ПЦР-лаборатория имеется только в крупных противотуберкулезных диспансерах и диагностических центрах.

Объясняется это высокой стоимостью оборудования и высокими требованиями к содержанию лаборатории (реактивы, обработка).

Медицинские чиновники не сильно переживают из-за отсутствия ПЦР-лаборатории в каком-то конкретном населенном пункте, поскольку анализы на туберкулёз можно провести другими методами (культивирование микобактерий, микроскопическое исследование).

Если в населённом пункте нет бесплатной ПЦР-лаборатории, пациент по желанию может обратиться в платное учреждение.

В последнее время ПЦР-диагностика занимает все более прочные позиции в диагностике туберкулеза и других заболеваний, отодвигая на задний план другие методы диагностики.

источник

Туберкулез — опасное заболевание, которое успешно лечится при своевременной диагностике.

Одно из наиболее информативных исследований, позволяющих выявить недуг на ранней стадии, носит название метод ПЦР (полимеразной цепной реакции).

Анализ ПЦР — не только самое информативное, но и одно из самых доступных исследований, которое позволяет выявить туберкулез на ранних стадиях.

Все живые микроорганизмы, включая вирусы и бактерии, содержат в своей структуре молекулы РНК и ДНК. Выделив эти кислоты, можно с большой достоверностью сказать, какие чужеродные агенты присутствуют в крови человека, и поставить точный диагноз.

Суть метода ПЦР заключается в особой обработке образцов биологических жидкостей, в результате чего можно определить, к какому виду относятся присутствующие в нем микроорганизмы.

Методика ПЦР применяется у людей с тяжелыми поражениями легких в тех случаях и респираторными проявлениями (сильный кашель, кровохаркание), когда точно диагностировать болезнь по клиническим симптомам невозможно.

Рекомендуется пройти исследование и после непосредственного контакта с носителем заболевания. В число преимуществ, которыми он обладает, входят:

• скорость выполнения — для получения результата не нужно выращивать культуру возбудителя или проводить другие сложные процедуры;
• высокая информативность — при диагностике туберкулеза точность анализа достигает 90% и выше;
• высокая чувствительность и специфичность — для выявления возбудителей болезни в материале может содержаться всего одна клетка вируса;
• универсальность — для анализа подходят практически любые биологические жидкости: мокрота, кровь, смывы бронхов.

Для сравнения: точность микроскопии мазков мокроты, которая используется для выявления туберкулеза, составляет всего 40-50%, а при низком количестве возбудителей снижается до 10% и меньше. Культуральные исследования мокроты более информативны, но для получения результатов требуется от 2 до 8 недель.

Можно использовать ПЦР на туберкулез вместо Манту, если у человека имеются какие-либо противопоказания к пробе.

К недостаткам методики относится риск получения ложноотрицательного результата. Иными словами, отсутствие в мокроте, крови или моче специфического ДНК еще не говорит об отсутствии туберкулеза у больного.

Важно. При диагностике туберкулеза у детей чувствительность анализа ПЦР ниже, чем у взрослых, и составляет около 25-83%.

Фото 1. Делать ПЦР вместо Манту ребенку, это хороший вариант, если он аллергик или часто болеет.

Процедура проведения анализа ПЦР проводится посредством специального прибора под названием амплификатор, и состоит из четырех этапов. Для проведения исследования необходимы участки ДНК, с которых начинается синтез молекул, нуклеотиды (основы молекул ДНК), а также полимераза, или фермент, ускоряющий проведение процедуры.

1. Забор биологического материала (мокрота, кровь, смывы бронхов).
2. Прогревание образца до температуры около 98% для разрушения первичной структуры цепочки ДНК.
3. Отжиг, или снижение температуры на несколько градусов, чтобы связать праймер с нитью ДНК.
4. Синтез молекул, необходимых для получения результата.

После проведения 25-30 подобных циклов образуется определенное количество копий ДНК вирусов, по которым легко определить возбудителя заболевания.

Внимание: анализ ПЦР не отличает «мертвые» микроорганизмы от «живых», поэтому результат может быть положительным в течение определенного времени после проведенного лечения.

Если сдается анализ крови ПЦР на туберкулез, то нет необходимости в специальной подготовке, но больным рекомендуется придерживаться общих правил: воздержаться от приема пищи не менее чем на 8 часов, исключить алкоголь и прием медикаментозных препаратов, не курить в течение часа перед забором материала.

Мокроту собирают в утреннее время после чистки зубов и тщательного полоскания полости рта.

Если экссудат выделяется плохо, накануне вечером следует принять отхаркивающий препарат или сделать ингаляцию. Диагностическую ценность имеет мокрота со слизью, гноем, белыми или желтоватыми вкраплениями.

Если взять мокроту на анализ невозможно, для выявления возбудителей заболевания используются смывы из бронхов. Такой анализ не требует подготовки, а забор материала выполняется следующим образом. С помощью гортанного шприца больному вливают в трахею раствор хлорида натрия, который вызывает сильный кашель — выкашлянная жидкость используется для исследования.

Внимание. Результат анализа искажают антибиотики, гепарин и другие препараты, использующиеся для местного лечения, поэтому исследование рекомендуется проводить через 10-14 дней после приема.

источник

Самыми опасными для самого больного и окружающих являются инфекционные заболевания, протекающие в скрытой форме. Отсутствие явных симптомов не позволяет начать своевременное лечение. При этом болезнь прогрессирует, а больной является заразным для окружающих. Из таких заболеваний самым распространенным является туберкулез. По статистике около трети людей даже в высокоразвитых странах инфицированы. Поэтому так важно проводить своевременную диагностику этого заболевания. Наряду с общеизвестными пробами Манту, диаскинтестом и флюорографией для выявления туберкулеза применяется клинический анализ крови.

Туберкулез – это очень заразное инфекционное заболевание. Передается оно воздушно-капельным путем и вызывается палочкой Коха. Эти микобактерии очень устойчивы, они сохраняются во внешней среде несколько месяцев, а при попадании в организм человека начинают постепенно размножаться. Чаще всего туберкулез локализуется в легких, но может поражать другие органы.

Опасность этой болезни в ее хроническом течении, причем на начальном этапе, часто ничем не проявляет себя. Эта инфекция очень заразна, больной может не подозревать, что инфицирован, но для окружающих он будет опасен. А лечить туберкулез очень сложно, так как бактерии устойчивы к внешним воздействиям.

Вылечить туберкулез легче всего в том случае, когда он диагностирован на начальном этапе. Поэтому так важно вовремя выявить эту болезнь. Во всем мире обязательно проводят профилактические обследования на туберкулез.

Обычно диагностика у детей проводится с помощью туберкулиновой пробы – реакции Манту или диаскинтеста. Но не всегда эти исследования достоверны. Они не проводятся при обострении хронических заболеваний, при аллергических реакциях или кожных болезнях, а также при эпилепсии. После 14 лет и для взрослых основным методом выявления туберкулеза является флюорография грудной клетки. Если при этом обследовании выявлены какие-то отклонения или есть подозрение на инфицирование, врач назначает более тщательную диагностику.

Это делается для того, чтобы вовремя начать лечение при выявлении инфекции, а также исключить риск заражения других людей, так как туберкулез очень заразен. Сдавать кровь рекомендуется при любом подозрении на эту болезнь, а также вместо проведения реакции Манту в том случае, когда к ней имеются противопоказания. Исследуется кровь также для контроля эффективности лечения при туберкулезе.

Анализ крови на туберкулез не требует специальной подготовки, не имеет противопоказаний. Результат можно получить уже на следующий день. Этот метод диагностики позволяет точнее всего выявить наличие инфекции в организме. Чаще всего проводят его при положительной реакции на туберкулиновую пробу. Но сдавать кровь на туберкулез требуется также после контакта с инфицированным человеком или при подозрении на внелегочный туберкулез.

После того, как ребенку сделали прививку БЦЖ, проводить Манту или диаскинтест нецелесообразно, так как они покажут ложноположительные результаты. При этом для диагностики рекомендуется делать анализы крови.

Рекомендуется сдать кровь на выявление палочки Коха также в том случае, когда появляются симптомы этого заболевания:

• кашель, не прекращающийся дольше 3 недель;
• постоянная субфебрильная температура;
• сильная слабость и снижение работоспособности;
• беспричинная потеря веса;
• повышенная потливость, особенно по ночам;
• черты лица заостряются;
• больной бледен, но на щеках неестественный румянец;
• увеличиваются лимфоузлы.

Когда пациент обращается к врачу с такими жалобами, его направляют к фтизиатру. Это врач, занимающийся лечением туберкулеза. Он назначает больному комплексное обследование, которое обязательно включает анализы крови.

Для диагностики туберкулеза существует несколько видов анализов. Название каждого из них отражает суть исследования, но многим людям это ничего не говорит. Поэтому лучше выяснить у врача, с какой целью назначается тот или иной анализ и что он позволяет узнать. В зависимости от риска инфицирования, общего состояния здоровья больного и его возраста назначается один из анализов:

• общий или биохимический;
• квантифероновый тест;
• иммуноферментный или ИФА;
• ПЦР или полимеразная цепная реакция.

Все эти анализы разные, они могут выявить инфицирование на начальном этапе, скрытую форму туберкулеза, его активную стадию. Они применяются также при лечении уже диагностированной болезни. Но, какой анализ сделать в каждом конкретном случае, может решить только врач. Иногда требуется провести комплексную диагностику, только несколько методов совместно позволяют точно определить наличие инфекции и место ее локализации.

Такое исследование проводится регулярно при туберкулезе легких и других органов. Общий анализ крови не может выявить наличие палочки Коха в организме, но он позволяет оценить состояние здоровья пациента. Такое исследование необходимо для того, чтобы отслеживать, как организм сопротивляется инфекции, эффективно ли проводимое лечение.

Оценивая общий анализ крови больного, врач прежде всего обращает внимание на количество лейкоцитов, лимфоцитов и скорость оседания эритроцитов. Уровень лейкоцитов обычно при туберкулезе повышается, а количество лимфоцитов уменьшается. При активной форме болезни в крови также будет повышенный уровень нейтрофилов. Но наиболее информативным является показатель СОЭ. В норме он не бывает выше 20-30 единиц. А при туберкулезе скорость оседания эритроцитов возрастает до 50 единиц и выше.

Кроме того, иногда врачи при подозрении на туберкулез назначают биохимический анализ крови. Он информативен для выявления острой формы заболевания. При этом будут повышены показатели белка, мочевины, холестерина и лизоцима. Такой анализ также применяется для выявления особых форм туберкулеза, например, при поражении печени. В крови при этом выявляется повышение количества билирубина, а также ферментов АЛАТ и АСАТ.

Особенность этого анализа в том, что он позволяет определить наличие в крови антител к микобактериям туберкулеза. Несмотря на то, что эта диагностика точно показывает, инфицирован больной или нет, она не позволяет узнать, какой орган поражен инфекцией. Кроме того, с помощью квантиферонового теста нельзя определить, находится болезнь в активной фазе или скрытой. Иногда у больного с уже пролеченным туберкулезом такой тест показывает положительный результат.

Когда необходимо сделать анализ крови на туберкулез вместо Манту, назначают чаще всего именно квантифероновый тест. Он не дает ложных результатов после прививки БЦЖ, так как эта вакцина не вызывает появление этих специфических интерферонов.

Особенность квантиферонового анализа в том, что выявляются в крови особые интерфероны, которые вырабатываются только при наличии в организме микобактерий туберкулеза. Называется этот анализ тестом, так как является альтернативой диаскинтесту, но проводится не под кожей больного, а в пробирке. Суть его в том, что к исследуемой плазме крови добавляют антигены. Потом оценивается реакция иммунной системы организма, проявляющаяся в выработке интерферонов.

Иммуноферментный анализ более точен. Это тоже исследование крови на антитела к туберкулезу. Но, кроме этого, с его помощью оценивается качество и количество различных элементов крови. Называют его еще серологическим исследованием крови. При этом определяется наличие определенных иммуноглобулинов, которые вырабатываются иммунной системой при инфицировании.

Но этот анализ может быть неточен, он не всегда позволяет выявить микобактерии туберкулеза. На начальном этапе болезни иммуноглобулины еще не вырабатываются, поэтому в крови не определяются. Не используют ИФА вместо реакции Манту после прививки БЦЖ, так как он тоже может показать ложный результат. Кроме того, недостоверным он будет при иммунодефиците.

Поэтому для диагностики его используют редко, чаще всего имунноферментный анализ применяется для оценки эффективности лечения туберкулеза. Часто назначают его при наличии положительной реакции на пробу Манту.

ПЦР, или полимеразная цепная реакция, – это сейчас самый точный метод диагностики туберкулеза. Поэтому его часто назначают при наличии спорных результатов диагностики или при подозрении на инфицирование. С помощью ПЦР можно со 100% уверенностью определить болезнь.

Это довольно сложное обследование, основанное на оценке различных фрагментов ДНК в крови. Он позволяет обнаружить даже малое количество бактерий в крови. Кроме того, исследуя методом ПЦР другие жидкости организма, например, мокроту, мочу, внутрисуставную жидкость, можно точно определить место локализации болезни.

Полимеразная цепная реакция проводится по сыворотке крови. Обычно анализ проходит в несколько этапов. Сначала исследуют плазму под микроскопом, пытаясь выявить палочку Коха. Потом с помощью разных реактивов и изменения температуры получают генетический материал. Исследуя ДНК, можно определить, присутствует ли бактерия в организме и в каких количествах.

Благодаря высокой точности и безопасности этого исследования его проводят в любом возрасте. Именно ПЦР чаще всего назначается при невозможности проведения реакции Манту или при подозрении на туберкулез у взрослых людей. Этот анализ позволяет быстро диагностировать заболевание. С его помощью можно определить место локализации инфекции, а также вовремя выявить наличие рецидивов болезни. Метод полимеразной цепной реакции позволяет оценить эффективность проводимого лечения.

Выявление туберкулеза по анализу крови имеет много преимуществ перед другими методами обследования. Прежде всего, он самый точный и достоверный. Вероятность ложных результатов и необходимость в повторном обследовании при такой диагностике очень низкая.

Но такие анализы сейчас делаются только платно, так как они не входят в перечень обязательных. Поэтому не всем они доступны. Например, кватифероновый тест в Москве можно сделать за 2000-3500 рублей. Поэтому чаще всего детям для профилактики инфицирования проводят тест Манту, а взрослым – флюорографию.

Расшифровка анализов крови должна проводиться врачом. Обязательно нужно при этом учитывать другие результаты диагностики, возраст больного, наличие хронических заболеваний и общее состояние его здоровья. Несмотря на это, подобные методы диагностики туберкулеза менее субъективны, чем реакция Манту и диаскинтест.

Анализы крови на туберкулез являются самым достоверным и точным методом диагностики этого заболевания. Особенно информативны они для выявления латентной инфекции, при которой больной является бактерионосителем и может представлять опасность для окружающих. Подобная диагностика не имеет противопоказаний и не вызывает никаких негативных реакций организма. Но обязательно они назначаются только при подозрении на туберкулез или при положительных результатах распространенных тестов: Манту или флюорографии.

источник

Расшифровка результатов анализа ПЦР на туберкулез.

Всем школьникам ежегодно делают реакцию Манту, при помощи которой выявляют заболевание туберкулёзом.

В наше время набирает обороты диагностика заболевания туберкулёзом посредством анализа ПЦР.

Сейчас этот метод считается самым точным и эффективным способом диагностики.

С каждым годом частота заболеваний этой тяжелой инфекцией становится всё больше.

Медики стараются найти более надёжные способы выявления инфицирования микобактериями на самых ранних стадиях их развития.

Болезнь, обнаруженная в самом начале развития, лечится намного легче, чем, когда она перешла в более активную фазу. Именно с этой целью сейчас и применяют анализ ПЦР.

ПЦР – полимеразно-цепная реакция. Прибегнув к её помощи можно всего лишь в течение нескольких часов выявить наличие палочки Коха, даже если она будет всего одна среди огромного количества других клеток.

• самое главное – стопроцентное обнаружение микобактерий, потому что в пробе, взятой на анализ определяется от 10 до 100 клеток;
• анализ очень быстрый – на его проведение нужно всего 4-4,5 часа;
• специфичность ДНК микобактерий очень высокая;
• выявление туберкулёза лёгких практически на начальной стадии, для других методов это можно сказать просто нереально;
• определяется только часть бактерии возбудителя заболевания, которая характерна только для этого вида микобактерий;
• для исследования подходят: кровь, кал, слюна, моча, мокрота, спинномозговая жидкость;
• для проведения такого метода исследований нет противопоказаний, его можно применять для обследования детей и беременных.

Для исследования на заболевание туберкулёзом чаще всего берут мокроту, которая выделяется во время кашля.

Взятую пробу помещают в специальный прибор — амплификатор, который удваивает цепочки ДНК.

Затем их исследуют на наличие ДНК микобактерий туберкулёзис, способствующих развитию туберкулёза.

На основании этих испытаний делают заключение: результат может быть положительным или отрицательным.

Современное медицинское оборудование способно провести не только полимеразно-цепную реакцию, а ещё и выдать результаты проведённого обследования, их расшифрует врач-фтизиатр.

Иногда результаты этого анализа бывают ложноположительными. Это может произойти только в случаях неправильной подготовки к забору, сдаче или транспортировке материалов для проведения анализа.

Именно по этой причине больным и докторам необходимо строго выполнять правила.

Результат расшифровки анализов бывает простым или сложным. Простой – определяется формулировкой «положительно» или «отрицательно».

Наличие отрицательного значения расшифровки говорит, что в образце, представленном для исследования, не выявлено следов ДНК микобактерий туберкулёза и пациент здоров.

В случаях, когда расшифровка имеет положительное значение производится сложная расшифровка этого теста.

Этот вид расшифровки помогает сделать наиболее точные выводы.

Пациенты не могут самостоятельно и правильно расшифровать полученные данные. Это сделает врач и всё подробно объяснит больному.

Благодаря этим показателям доктор определит местоположение очагов, стадии их развития и причины появления туберкулёзной инфекции.

На основании этих выводов выбираются методы и препараты для необходимого лечения.

• о результате говорит содержание относительных единиц. В случае, когда их менее 0,9 – результат отрицательный;
• когда содержание относительных единиц 0,9 — 1,1 – результат сомнительный;
• в случаях, когда присутствие относительных единиц превышает 1,1 — результат является положительным.

Сделать анализ ПЦР часто направляют больных, в случаях затруднительной постановки диагноза. Обычно это тест проводят комплексно вместе с другими исследованиями.

Это делается в случаях подозрения первичного инфицирования, а другие способы не позволяют выявить заболевание.

Или же ПЦР-диагностику проводят в случаях, если больной самостоятельно не может прибыть в лабораторию, тогда материалы для проведения анализа доставляют его родственники.

Это может быть моча, мокрота, слюна или посев. Посевы на дому могут сделать только медицинские работники, имеющие сертификат на выполнение таких действий.

Именно ПЦР поможет выявить заболевания туберкулёзом у детей. Это исследование совершенно безвредно и имеет более высокую точность, в сравнении с пробой Манту.

Также проведение этого анализа показано и беременным женщинам, которым нельзя делать флюорографию.

Используют ПЦР-анализ и пред проведением операций, потому что такой способ более быстрый и точный.

Если возникли сомнения в результатах рентгена лёгких и пробы Манту, такую диагностику можно пройти самостоятельно.

При заболевании туберкулёзом проводится масса различных анализов, которые назначает врач, чтобы как можно точнее поставить диагноз. Часто приходится проходить целый комплекс анализов.

Иногда в расшифровке ИФА могут быть ложноположительные результаты, из-за содержания в крови антител после приёма курса лечения.

Также недостоверными могут оказаться и другие исследования. На данный момент ПЦР — самый точный из способов диагностики.

Направить на ПЦР-диагностику сможет любой из перечисленных специалистов, а расшифрует результаты и сделает окончательные выводы — врач-фтизиатр.

Кроме этого фтизиатр изберёт нужный курс лечения и где именно его потребуется пройти: в условиях специализированного стационара или же на дому.

Вместе с этим даст пациенту нужные рекомендации по борьбе с этим заболеванием.

Хоть этот способ и универсален и высокоточен, но его использование повсеместно просто невозможно.

Потому что для его проведения нужно очень дорогое оборудование, и не во всех государственных поликлиниках и больницах есть средства, для его приобретения.

А сдать такой анализ в платных клиниках есть возможность далеко не у всех пациентов.

• этот анализ имеет высокую стоимость;
• быстрые мутации и изменения микобактерий сводят эффективность ПЦР-анализа к нулю, потому что происходит изменение строения цепочек ДНК бактерий;
• необходимо правильно выбрать материал, который будет подвержен исследованию, в противном случае оно не будет эффективно. Если при туберкулёзе лёгких взять на исследование мочу, то ПЦР-тест не выявит присутствия микобактерий.

Исследования ПЦР – новые методики, которые уже очень хорошо зарекомендовали себя. Самым большим плюсом этих исследований стала универсальность.

Для проведения этого анализа можно использовать любую среду: спинномозговую жидкость, кровь, слюну, мочу, мокроту и т.д.

При современной оснащённости лабораторий выявить микобактерии можно разными способами на ранних стадиях развития и у взрослых, и у детей.

Но несмотря на все профилактические меры и рекомендации, которые проводятся нашими медиками, заболеваемость растёт год от года.

Расшифровывая результаты исследований, врачи делают заключение, что каждый раз патология приобретает всё более тяжелые и осложнённые формы.

За всё происходящее вина лежит, в первую очередь на самих больных. Сделайте регулярными профилактические посещения врача.

Сегодняшние методы диагностики различных заболеваний в значительной степени облегчают лечение и снижают риск осложнений.

источник

Специфическая туберкулезная инфекция многие годы присутствует в тканях и структурах человека, а при определенных обстоятельствах быстро распространяется по организму за 2-3 месяца. Порой оптимальный курс лечения выбрать очень тяжело по причине запоздалой диагностики и адаптации возбудителя ко многим медикаментам.

Новейшая ПЦР диагностика туберкулеза помогает обнаружить не только развившуюся болезнь, но и сам возбудитель, когда первые признаки заболевания еще не появились.

Диагностирование туберкулеза способом ПЦР появилось недавно. В 1983 году микробиолог из Америки Кэри Муллис изобрёл процедуру, при которой микроорганизмы стало возможно восстановить из биологического материала по короткому сегменту. Эта работа заслужила Нобелевскую премию.

ПЦР на туберкулез – это полимерный цепной процесс, при котором проходит диагностика и выявление вирусных возбудителей способом генной инженерии. Методика используется в иммунологических, микробиологических, вирусологических и биохимических лабораториях.

Универсальный метод помогает докторам при диагностике и выявляет инфекционный процесс даже после первых часов заражения, задолго до появления симптомов. Исследование возможно даже при маленьком количестве биоматериала.

• Несколько отрезков ДНК (праймеров), с них начинается биологический синтез;
• Нуклеотидные соединения, основа молекулы ДНК или же РНК;
• Фермент полимераза, которая ускоряет анализ ПЦР.

Сначала из биоматериала от заразившегося человека выделяется сегмент ДНК, при помощи генно-молекулярных способов биосинтеза дальше определяется тип микроорганизмов, которому принадлежит биофрагмент.

Эта сложная реакция занимает меньше времени, чем некоторые биометоды. ПЦР определяет возбудителя за несколько часов, при этом не существует надобности выделять его из биологической жидкости (мокроты, спинномозговой или кровяной среды), не нужно долго растить его на питательной среде. Достаточно, чтобы исследуемый материал содержал нить ДНК инфекционного возбудителя.

При проведении анализа крови ПЦР на туберкулез в пробирке искусственны путем создается синтез рибонуклеиновых кислот туберкулезной микобактерии.

Молекулярная реакция способом ПЦР – это несложная манипуляция, занимающая мало времени. Берется необходимый биоматериал: для определения tbc используется кровь, мокрота, промывная жидкость бронхов.

1. Сначала разрушается первичная форма ДНК, разъединяются 2 цепочки при высокой температуре (максимум 98ОС не больше 2 минут);
2. Затем производится отжиг, первичная температура понижается на несколько делений, возникает связь нити ДНК с праймером;
3. Следующая стадия называется элонгация, при этом происходит биосинтез необходимых молекулярных структур.

Для получения нужного количества копий ДНК должно пройти от 25 до 30 таких циклов, при этом получившееся количество микобактерий легко распознаётся.

Непосредственно всем пациентам с подозрением на ТВЦ проведение цепной диагностики не делается, так как процедура требует использования дорогого оборудования. Не все лечебные государственные учреждения позволяют его приобрести, тем более, что привычные методики диагностирования на микобактерии туберкулеза тоже информативны.

• Тщательное собирание анамнеза, опрашивание больного;
• Внешний осмотр;
• Туберкулиновая проба Манту;
• Рентгенографическое либо флюорографическое обследование;
• По надобности компьютерное диагностирование;
• Микроскопическое или бактериологическое исследование маска с мокротой.

ПЦР на туберкулез делается исключительно тогда, когда не имеется возможности сделать другой инструментальный анализ либо в сложных для диагностики обстоятельствах.

Несмотря на то, что изобрели великое множество методов диагностирования, количество больных туберкулезом продолжает расти. Кроме того заболеваемость приобрела некоторые особенности : нередко наблюдается тяжелая форма недуга, увеличивается число летальных исходов, возбудитель приобретает устойчивость имеющимся химиопрепаратам.

Многие люди не желают каждый год проходить профилактический осмотр, отказываются от вакцинации, что ведет к увеличению заболеваемости. Такие обстоятельства требуют эффективных и информативных способов исследования, доступных для взрослых и детей с диагнозом tbc. ПЦР имеет преимущества перед другими диагностическими методиками.

Это новейшее исследование отлично себя зарекомендовало. Если по ряду причин сложно поставить диагноз или в некоторых спорных случаях, ПЦР легче обнаруживает туберкулезную палочку в биологическом материале, чем другие методы.

• Это быстрое исследование, небольшой отрезок молекулы дает возможность поставить точный диагноз за короткое время приблизительно за 5 часов, это применяется в экстренных случаях, например перед неотложным оперативным вмешательством;
• Исследование крови на туберкулез возможно, когда другие методики недоступны или противопоказаны – иногда для обнаружения возбудителя tbc приходится делать множество Rg -снимков, облучающая доза при этом слишком большая;
• Используя полимеразную реакцию можно исследовать любые биологические жидкости на присутствие микобактерии. К примеру, можно проводить изучение спинномозговой жидкости при туберкулезном менингите или мочи при мочеполовом туберкулезе;
• Метод безопасен, диагностика туберкулеза у детей при помощи ПЦР не вызывает сложности;
• Способ полимерной реакции выявляет туберкулезную палочку при любых формах и стадиях недуга;
• Наличие в биоматериале всего нескольких бактерий позволяет увидеть присутствие микроорганизмов, так как это чувствительная реакция;
• ПЦР легко диагностирует рецидив болезни.

Несмотря на огромное количество плюсов, всем больным с подозрением на tbc исследование не делается, так как существуют и минусы, их так же учитывают.

Видео — ранняя диагностика

Этот метод диагностики является скорее исключительным, чем закономерным, для этого имеются причины. В первую очередь во внимание берётся дороговизна метода. Оборудование дорого стоит, государственные поликлиники не имеют возможности его приобрести из-за высокой цены, но большинство платных лабораторий оборудование имеют, анализ в них делается.

• Метод обнаруживает убитые бактерии, которые погибли после лечения, при этом ПЦР показывает положительный результат. Сразу после химиотерапии проводить исследование нет смысла, так как результат будет недостоверным;
• Туберкулезные микобактерии подвержены мутации, что приводит к неэффективности способа, при этом нить ДНК не может последовательно синтезироваться.

Среда для исследования должна тщательно выбираться, взятие крови или мочи происходит только в том случае, если есть подозрение на заражение. Нельзя взять мокроту для исследования, если подозревается туберкулез костей. В этой ситуации диагностика будет неверной.

Кровь и моча больного туберкулезом для изучения на ПЦР берется редко, выявление болезни таким способом сомнительно. В этих биосредах возбудитель определяется только при сепсисе, либо в случае диссеминированного туберкулеза. Локальные формы встречаются наиболее часто, при них кровь и моча могут оставаться без изменений. Чаще всего для изучения берется мокрота.

Большинство больных направляются на ПЦР диагностику в спорных и сложных случаях туберкулеза. Когда медицинские работники выдают направление на исследование?

1. Если произошел контакт с человеком, у которого достоверно поставлен диагноз туберкулёза, но обычными способами диагностику сложно провести;
2. При тех обстоятельствах, если больного предоставить в поликлинику невозможно для рентгенографии или других исследований. В такой ситуации его проще обследовать при помощи полимерного метода. Анализ мокроты просто доставляется в лабораторию в специальной таре, а результат становится известен спустя несколько часов;
3. Перед операцией бывает необходимо срочно определить болен ли пациент туберкулезом, в этом случае показано проведение ПЦР;
4. Из-за безопасности способа, можно проводить обследование беременной женщины или ребёнка, при этом не создается дополнительная рентген-нагрузка;
5. Сомнительные результаты теста Манту.

Каждый желающий может пройти обследование платно, если туберкулез не подтвердился при помощи бактериологии и рентгеноскопии. Так случается, если очаг в лёгочной ткани невидим на Rg- снимке в прямой проекции, а пациент не смог собрать мокроту правильно, но признаки туберкулеза человека беспокоят.

Современная ПЦ реакция для диагностики – это залог успешного лечения, в результате которого распространенность заболевания снижается. Традиционные способы определения недугов не всегда дают желаемый эффект.

Так ПЦР анализ на сегодняшний день стал одним из достоверных и безопасных методов диагностирования на ранних сроках развития болезни.

источник

Возбудителем туберкулеза является микобактерия под названием туберкулезная палочка или палочка Коха. Попадая в организм человека, она может длительное время себя никак не проявлять. Но со временем, как только возникнут благоприятные условия, бактерия может вызвать туберкулез легких или других органов.

Для успешной борьбы с этим заболеванием очень важно диагностировать его на ранних стадиях. Анализ крови на туберкулез методом ПЦР является самым эффективным и быстрым способом диагностики туберкулеза. На его проведение достаточно четыре часа. Он более удобен, чем другие методы, у него меньше противопоказаний и почти стопроцентная достоверность.

На сегодняшний день анализ ПЦР является одним из новейших методов диагностики различных заболеваний организма. Для выявления туберкулеза этот способ самый эффективный, по сравнению с другими способами, применяемыми до сих пор. Метод был открыт в 1983 году известным химиком К.Мюллисом, через десять лет получившим за него Нобелевскую премию.

В основе этого способа применяется полимеразная цепная реакция, позволяющая определить не только наличие возбудителя в крови, но и его вид. С этой целью при помощи ПЦР метода, выявляется часть ДНК возбудителя и проводится его идентификация. Даже если в крови находится несколько разных возбудителей, эта методика позволяет обнаружить их всех.

Анализ крови ПЦР на туберкулез назначают пациенту, когда есть подозрение на наличие туберкулезной палочки, но другими методами она не обнаруживается.

При желании каждый может сдать этот анализ самостоятельно, обратившись в клинику, где его проводят, например в ИНВИТРО. Это одна из крупнейших частных компаний, содержащих медицинские лаборатории во многих странах.

В настоящее время нет более точного анализа для выявления палочки Коха в организме пациента. Общий анализ крови эффективен, но позволяет получить положительный или отрицательный результат только спустя достаточно длительное время. Для этого делается посев исследуемого материала на питательную среду и лишь через несколько недель становится видно, идет ли размножение бактерии.

Метод ПЦР позволяет выявить ДНК бактерии за считанные часы, что является большим плюсом для диагностики. Кроме того, анализ позволяет точно идентифицировать бактерию, даже если ее в крови очень мало.

Данный метод исследования почти не имеет противопоказаний. Ввиду того, что используется кровь, состояние пациента не имеет значения. Наличие простудных заболеваний не влияет на результат анализа.

Не рекомендуется его проводить после прививки, а также после недавно проведенного лечения. Это объясняется тем, что организм еще не очистился, и остатки бактерий могут повлиять на результат.

Анализ крови ПЦР на туберкулез имеет ряд преимуществ перед другими методами исследования, такими как реакция Манту или рентген. Среди них можно выделить следующие качества:

1. Быстрота выполнения. По сравнению с другими анализами ПЦР делается в течение нескольких часов.
2. Для проведения процедуры можно использовать не только кровь, но и другие биологические выделения организма.
3. Процедура не имеет противопоказаний, ее можно проводить не только взрослым, но и детям. Также подходит беременным женщинам без вреда для их здоровья.
4. Метод позволяет выявить заражение крови бактериями на самых первых стадиях, когда еще нет внешних признаков заболевания.
5. Методика позволяет выявить возбудителя при самых малых количествах бактерий в материале.
6. Дает хороший эффект при исследовании больного, заразившегося повторно.
7. Анализ можно брать независимо от того, как себя чувствует пациент. Например, реакция Манту делается, если у больного нет простудных заболеваний и повышения температуры. В данном случае таких ограничений нет.

Как видно из предоставленного списка, этот метод диагностики гораздо предпочтительнее, чем другие. Он абсолютно безвреден для пациентов, страдающих аллергическими реакциями. Его можно успешно использовать взрослым и детям. Методика позволяет сэкономить время на диагностику и быстрее начать лечение.

Метод также удобен для людей из провинции, где нет соответствующих лабораторий. Им не приходится приезжать несколько раз в клинику, достаточно одного дня, чтобы получить результат анализов и назначение лечения от врача.

Кроме преимуществ у этого метода есть ряд недостатков, которые могут быть препятствием для проведения анализа ПЦР:

1. Относительная дороговизна процедуры. Для проведения такого анализа необходимо дорогостоящее оборудование и не каждая клиника может себе это позволить. Оно есть в крупных лабораториях частных компаний. Цены там, как правило, всегда высокие.
2. Анализ дает правильный результат лишь в том случае, если материал для исследования правильно подобран. К примеру, при туберкулезе мочеполовой системы, исследование крови наличие заболевания не покажет. В этом случае нужно собрать мочу или выделения из мочеполовых органов.
3. Метод не всегда дает точного результата у детей. Это объясняется влиянием прививок. Например, после прививки БЦЖ делать этот анализ не рекомендуется.
4. Есть вероятность получения ложноположительного или ложноотрицательного результата. Что это такое? Способ обладает очень высокой чувствительностью. При сборе материала должна соблюдаться повышенная стерильность. В случае если в материал попадет самое малое количество посторонних бактерий, анализ будет испорчен, результат исказится.

Несмотря на недостатки, метод достаточно широко используется. Например, в тех случаях, когда необходимо срочно определить заболевание у пациента. Его могут назначить беременным при подозрении на инфекцию, способную угрожать ребенку или матери. Иногда назначают детям перед принятием в детский сад. Но это по желанию родителей.

Перед взятием анализа пациенту необходимо провести подготовительные мероприятия. Они зависят от того, какой материал будет сдаваться:

1. Если необходимо сдать кровь, должна быть подготовлена стерильная пробирка. В нее добавляется антикоагулянт – специальный раствор, препятствующий свертыванию крови. В него помещается собранный материал и осторожно смешивается. Кровь собирают одноразовым шприцем из вены.
2. Процедура проводится утром натощак. Хранится кровь в холодильнике не более пяти часов. Если пренебречь этим правилом, результаты анализа могут быть неточными.
3. За неделю до сдачи биоматериала следует прекратить прием любых лекарств.
4. Нельзя сдавать кровь после приема алкогольных напитков.
5. При наличии хронических инфекционных или воспалительных заболеваний процедура переносится до тех пор, пока человек полностью не выздоровеет.

Обязательно во время процедуры необходимо соблюдать по возможности максимальную стерильность. Поэтому важно сдавать анализы только в проверенных клиниках под руководством опытного специалиста. Следует помнить, что минимальное попадание посторонних микроорганизмов может дать неправильный результат. Во избежание этого, доктор может назначить повторное исследование.

Чтобы сдать кровь на анализ, больной должен не принимать пищу более шести часов. Лучше всего проходить процедуру утром натощак. Кровь забирается из локтевой вены через одноразовую иглу сразу в стерильную пробирку. Туда же вводится антикоагулянт, чтобы кровь не свернулась. Смешивать содержимое пробирки следует осторожно, не допуская резких движений.

Если кровь была взята вне лаборатории, ее надо немедленно доставить лаборанту. Для проведения анализа на туберкулез она должна храниться не более пяти часов. По истечении этого времени результат может быть неточным. Взятие материала вне лаборатории допускается только в том случае, если пациент не может приехать в больницу по состоянию здоровья. Например, он лежачий, и нет возможности нанять соответствующий транспорт.

Результат ПЦР может быть либо положительным, либо отрицательным. Положительный означает присутствие бактерии в организме. Отрицательный свидетельствует о том, что она отсутствует. Хотя не всегда положительный результат говорит о туберкулезе. Он может быть ошибочным, поэтому для подтверждения диагноза требуется пройти дополнительные диагностические тесты.

Вся остальная информация сложна для восприятия больного, и ею занимается специалист. При положительном результате врач назначает необходимое лечение.

Цена процедуры может отличаться в зависимости от медицинского центра, где она проводится. Подробнее в нижерасположенной таблице.

Метод ПЦР для анализа на туберкулез сравнительно новый, и многие пациенты с ним еще не знакомы. В большинстве случаев больные предпочитают Манту и флюорографию. Но, как показывает практика, этот способ диагностики более эффективный и в конечном итоге полностью себя окупает.

Отсутствие противопоказаний и быстрота выполнения делает его привлекательным по сравнению с другими анализами. Медицина не стоит на месте и этот метод с каждым разом усовершенствуется и становится все более надежным.

источник